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        五藤痛風(fēng)飲對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型的 IL-8、TNF-α 的影響

        2013-09-25 11:00:38王曉璐徐靜李慧郭慧梁華
        中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用 2013年13期
        關(guān)鍵詞:秋水仙堿痛風(fēng)性痛風(fēng)

        王曉璐 徐靜 李慧 郭慧 梁華

        隨著我國經(jīng)濟的發(fā)展人們飲食結(jié)構(gòu)的改變,痛風(fēng)已經(jīng)由過去的罕見病變成了當(dāng)今的常見病。痛風(fēng)是嘌呤代謝紊亂所導(dǎo)致的疾病,其主要臨床特點為血尿酸增高及尿酸鹽沉積導(dǎo)致的痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石沉積、慢性間質(zhì)性腎炎和尿酸腎結(jié)石形成[1]。痛風(fēng)已經(jīng)成為了當(dāng)今世界中老年男性的常見?。?],患病率呈逐年增高的趨勢[3],并且出現(xiàn)了發(fā)病年齡低齡化的特點[4]。本實驗通過對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠模型關(guān)節(jié)液內(nèi)IL-8、TNF-α水平變化的研究,探討五藤痛風(fēng)飲治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機制。

        1 試驗過程

        1.1 實驗動物 健康清潔級wistar大鼠60只,全部為雄性,體重為(200±20)g,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司。實驗動物飼養(yǎng)環(huán)境:室溫20℃ ~22℃,空氣新鮮,自由攝食、飲水,飼固體飼料。分籠飼養(yǎng)。

        1.2 實驗藥品 中藥組五藤痛風(fēng)飲(忍冬藤、海風(fēng)藤、雞血藤、絡(luò)石藤 、青風(fēng)藤、穿山龍、秦艽、土茯苓、萆薢、威靈仙等組成。將藥物加水適量,煎制濃度為7.2 g/ml的水煎液);西藥組秋水仙堿,配制成濃度為0.03 mg/ml的溶液。

        1.3 試劑及設(shè)備 ①尿酸鈉溶液的制備取250 mg MSUC顆粒加入9 ml生理鹽水,1 ml吐溫80,加溫攪拌,制成濃度為25 mg/ml;②IL-8、TNF試劑盒;③0.9%氯化鈉注射液;④腺嘌呤制成10 mg/ml的乳濁液,現(xiàn)用現(xiàn)配。

        1.4 實驗動物分組 將60只Wistar大鼠隨機分為6組,分別為空白組,關(guān)節(jié)炎模型組,中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組,西藥對照組,每組10只。每只均使用苦味酸染色標(biāo)記。

        1.5 實驗步驟 60只大鼠正常飼養(yǎng)一周后開始給藥,空白組常規(guī)飼養(yǎng),中藥各組給藥:(7.2 g/ml、3.6 g/ml、1.8 g/ml)五藤痛風(fēng)飲煎液+腺嘌呤各2 ml,西藥組給藥:秋水仙堿+腺嘌呤各2 ml,模型組給藥:9%生理鹽水+腺嘌呤各2 ml,空白組給藥:9%生理鹽水2 ml,均為灌胃給藥;第2、3、4天給藥同第一天;第5天灌胃給藥30 min后在各鼠右踝關(guān)節(jié)處,立即以碘酒消毒局部,用6號滅菌注射針在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)背側(cè),從45°方向插入至脛跗關(guān)節(jié)腔內(nèi),注射0.2 ml MSU混懸液;第6、7天給藥同第5天。

        1.6 取材 第7天給藥后30 min取材:10%水合氯醛麻醉,頸動脈取血,脫頸處死后取踝關(guān)節(jié)滑膜組織,制備血清和組織勻漿,-70℃保存待測。

        2 試驗結(jié)果

        五藤痛風(fēng)飲對大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)液TNF-α、IL-8含量影響:見表。

