蔡麗芳,肖琳琳,吳 寧,胡 宇,黃偉明

(福建省莆田市第一醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,福建莆田,351100)

胃癌是中國消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,死亡率高居各種惡性腫瘤的第2位[1]。近年輔助化療能提高胃癌術(shù)后生存,是胃癌綜合治療的重要手段之一,但總體療效并不理想[2-3]。多藥耐藥(MDR)現(xiàn)象是導(dǎo)致胃癌化療失敗的直接原因[4]。由于MDR的發(fā)生機(jī)制極為復(fù)雜,存在眾多的難點(diǎn)和疑點(diǎn),因此,解決腫瘤的多藥耐藥問題就益發(fā)迫切。MDR相關(guān)蛋白是腫瘤耐藥研究的一大進(jìn)展,這些蛋白與胃癌生物學(xué)行為、化療敏感性和評(píng)估預(yù)后有著緊密的聯(lián)系。因此,本研究探討了多藥耐藥因子在胃癌中表達(dá)的相關(guān)性及其臨床意義,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 臨床資料

收集2005年6月—2011年6月在本院行手術(shù)治療的64例胃癌患者的切除標(biāo)本,其中男42例,女22例,年齡40～68歲。按組織學(xué)分級(jí):高分化6例,中分化28例,低分化27例,未分化4例。TNM分期:Ⅰ期3例,Ⅱ期21例,Ⅲ32例,Ⅳ期8例。按病灶直徑:<5 cm 33例,>5 cm 31例,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況:陽性38例,陰性26例。納入標(biāo)準(zhǔn):實(shí)驗(yàn)所用蠟塊標(biāo)本取自本院病理科,均經(jīng)術(shù)后病理及胃鏡病理確診胃癌;術(shù)前均未進(jìn)行放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的治療。

將胃癌標(biāo)本固定、包埋、蘇木精-伊紅染色(HE)染色、病理分類。采用鏈酶抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學(xué)法(SP法)檢測(cè)P-糖蛋白(P-gp)、p53、谷胱甘肽 S 轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π)。由2位病理醫(yī)師分別雙盲閱片并記錄,每張切片隨機(jī)取5個(gè)400倍視野,每視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞,取平均值。P-gp和GST-π以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)染棕黃色為陽性,p53以細(xì)胞核染為棕黑色為陽性,陽性細(xì)胞>30%為陽性,以癌旁黏膜為陰性對(duì)照。

結(jié)果見表1、2。

表1 P-gp、p53、GST表達(dá)與胃癌病理因素之間的關(guān)系[n(%)]

表2 P-gp、p53和GST-表達(dá)與胃癌2年無病生存時(shí)間的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

化療具有清除術(shù)后殘余腫瘤細(xì)胞、預(yù)防腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的作用。國外統(tǒng)計(jì)資料表明[5],90%腫瘤患者的死亡不同程度受到耐藥的影響。胃癌是耐藥性較強(qiáng)的惡性腫瘤,目前其化療有效率不足50%[6]。腫瘤細(xì)胞一旦對(duì)某種化療藥物產(chǎn)生了耐藥作用,即可對(duì)其他結(jié)構(gòu)、細(xì)胞靶點(diǎn)、作用機(jī)制的抗癌藥物也產(chǎn)生耐藥性,這一現(xiàn)象稱為MDR。

