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        卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白表達(dá)及其臨床意義

        2013-10-27 07:11:27朱軍義
        中國實(shí)用醫(yī)藥 2013年12期
        關(guān)鍵詞:紡錘體檢查點(diǎn)陽性細(xì)胞

        朱軍義

        卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白表達(dá)及其臨床意義

        朱軍義

        目的探討卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)以及其臨床意義。方法對(duì)我院2006~2012年病理科保留的117份卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化學(xué)方法檢測(cè)卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)。結(jié)果在正常的卵巢組織中,Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為23.53%;在良性腫瘤組織中的陽性表達(dá)率為4.35%;在卵巢癌組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為90.91%;在卵巢交界性組織腫瘤中的陽性表達(dá)率為83.33%。卵巢癌、卵巢交界性腫瘤組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢及卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。結(jié)論Bub1蛋白的表達(dá)異常是卵巢癌發(fā)生的機(jī)制之一,與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有關(guān)系。

        卵巢上皮性腫瘤; Bub1蛋白; 免疫組化

        伴隨著生物細(xì)胞學(xué)的快速發(fā)展,人們漸漸認(rèn)識(shí)到紡錘體檢查點(diǎn)在細(xì)胞分裂周期中的重要意義。而在細(xì)胞的有絲分裂中,參與紡錘體檢查點(diǎn)功能的蛋白有Mad(mitotic arrest deficient/defective)家族蛋白,包括Mad1、Mad2、Mad3和Bub(budding uninhibited by benzimidazole/benomyl)家族蛋白,包括Bub1、Bub2、Bub3等。Bub1作為紡錘體檢測(cè)點(diǎn)蛋白,具有通過染色體不穩(wěn)定性和非整倍體傳代促進(jìn)腫瘤發(fā)生的作用[1]。因此,紡錘體的失控是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存在主要原因之一。為此,我院通過對(duì)117份卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化學(xué)方法檢測(cè)卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá),探討B(tài)ub1在臨床上的意義。

        1 資料與方法

        1.1一般資料 我院2006~2012年病理科保留的117份卵巢標(biāo)本中,正常卵巢組織21份;卵巢良性腫瘤組織23份;交界性漿液性瘤組織18份;卵巢癌組織55份,其中包括子宮內(nèi)膜癌6例;粘液性癌16例;移行細(xì)胞癌16例;漿液性囊腺癌17例。在本組117份卵巢組織標(biāo)本中,患有卵巢癌的患者中,有11例患者伴有腹水,有21患者伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,所有卵巢癌患者在術(shù)前均無放療、化療史。

        1.2方法 所有標(biāo)本通過4%多聚甲醛進(jìn)行固定,常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)切片4 μm。②將石蠟切片進(jìn)行常規(guī)二甲苯脫蠟及梯度酒精脫水。③將玻片擦干凈后,滴入3%H2O2,將內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行滅活。檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)30 min。④在玻片上滴入15%正常山羊血清工作液恒溫封閉10 min。⑤第一抗體4℃過夜。⑥生物素標(biāo)記第二抗體溫室作用下30 min。⑦滴入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液,恒溫30 min。⑧滴加適量的DAB/H2O2進(jìn)行反應(yīng)染色,在顯微鏡下控制染色深度及背景,在滿意后及時(shí)用水充分進(jìn)行沖洗,蘇木素復(fù)染,二甲苯透明,中性樹膠封片。鏡下觀察。

        1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Bub1蛋白的陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì),部分細(xì)胞核著色,染成黃或者棕黃色顆粒。再采用雙評(píng)分法進(jìn)行判定。陽性程度判定:在光學(xué)顯微鏡200倍視野下觀察卵巢組織標(biāo)本,在每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野,未見陽性細(xì)胞為(一),記作0分;陽性細(xì)胞數(shù)/100個(gè)細(xì)胞<25%,記作1分;陽性細(xì)胞數(shù)/100個(gè)細(xì)胞25%~50%,記作2分;陽性細(xì)胞數(shù)/100個(gè)細(xì)胞≥50%,記作3分。陽性細(xì)胞面積與染色強(qiáng)度積分的相加結(jié)果作為判定標(biāo)準(zhǔn):0分記作不著色;1分記作呈淡黃色;2分記作棕黃色;3分記作棕褐色。將上述兩項(xiàng)判定得分做和,0分為陰性;1、2分為弱陽性;3、4分為陽性;5、6分為強(qiáng)陽性。

        1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)通過SPSS 13.0軟件統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。

        2 結(jié)果

        Bub1蛋白在不同的病變卵巢組織中的表達(dá)率是不同的。在正常的卵巢組織中,Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為23.53%;在良性腫瘤組織中的陽性表達(dá)率為4.35%;在卵巢癌組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率為90.91%;在卵巢交界性組織腫瘤中的陽性表達(dá)率為83.33%。卵巢癌、卵巢交界性腫瘤組織中Bub1蛋白的陽性表達(dá)率均明顯高于正常卵巢及卵巢良性腫瘤組織(P<0.05)。具體見表1。

        表1 Bub1蛋白在不同的病變卵巢組織中的表達(dá)

        3 討論

        細(xì)胞的有絲分裂是一個(gè)嚴(yán)格調(diào)控、高度有序的周期,為確保有絲分裂過程中的忠實(shí)性,通常是通過細(xì)胞內(nèi)的固定檢查點(diǎn)來檢查完成的。而有絲分裂的檢查點(diǎn)又稱“紡錘體檢查點(diǎn)”,Bub1作為紡錘體檢查點(diǎn)的平臺(tái)蛋白,可能是紡錘體檢查點(diǎn)其他組分定位于紡錘體檢查點(diǎn)的基礎(chǔ)[2]。有研究表明,Bub1可以通過直接作用或者以形成復(fù)合物的形式來對(duì)其他重要的紡錘體檢查點(diǎn)蛋白進(jìn)行調(diào)控,從而影響細(xì)胞周期的進(jìn)程。通過對(duì)細(xì)胞內(nèi)BUBl基因表達(dá)的研究,在探討染色體不分離的分子機(jī)制具有十分重要的意義[3]。

        通過本組研究結(jié)果表明,Bub1蛋白與卵巢癌的發(fā)生有著密切關(guān)系,通過實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,卵巢癌組織中的Bub1的陽性表達(dá)率明顯高于正常卵巢組織的陽性表達(dá)率,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。這個(gè)結(jié)果表明,Bub1蛋白陽性表達(dá)率的增高可能與卵巢上皮性腫瘤的惡性發(fā)展有關(guān)系。

        綜上所述,Bub1蛋白的異常表達(dá)可能是卵巢癌的發(fā)病機(jī)制之一,與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移有密切關(guān)系。通過對(duì)Bub1的功能探討和紡錘體檢查點(diǎn)的作用機(jī)制的探討,對(duì)人們治療卵巢癌提供了方向與臨床依據(jù),對(duì)于疾病的治愈有著重大意義。

        [1] 呂煊.卵巢上皮性腫瘤組織中Bub1蛋白的表達(dá)及其意義.中華婦產(chǎn)科雜志,2011,46(8):627-629.

        [2] 周婷.人Bub l基因shRNA真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其對(duì)人卵巢癌細(xì)胞SKOV3紫杉醇敏感性的影響.華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2010,39(2):171-188.

        [3] 施瓊.微小RNA對(duì)胚胎細(xì)胞BUBl基因的表達(dá)抑制. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2007,32(1):44-51.

        473000 河南省南陽市中心醫(yī)院婦一科

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