史 琳 張安文 羅 宇 趙時梅 任傳偉 楊燕初

廣西科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理教研室，廣西柳州 545005

甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中發(fā)病率最高的組織學(xué)類型，已有研究指出細胞周期調(diào)控異常引發(fā)的DNA鏈結(jié)構(gòu)改變是乳頭狀癌的病因之一[1]。CDK2以cyclin-CDK復(fù)合物的形式參與調(diào)控細胞周期，是DNA復(fù)制的重要啟動因子。p27是CDKI家族中的一份子，能通過負性調(diào)控cyclin-CDK復(fù)合物來防止DNA異常復(fù)制的發(fā)生[2]。Ki-67是目前較為肯定的與細胞分裂增殖相關(guān)的蛋白，與很多惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)歸、預(yù)后均具有相關(guān)性。CDK2和p27表達異常均可導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化，同時聯(lián)合檢測Ki-67對判斷腫瘤細胞的惡性趨勢與增殖活性有重要意義。目前國內(nèi)在PTC中聯(lián)合檢測CDK2、p27及Ki-67的報道尚少，三者在PTC中表達的關(guān)系還有待進一步探索和研究。本文主要研究采用的免疫組化法檢測PTC、甲狀腺腺瘤、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫及正常甲狀腺組織中CDK2、p27及Ki-67蛋白的表達，著重闡述了三者的表達與PTC發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 研究對象

隨機選取廣西科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院于2007年7月—2010年1月期間在該院接受治療的外科手術(shù)切除的甲狀腺病變組織100例，其中有乳頭狀癌40例，結(jié)甲30例，腺瘤30例。40例癌組織中女性患者35例、男性患者5例；最大年齡71歲，最小年齡16歲，中位年齡38歲；100例病變組織腫瘤直徑0.1～7 cm，平均0.36 cm，其中＞1 cm者17例，≤1 cm者23例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者29例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者11例。全部材料術(shù)前均無化、放療及免疫治療史。另外抽取了20例死亡于非甲狀腺疾病的尸體解剖中的正常甲狀腺組織作為對照組。

1.2 試劑及方法

兔抗人CDK2多克隆抗體和SP試劑盒、鼠抗人p27單克隆抗體、及Ki-67單克隆抗體均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。所采用的SP法免疫組化技術(shù)，染色操作步驟流程是按照試劑盒說明書進行。用PBS液取代一抗作陰性對照，用已知乳腺癌CDK2、p27陽性切片及已知肺鱗癌Ki-67陽性切片作陽性對照。

2 結(jié)果

2.1 不同甲狀腺組織中CDK2、p27及Ki-67蛋白的表達

見圖1～2。PTC中Ki-67蛋白的陽性表達率為80.0%（32/40）、CDK2蛋白的陽性表達率為80.0%（32/40），兩者均明顯高于結(jié)甲、腺瘤及正常組（P ＜ 0.01，P ＜ 0.01）。在PTC中p27蛋白的陽性表達率為22.5%（9/40），顯著低于正常組、腺瘤及結(jié)甲（P ＜ 0.01）。

圖1 甲狀腺乳頭狀癌中Ki-67蛋白的陽性表達

圖2 甲狀腺乳頭狀癌中CDK2蛋白的陽性表達

2.2 PTC中CDK2、p27、Ki-67蛋白表達與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

PTC中CDK2、ki-67蛋白表達與臨床病理參數(shù)均無相關(guān)性（均為P＞0.05）；p27蛋白表達與患者年齡有關(guān)聯(lián)（P=0.049），與患者的性別、腫塊直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均無相關(guān)性（均為P＞0.05）。

2.3 PTC中CDK2、p27、Ki-67蛋白表達的相互關(guān)系

PTC中CDK2與Ki-67蛋白的表達呈正相關(guān)（r=0.947，P ＜ 0.01），CDK2、Ki-67與p27的表達呈負相關(guān)（r=-0.413，P ＜ 0.01；r=-0.381，P ＜ 0.05）。

3 討論

在正常組織中，p27的高表達阻止了細胞由G1期到S期轉(zhuǎn)化，使進入S期的瘤細胞減少，從而導(dǎo)致了Ki-67不能充分發(fā)揮促進和參與DNA復(fù)制的功能，而在腫瘤中情況則相反。CDK2、p27及Ki-67的異常表達，提示細胞周期紊亂，導(dǎo)致異常復(fù)制和多倍體的形成，有助于細胞的惡性轉(zhuǎn)化。Hiroaki I等[4]檢測卵巢透明細胞癌中CDK2和p27的表達，提出CDK2的低表達和p27的高表達可能涉及了卵巢透明細胞癌的發(fā)生發(fā)展。本組資料與Hiroaki I報道有所不同，PTC中CDK2高表達而p27低表達。Yasusei K等[5]檢測p27、Ki-67在口腔鱗癌中的表達，得出p27在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌中的表達明顯低于原發(fā)灶，而Ki-67在原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均為過表達。本組資料與Yasusei K報道有差異，PTC中Ki-67與臨床病理參數(shù)間均無相關(guān)性，而p27僅與患者年齡有關(guān)。本實驗研究表明，PTC中CDK2、Ki-67蛋白的高表達而p27蛋白低表達，良性病變及正常組中則相反。CDK2、Ki-67蛋白高表達及p27低表達與PTC的發(fā)生、發(fā)展可能存在某種關(guān)聯(lián)，因此，二者或三者聯(lián)合檢測可以作為早期臨床診斷和評價甲狀腺腫瘤細胞增殖活性的潛在的參考指標。

[1] 江昌新，譚郁彬，主譯.WHO內(nèi)分泌器官腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2006:51-99.

[2] Nallamshetty S,Crook M,Boehm M,et al.The cell cycle regulator p27Kip1 interacts with MCM7,a DNA replication licensing factor, to inhibit initiation of DNA replication[J].FEBS Lett,2005,579(29):6529-6536.

[3] Bukholm IR,Bukholm G,Holm R,et al.Association between histology grade,expression of HsMCM2,and cyclin A in human invasive breast carcinomas[J].J Clin Pathol,2003,56(5):368-373.

[4] Hiroaki I,Tomokazu Y,Cheryl Lyn W,et al.Novel mechanism of reduced proliferation in ovarian clear cell carcinoma cells:Cytoplasmic sequestration of CDK2 by p27[J].Gynecologic Oncology,2011,122(3):641-647.

[5] Yasusei K,Shojiro K,Sunao S,et al.Establishment of an oral squamous cell carcinoma cell line with high invasive and p27 degradation activities from a lymph node metastasis[J].Oral Oncology,2003,39(5):515-520.