任忠國

目前國內(nèi)血站檢測抗-HCV的方法，多為間接ELISA法。間接ELISA檢測獻血者血漿的加樣量僅10 μl，加樣量非常小，這就要求我們的加樣系統(tǒng)必須十分精確，以保證檢測結(jié)果的準確性。在實際工作中，我們多采用自動化設(shè)備來檢測，而自動化儀器加樣的方式也可以分為兩種，一種是直接將標本加注到HCV稀釋液中，另一種是將標本加注到稀釋液后，再采用反復(fù)吸打的方式進行混合，筆者發(fā)現(xiàn)采用不同的加樣方式，對檢測抗-HCV的結(jié)果有著較大的影響，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 陰性標本:經(jīng)本站兩家試劑檢測的抗-HCV陰性獻血者標本。弱陽性標本:采用抗-HCV質(zhì)控品(0.5NCU/ml)，北京康徹思坦公司，批號:201105003。

ELISA抗-HCV試劑:廈門新創(chuàng)試劑，批號:2011115824。

1.2 儀器 全自動酶免分析系統(tǒng):AT PLUS2、FAME24/20瑞士哈米爾頓公司。

1.3 方法 采用同一廠商試劑，采用不同的加樣方式進行加樣，在同一臺FAME后處理中進行檢測。

加樣方式:混合方式:吸取10 μl標本，加入相應(yīng)的酶標孔HCV稀釋液中，并反復(fù)吸打一次。每板加40份陰性標本和40份弱陽性標本。未混合方式:吸取10 μl標本，直接加入相應(yīng)的酶標孔HCV稀釋液中。每板加40份陰性標本和40份弱陽性標本。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 產(chǎn)生數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計分析，配對資料采用t檢驗，P＜0.05為差異，有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同加樣方式檢測結(jié)果比較，見表1

表1 不同加樣方式檢測結(jié)果比較(S/CO值)。

3 討論

兩種加樣方式中，對于確定為陰性的標本，結(jié)果并無影響(P＞0.05)，但對于弱陽性標本，本文中主要以0.5NCU/ml的質(zhì)控品代替弱陽性標本進行試驗，結(jié)果差異顯著(P＜0.01)。這種差異的出現(xiàn)，筆者認為可能原因如下:①混合加樣方式，使標本在稀釋液中得到充分混合，減少了標本在稀釋液中自由擴散達到混勻的時間。②加樣過程中，處理器加樣針尖處可能由于液體的表面張力的作用而存在液滴，在不采用混合加樣模式下，該存留的液滴將使相對加樣誤差達到0.4%以上[1]。由于血漿與水具有不同的粘滯系數(shù)，所以在加入血漿等粘滯系數(shù)較大的液體時，這種誤差會更加明顯，正是這種誤差造成了檢測結(jié)果的差異。經(jīng)筆者深入試驗發(fā)現(xiàn)，如果采用未混合加樣方式，加樣量12 μl約可達到混合加樣方式檢測結(jié)果的S/CO值。

有學(xué)者的研究結(jié)果表明，血站篩檢獻血者血液時，應(yīng)將抗HCV ELISA的陽性判斷值下限20%，即0.8，這對于減少HCV的經(jīng)輸血傳播有重要意義[2]。也就是說，對于ELISA檢測接近cut-off值的，會有“灰區(qū)”標本的存在。對于這種標本，如采用未混合加樣方式檢測抗-HCV，很可能會判斷為陰性，而采用混合加樣方式則有可能檢出。所以對于弱陽性標本，尤其是灰區(qū)標本來講，混合加樣方式會比未混合加樣方式增加檢出率。

對于ELISA檢測實驗中試劑的平衡時間、溫度、洗板等原因?qū)z測結(jié)果的影響，多見諸文獻報導(dǎo)[3]，但對于加樣方式對間接ELISA法檢測抗-HCV結(jié)果的影響未見深入探討。

HCV主要經(jīng)血液途徑傳播，PTH 90%是 HCV[4]?？?HCV的檢測已成為重要的防止HCV經(jīng)輸血傳播的手段之一。目前國內(nèi)血站系統(tǒng)檢測抗-HCV多為第三代ELISA間接法試劑，該種試劑采用樣本量10 μl加入到100 μl樣本稀釋液中，加入樣本量較小。建議如有可能，在抗-HCV檢測過程中，應(yīng)采用加入標本后并進行混合的加樣方式，以增加弱陽性標本的檢出。

[1]李金明.臨床酶免疫測定技術(shù).北京:人民軍醫(yī)出版社，2006:140.

[2]鄧巍，王露楠，李金明.丙型肝炎病毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗陽性判斷值在獻血員血液篩檢中的意義.中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志，2004，27(10):664.

[3]閔志軍，張力超，張建偉，等.試劑盒平衡時間對抗-HCV檢測結(jié)果的影響因素分析.臨床血液學(xué)雜志，2010，23(12):713-715.

[4]馬現(xiàn)君，陳元鋒，楚中華，等.無償獻血者不同人群抗HCV流行情況調(diào)查研究.臨床血液學(xué)雜志，2008，21(4):195-196.