韓映晨 具善姬 李貞順

狗骨膠古本草未載。近年對其有所報道，在化學(xué)，藥理方面均有研究?！渡綎|藥用動物》［1］、《內(nèi)蒙古藥用動物》［2］、《中國動物藥志》［3］均有收載，現(xiàn)今廣泛應(yīng)用于臨床。

參照《中華人民共和國藥典2010年版一部》中收載的鹿角膠［4］、阿膠［5］、龜甲膠［6］三個品種的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的方法，對狗骨膠的鑒別做如下實驗工作。

1 儀器與試藥及實驗前準(zhǔn)備

1.1 儀器與試藥 定量毛細(xì)管(美國 Drummond公司)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠)；CQX25-06型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司)。甘氨酸(110735-200102)、蘇氨酸(110889-200102)、精氨酸(110872-200204)、亮氨酸(110876-200204)、纈氨酸(110874-9802)、組氨酸(110890-200001)、苯 丙 氨 酸 (111615-200301)、丙 氨 酸(110873-9802)、谷氨酸(111576-200201)、瓜氨酸(110873-9802)、賴氨酸(140673-200405)、酪氨酸(111577-200201)、脯氨酸(111659-200301)對照品均由中國藥品生物制品檢定所提供；狗骨膠(批號為090601，090602，090603)及實驗用的各味藥材和輔料由吉林敖東集團(tuán)琿春恒源藥業(yè)股份有限公司提供；其他化學(xué)試劑均為分析純。

1.2 實驗前準(zhǔn)備 陰性對照藥品的制備：除去狗骨外，取其他各味輔料，按本品處方比例及制備工藝自行配制而成的，為陰性對照，即空白實驗。

陽性對照藥品的制備：按本品處方比例及制備工藝自行配制而成的，為陽性對照，即自制實驗。

2 試驗方法及結(jié)果

2.1 狗骨膠的理化鑒別 取本品粉末2 g，加水10 ml使溶解，濾過，取濾液1 ml，加茚三酮試液0.5 ml，置水浴上加熱15 min，溶液顯藍(lán)紫色(見圖-1)。另取濾液1 ml，加新制的1%硫酸銅溶液和40%氫氧化鈉溶液(1：1)的混合液數(shù)滴，振搖，溶液顯紫紅色。(見圖-2)，結(jié)果：三批供試品均呈正反應(yīng)，陽性對照也呈正反應(yīng)，陰性對照不呈正反應(yīng)，說明該實驗可用于狗骨膠的鑒別。

2.2 狗骨膠中氨基酸的薄層鑒別 取本品粉末0.2 g，加甲醇2 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液，作為供試品溶液。另取陽性對照藥品及除去狗骨膠的陰性對照藥品，同法制成作為陽性對照溶液及陰性對照溶液。再取甘氨酸對照品，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典一部2010年版附錄VI B)試驗，吸取上述各種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(3∶1∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，而陰性對照溶液無干擾，陽性對照溶液由于受到實驗室制備設(shè)備等的影響，與供試品略顯有不同之處，列入正文。(見圖-3)

圖1 狗骨膠的理化鑒別

圖2 狗骨膠的理化鑒別

圖3 狗骨膠中氨基酸薄層色譜圖

圖4 狗骨膠中氨基酸薄層色譜圖

圖5 狗骨膠中各種氨基酸薄層色譜圖

3 討論

為了驗證方法的可行性，還做過如下實驗：

3.1 供試品制備方法的選擇 1)取本品粉末0.2 g，加甲醇2 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液，作為供試品溶液。2)取本品粉末0.2 g，加70%的乙醇2 ml，超聲處理15 min，濾過，濾液作為供試品溶液。3)取本品粗粉0.2 g，置錐形瓶中，加6 mol/L鹽酸溶液8 ml，加熱回流2 h，加水6 ml，搖勻，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇5 ml使溶解，作為供試品溶液。

薄層層析與檢視：同標(biāo)準(zhǔn)方法。經(jīng)實驗證明：甲醇提取液與70%乙醇提取液的展開結(jié)果基本上相同，而經(jīng)鹽酸溶液水解后用甲醇溶解的提取液明顯增加了斑點和每個斑點的量。說明三種提取方法皆可行，因此考慮提取方法的簡便，易于在薄層板上點樣等等因素，故選擇了甲醇作為制備供試品的溶液，并選擇超聲處理的方式制備供試品溶液，使方法更加簡便易行。(見圖-4)

3.2 對照品的選擇 甘氨酸(110735-200102)、蘇氨酸(110889-200102)、精氨酸(110872-200204)、亮氨酸(110876-200204)、纈氨酸(110874-9802)、組氨酸(110890-200001)、苯丙氨酸(111615-200301)、丙氨酸(110873-9802)、谷氨酸(111576-200201)、瓜氨酸(110873-9802)、賴氨酸(140673-200405)、酪氨酸(111577-200201)、脯氨酸(111659-200301)對照品，加甲醇分別制成約含0.5 mg/ml溶液。薄層層析與檢視：同標(biāo)準(zhǔn)方法。經(jīng)實驗證明：各種氨基酸在此條件下進(jìn)行展開，有些是相互重疊的，因此參考相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，選擇甘氨酸作為對照品。(見圖-5)

［1］ 紀(jì)加義，等．山東藥用動物．山東科學(xué)技術(shù)出版社，1979：402.

［2］ 趙肯堂，等．內(nèi)蒙古藥用動物．內(nèi)蒙古人民出版社，1981：446.

［3］ 高士賢，等．中國動物藥志．吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1996：868.

［4］ 國家國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)．化學(xué)工業(yè)出版社，2010：302.

［5］ 國家國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)．化學(xué)工業(yè)出版社，2010：175.

［6］ 國家國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)．化學(xué)工業(yè)出版社，2010：169.