P-gp是由位于7q21d的MDR-1基因編碼的產(chǎn)物,分子量 170 kD,故稱為 P170糖蛋白。P-gp跨膜結(jié)構(gòu)可形成藥物通道,具有“藥泵”作用,依靠三磷酸腺苷(ATP)釋放能量,逆濃度梯度泵出細(xì)胞外,降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度,從而使化療藥物的細(xì)胞毒作用減少甚至消失,誘發(fā)MDR發(fā)生。本研究中,胃癌組織 P-gp表達(dá)率為 75.0%,與 Hu等[7]的研究結(jié)果基本一致。P-gp高表達(dá)的腫瘤對(duì)長春新堿、長春花堿、阿霉素等生物堿類高度耐藥,可見本組病例可能對(duì)上述抗腫瘤藥存在不同程度的耐藥。Shi等[8]的研究表明,P-gp高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān),MDR與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切,推測(cè)腫瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移過程中發(fā)生細(xì)胞黏附和產(chǎn)生多藥耐藥現(xiàn)象可能有某種共同的途徑。關(guān)云艷等[5]的研究證實(shí),P-gp在向細(xì)胞外泵出藥物時(shí),能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞游走、著床,上調(diào)金屬蛋白酶的數(shù)量和活性,增加CD44的表達(dá),共用提高腫瘤侵襲能力及耐藥性。本研究顯示,P-gp高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有相關(guān)性,提示胃癌P-gp高表達(dá)容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,預(yù)后差[9]。

p53是一段16～20 kb的DNA,分子量約53 kDa,故命名為p53,分為野生型和突變型兩種。野生型p53控制細(xì)胞周期和誘導(dǎo)凋亡,但半衰期較短,組織含量低,因此臨床能夠檢測(cè)的均為突變型p53。突變型p53失去抑制細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡作用,促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展。p53基因突變可發(fā)生在胃癌的早期,即居于腸化生階段的癌前病變過程中,有助于胃癌的早期診斷[10]。突變型p53能夠增強(qiáng)MDR基因表達(dá),介導(dǎo)大量P-gp表達(dá),增加腫瘤耐藥性[11]。本研究顯示,p53蛋白與P-gp呈正相關(guān),兩者存在協(xié)同關(guān)系,同時(shí)與預(yù)后顯著相關(guān),與Oliver等[12]的研究結(jié)果一致。p53蛋白表達(dá)與病灶大小關(guān)系尚無統(tǒng)一說法,Tzanakis等[13]認(rèn)為,p53蛋白高表達(dá)與大病灶密切相關(guān),而本研究未發(fā)現(xiàn)p53蛋白表達(dá)與病灶大小相關(guān)。本研究胃癌組織中p53高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期存在相關(guān)性,說明突變型p53對(duì)癌細(xì)胞增殖抑制減弱,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移,是胃癌惡性程度高的標(biāo)志。

GST-π是一組具有解毒和結(jié)合蛋白功能的同工酶家族,分為 α、β、γ、π、μ、θ及膜結(jié)合微粒體 。GST-π是由GST-π超基因家族編碼基因的相應(yīng)蛋白,目前認(rèn)為與MDR關(guān)系最密切。其表達(dá)在許多癌前病變、癌組織及癌細(xì)胞系中高表達(dá)并參與MDR的形成。通過催化谷胱甘肽與親電物質(zhì)相結(jié)合,本身也可與親脂性細(xì)胞毒性物質(zhì)結(jié)合形成GS-X,增加其水溶性,將抗腫瘤藥物如阿霉素、環(huán)磷酰胺及順鉑等烷化劑類藥物,從尿液中排出或代謝為無毒性醇類物質(zhì),從而保護(hù)癌細(xì)胞;還可促進(jìn)DNA修復(fù),導(dǎo)致MDR發(fā)生[14]。Shi等[8]研究證實(shí),GST-π表達(dá)與病理分化程度密切相關(guān)。本研究中低分化胃癌中GST-π表達(dá)率顯著低于高中分化者,提示高中分化者比低分化者更容易產(chǎn)生耐藥,符合臨床上高中分化胃癌對(duì)化療有效率較低,而分化差的神經(jīng)內(nèi)分泌癌、印戒細(xì)胞癌等對(duì)化療敏感現(xiàn)象[15]。本研究未發(fā)現(xiàn)GST-π表達(dá)與2年DFS的相關(guān)性,可能與本選取的標(biāo)本數(shù)量不足或多數(shù)為中晚期有關(guān)。

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