胡巧愛

(永康市食品藥品檢驗(yàn)所，浙江永康321300)

中藥制劑往往有一藥多用的效果，這是由于重要的成分錯(cuò)綜復(fù)雜，很難提取和分離。如小兒雙解止瀉顆粒，除止瀉作用外還有解毒清熱即西醫(yī)所說的消炎作用;又例如復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑除利咽抗菌作用外也具有清熱抗菌消腫之效，這都屬于中藥成分的消炎作用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法，分別以黃芩苷和異秦皮靛為指標(biāo)，來建立小兒雙解止瀉顆粒和復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑的成分含量檢測(cè)方法。

1 檢測(cè)儀器與藥劑

1.1 儀器

(1)儀器組一:日本島津產(chǎn)高效液相色譜儀，SPD－10AVP檢測(cè)器，SCL－AVP色譜工作站，LC－10AVP泵，KQ－400DB型超聲波清洗器，ALl04型梅特勒電子分析天平。(2)儀器組二:Agilentl100型高效液相色譜儀，VWD紫外檢測(cè)器，;G131lA四元泵，;G1313A手動(dòng)進(jìn)樣閥，HypersilC18不銹鋼填充柱為色譜柱。

1.2 藥劑

(1)藥劑組一:小兒雙解止瀉顆粒供試品(批號(hào)030404，030405，030406，);黃芩苷對(duì)照品;色譜純?yōu)榱姿?、甲醇、四氫呋?其他分析純。(2)藥劑組二:復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑供試品(批號(hào)083712，083713，083714);異秦皮靛對(duì)照品;色譜純?yōu)橐译?，雙蒸水;其他分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 條件

(1)組一:美國(guó)PhenomenexC18柱;流動(dòng)相為甲醇－水－四氫呋喃 － 磷酸(100:150:25:0.1);流速為 1.0mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng)為287nm;進(jìn)樣量 20μL;理論塔板系數(shù) ＞2500[1]。(2)組二:美國(guó)PhenomenexC18柱;流動(dòng)相為乙腈－0.1%磷酸水溶液(20:85);流速為1.0mL·min－1;檢測(cè)波長(zhǎng)為346nm;進(jìn)樣量 10μL;理論塔板系數(shù) ＞1200[2]。

2.2 實(shí)驗(yàn)方法

2.2.1 供試品藥液的制備

(1)組一:量取供試品10g并將其研細(xì)，準(zhǔn)確稱取0.1g放置在5mL量器內(nèi)，加水1.5mL后使用超聲融化，再加入6mol/L的HCl，充分混合后用水浴加熱6min，靜置20min后離心，去上清液，沉淀后用50%的乙醇溶解再置于50mL的量瓶中，再用50%的乙醇補(bǔ)液至刻度處，充分混合后過濾，續(xù)濾液為供試品溶液。(2)組二:精確量取復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑供試品溶液每次10mL，經(jīng)三氯甲烷萃取共5次，將萃取液合并后蒸干，將析出品加入甲醇溶解，所得液體即供試品溶液，置于25mL的量瓶中。

2.2.2 線性關(guān)系考查

(1)組一:準(zhǔn)確量取乙醇黃芩苷對(duì)照品溶液，用50%溶液稀釋至對(duì)照品溶液，然后以進(jìn)樣量 0.035、0.070、0.105、0.140、0.175、0.210μg 在上述條件下進(jìn)行峰面積測(cè)定，以黃芩苷量(μg)作為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，測(cè)繪標(biāo)準(zhǔn)曲線并得到回歸方程[3]為 Y=453379.5X －42669.1，r=0.996，黃芩苷進(jìn)樣與鋒面積線性關(guān)系良好的范圍為0.031～0.21μg。好的范圍在2.24～71.14μg。(2)組二:準(zhǔn)確量取異秦皮靛對(duì)照品，加甲醇稀釋至對(duì)照品溶液，充分搖勻后，分別精確量取0.05，1.00，2.00，2.00，2.00，4.00mL，分別置于容積為 100，100，100，50，25，25mL 的量瓶中，用甲醇稀釋補(bǔ)液至刻度[4]，充分混合后精確量取各10μL，滴入高效液相色譜儀中進(jìn)行峰面積測(cè)定，同組一的方法得到回歸方程為Y=421.582X+4.569，r=0.998，異秦皮靛進(jìn)樣與峰面積線性關(guān)系良好的范圍在 2.24～71.14μg·mL－1。

2.2.3 精密度試驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取對(duì)照品溶液20μL，連續(xù)5次進(jìn)樣進(jìn)行峰面積測(cè)定，統(tǒng)計(jì)結(jié)果得到RSD=0.71%(n=5)。(2)組二:同組一的做法，得到RSD=1.17%(n=5)。

