朱軍義

卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白表達(dá)及其臨床意義

朱軍義

目的探討卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)以及其臨床意義。方法對我院2006～2012年病理科保留的117份卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化學(xué)方法檢測卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)。結(jié)果在正常的卵巢組織中，Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為23.53%；在良性腫瘤組織中的陽性表達(dá)率為4.35%；在卵巢癌組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為90.91%；在卵巢交界性組織腫瘤中的陽性表達(dá)率為83.33%。卵巢癌、卵巢交界性腫瘤組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢及卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。結(jié)論Bub1蛋白的表達(dá)異常是卵巢癌發(fā)生的機(jī)制之一，與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有關(guān)系。

卵巢上皮性腫瘤； Bub1蛋白； 免疫組化

伴隨著生物細(xì)胞學(xué)的快速發(fā)展，人們漸漸認(rèn)識到紡錘體檢查點在細(xì)胞分裂周期中的重要意義。而在細(xì)胞的有絲分裂中，參與紡錘體檢查點功能的蛋白有Mad(mitotic arrest deficient/defective)家族蛋白，包括Mad1、Mad2、Mad3和Bub(budding uninhibited by benzimidazole/benomyl)家族蛋白，包括Bub1、Bub2、Bub3等。Bub1作為紡錘體檢測點蛋白，具有通過染色體不穩(wěn)定性和非整倍體傳代促進(jìn)腫瘤發(fā)生的作用[1]。因此，紡錘體的失控是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存在主要原因之一。為此，我院通過對117份卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化學(xué)方法檢測卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)，探討B(tài)ub1在臨床上的意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 我院2006～2012年病理科保留的117份卵巢標(biāo)本中，正常卵巢組織21份；卵巢良性腫瘤組織23份；交界性漿液性瘤組織18份；卵巢癌組織55份，其中包括子宮內(nèi)膜癌6例；粘液性癌16例；移行細(xì)胞癌16例；漿液性囊腺癌17例。在本組117份卵巢組織標(biāo)本中，患有卵巢癌的患者中，有11例患者伴有腹水，有21患者伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，所有卵巢癌患者在術(shù)前均無放療、化療史。

1.2方法 所有標(biāo)本通過4%多聚甲醛進(jìn)行固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片4 μm。②將石蠟切片進(jìn)行常規(guī)二甲苯脫蠟及梯度酒精脫水。③將玻片擦干凈后，滴入3%H2O2，將內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行滅活。檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)30 min。④在玻片上滴入15%正常山羊血清工作液恒溫封閉10 min。⑤第一抗體4℃過夜。⑥生物素標(biāo)記第二抗體溫室作用下30 min。⑦滴入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，恒溫30 min。⑧滴加適量的DAB/H2O2進(jìn)行反應(yīng)染色，在顯微鏡下控制染色深度及背景，在滿意后及時用水充分進(jìn)行沖洗，蘇木素復(fù)染，二甲苯透明，中性樹膠封片。鏡下觀察。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Bub1蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)，部分細(xì)胞核著色，染成黃或者棕黃色顆粒。再采用雙評分法進(jìn)行判定。陽性程度判定：在光學(xué)顯微鏡200倍視野下觀察卵巢組織標(biāo)本，在每張切片隨機(jī)觀察5個視野，未見陽性細(xì)胞為(一)，記作0分；陽性細(xì)胞數(shù)/100個細(xì)胞<25%，記作1分；陽性細(xì)胞數(shù)/100個細(xì)胞25%～50%，記作2分；陽性細(xì)胞數(shù)/100個細(xì)胞≥50%，記作3分。陽性細(xì)胞面積與染色強(qiáng)度積分的相加結(jié)果作為判定標(biāo)準(zhǔn)：0分記作不著色；1分記作呈淡黃色；2分記作棕黃色；3分記作棕褐色。將上述兩項判定得分做和，0分為陰性；1、2分為弱陽性；3、4分為陽性；5、6分為強(qiáng)陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)通過SPSS 13.0軟件統(tǒng)計系統(tǒng)進(jìn)行處理，計量資料用t檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗。

2 結(jié)果

Bub1蛋白在不同的病變卵巢組織中的表達(dá)率是不同的。在正常的卵巢組織中，Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為23.53%；在良性腫瘤組織中的陽性表達(dá)率為4.35%；在卵巢癌組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為90.91%；在卵巢交界性組織腫瘤中的陽性表達(dá)率為83.33%。卵巢癌、卵巢交界性腫瘤組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢及卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。具體見表1。

表1 Bub1蛋白在不同的病變卵巢組織中的表達(dá)

3 討論

細(xì)胞的有絲分裂是一個嚴(yán)格調(diào)控、高度有序的周期，為確保有絲分裂過程中的忠實性，通常是通過細(xì)胞內(nèi)的固定檢查點來檢查完成的。而有絲分裂的檢查點又稱“紡錘體檢查點”，Bub1作為紡錘體檢查點的平臺蛋白，可能是紡錘體檢查點其他組分定位于紡錘體檢查點的基礎(chǔ)[2]。有研究表明，Bub1可以通過直接作用或者以形成復(fù)合物的形式來對其他重要的紡錘體檢查點蛋白進(jìn)行調(diào)控，從而影響細(xì)胞周期的進(jìn)程。通過對細(xì)胞內(nèi)BUBl基因表達(dá)的研究，在探討染色體不分離的分子機(jī)制具有十分重要的意義[3]。

通過本組研究結(jié)果表明，Bub1蛋白與卵巢癌的發(fā)生有著密切關(guān)系，通過實驗數(shù)據(jù)表明，卵巢癌組織中的Bub1的陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織的陽性表達(dá)率，且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這個結(jié)果表明，Bub1蛋白陽性表達(dá)率的增高可能與卵巢上皮性腫瘤的惡性發(fā)展有關(guān)系。

綜上所述，Bub1蛋白的異常表達(dá)可能是卵巢癌的發(fā)病機(jī)制之一，與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。通過對Bub1的功能探討和紡錘體檢查點的作用機(jī)制的探討，對人們治療卵巢癌提供了方向與臨床依據(jù)，對于疾病的治愈有著重大意義。

[1] 呂煊.卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)及其意義.中華婦產(chǎn)科雜志，2011,46(8)：627-629.

[2] 周婷.人Bub l基因shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其對人卵巢癌細(xì)胞SKOV3紫杉醇敏感性的影響.華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2010,39(2)：171-188.

[3] 施瓊.微小RNA對胚胎細(xì)胞BUBl基因的表達(dá)抑制. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007,32(1)：44-51.

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