        表1 各組藥物對關(guān)節(jié)液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

        表1 各組藥物對關(guān)節(jié)液中IL-8、TNF-α水平的影響(±s)

        注:與模型組比較:▲P<0.01

        分組 n IL-8(pg/ml) TNF(pg/ml)空白 10 0.49±0.16▲ 0.54±0.07▲模型 10 2.49±0.35 2.14±0.50秋水仙堿 10 0.72±0.16▲ 0.87±0.11▲中藥高劑量 10 0.84±0.16▲ 0.95±0.14▲中藥中劑量 10 1.88±0.25▲ 1.31±0.26▲中藥低劑量10 2.27±0.38 1.84±0.36

        對關(guān)節(jié)液中IL-8水平的影響:與空白組比較,模型組的IL-8水平有明顯升高(P<0.01),說明本次試驗造模成功;與模型組比較,秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的IL-8水平均有明顯下降(P<0.01),中藥低劑量組的無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);中藥高中兩個劑量組雖無顯著差異,但也存在著量效關(guān)系(高劑量>中劑量)。對關(guān)節(jié)液中TNF-α水平的影響:與空白組比較,模型組的TNF-α水平明顯升高(P<0.01),說明本次試驗造模成功;與模型組比較,秋水仙堿組、中藥高劑量組、中藥中劑量組的TNF-α水平有明顯下降(P<0.01),中藥低劑量組無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);中藥高中兩個劑量組雖無顯著差異,但也存在著量效關(guān)系(高劑量>中劑量)。

        3 討論

        現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認為痛風(fēng)急性發(fā)作其主要的病理改變是尿酸鈉晶體(MSUC)在關(guān)節(jié)周圍組織沉積引起急性炎癥反應(yīng)。沉積在關(guān)節(jié)腔中的尿酸鹽結(jié)晶(MSU)被吞噬細胞、白細胞吞噬后,破壞細胞的溶酶體等細胞器,釋放出蛋白水解酶、激酶、組胺、趨化因子等物質(zhì),引起局部血管擴張和通透性增加、血漿滲出、水腫、發(fā)熱、白細胞聚集等炎癥反應(yīng),促使炎癥細胞釋放白細胞介素、腫瘤壞死因子等細胞因子,激活環(huán)氧化酶-2(COX-2)合成前列腺素類,導(dǎo)致炎癥范圍進一步擴大,進而發(fā)生急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎[5]。總的來講,尿酸鹽在滑膜組織沉積并引起炎癥介質(zhì)釋放是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)作的基礎(chǔ),PGE2、白細胞三烯 B4(LTB4)、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α 等是參與炎癥過程的重要因子。本實驗研究發(fā)現(xiàn),五藤痛風(fēng)飲對大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型關(guān)節(jié)液TNF-α、IL-8的水平有明顯下調(diào)作用,由此推測五藤痛風(fēng)飲在消除炎癥因子方面有一定的作用??傊?,五藤痛風(fēng)飲對大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎發(fā)揮作的機制之一,可能與其降低TNF-α、IL-8的水平起到抗炎作用有關(guān)。

        [1] Richette P,Bardin T.Gout.Lancet,2010,375(9711):318-328.

        [2] 南海榮.高尿酸血癥和痛風(fēng)的遺傳學(xué)研究進展.國外醫(yī)學(xué)內(nèi)分泌學(xué)分冊,2002,22(5):326.

        [3] Kim KY,Ralph schumaeher H.Hunsehe E,et al.A literature review of the epidemiology and treatment of acute gout.Clin Ther,2003,25(6):1593-1617.

        [4] Choi HK,Curhan G.Gout:epidemiology and lifestyle choices.Curr Opin Rheumato1.2005,17(3):341-345.

        [5] Ponce L,Arjona M,Blanco G.The effect of montelukast in a model of gouty arthritis induced by sodium monourate crystals.Invest Clin,2011,52(1):15.

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