2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取 20μL 供試品溶液，在 0、2、4、8、12h時(shí)進(jìn)行同樣的測(cè)定，得到的結(jié)論為黃芩苷的峰值基本沒有變化，統(tǒng)計(jì)得到RSD=0.73%。(2)組二:同組一法得到RSD=0.81%。

2.2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

(1)組一:精確稱取5 份0.1g的樣品，按 2.2.1(1)的步驟方法再次制備試劑，同法進(jìn)行提取測(cè)定，得到的結(jié)果為RSD=0.84%(n=5)。(2)組二:與組一同樣原理進(jìn)行組二的重復(fù)性試驗(yàn)，得到的結(jié)果為RSD=1.77%(n=5)。

2.2.6 回收率實(shí)驗(yàn)

(1)組一:準(zhǔn)確量取已經(jīng)實(shí)驗(yàn)過的5份供試品各0.1g，分別加入適量的對(duì)照品，重復(fù)2.2.1(1)步驟，對(duì)溶液進(jìn)行提取制備和測(cè)定，得到的平均回收率[5]為 101.35%，RSD=1.11%(n=5)。

(2)組二:與組一同樣原理對(duì)組二的實(shí)驗(yàn)用品進(jìn)行處理，進(jìn)行組二回收率試驗(yàn)，得到的處理結(jié)果為平均回收率為92.46%，RSD=2 .27%。

2.2.7 測(cè)定樣品

(1)組一:分別取不同批次的樣品精確量取試液5μg，將其注入到高效液相色譜儀中[6]，測(cè)定峰面積并計(jì)算含量，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表1。

表1 小兒雙解止瀉顆粒中黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果(mg/g，%)

(2)組二:同組一相同原理測(cè)定峰面積并計(jì)算藥物含量，得到的結(jié)果見表2。

表2 復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑中異秦皮靛的含量測(cè)定結(jié)果(mg·mL－1，%)

3 結(jié)論

筆者參考相關(guān)文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)其他的藥品檢測(cè)方法對(duì)中藥制劑復(fù)雜的藥物成分無(wú)法有效的分離提取[7]，就更不能對(duì)其藥物成分進(jìn)行分析測(cè)算精確，而使用高效液相色譜法對(duì)小兒雙解止瀉顆粒中黃芩苷的含量測(cè)定及對(duì)復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑中異秦皮靛的含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)的操作步驟簡(jiǎn)單、方便快捷，不需要對(duì)藥物成分進(jìn)行分離，可以直接檢測(cè)成分含量，而且檢測(cè)過程中通過精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重現(xiàn)性試驗(yàn)、回收率實(shí)驗(yàn)、測(cè)定樣品等重重篩查，反復(fù)精確驗(yàn)證，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。高效液相色譜法確實(shí)是檢測(cè)中藥制劑中藥品成分的有效方法。

4 討論

近年來，由于抗生素的濫用導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性逐年增強(qiáng)，消炎藥物的療效越來越不理想，這就使得中藥制劑的消炎效果日益為醫(yī)療工作者所重視。中藥制劑的抗炎效果理想且使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的比率明顯偏低，但是，由于其本身成分復(fù)雜的原因致使中藥制劑無(wú)法在臨床上大量推廣。采用高效液相色譜法檢測(cè)中藥制劑中的消炎成分，高效、便捷、回收率高、可以較高精度地為中藥制劑檢測(cè)藥物成分的含量，是中藥制劑質(zhì)量控制的可靠依據(jù)。

[1]何鵬，劉樂樂，李國(guó)香.HPLC法測(cè)定小兒雙解止瀉顆粒中黃芩苷的含量[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，26(1):46-47

[2]嚴(yán)喜鸞，朱建航，張寶.高效液相法測(cè)定復(fù)方腫節(jié)風(fēng)噴霧劑中異秦皮靛的含量[J].江落中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，17(6):32

[3]高紅梅，張嘯環(huán).高效液相色譜法測(cè)定解郁安神顆粒中梔子苷的含量[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，27(1):12-13

[4]井偉，唐熙，呂水源，等.高效液相色譜法檢測(cè)食品接觸產(chǎn)品中的三聚氰胺及其衍生物的遷移量[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2011，30(3):269-273

[5]付建武，彭紅，周玉春，等.高效液相色譜波長(zhǎng)轉(zhuǎn)換法測(cè)定西紅花苷－1和梔子苷的含量[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20(12):2939

[6]江西省貴溪縣衛(wèi)生局腫節(jié)風(fēng)科研領(lǐng)導(dǎo)小組.草藥腫節(jié)風(fēng)的研究[J].中草藥通訊，1972，(6):41-47

[7]郭平，李章萬(wàn)，蔣學(xué)華.HPLC測(cè)定12種中成藥制劑中黃芩苷的含量[J].藥物分析雜志，1995，15(5):13-16