曹陽虎，鄭江萍，黃良永

(1.湖北江漢油田總醫(yī)院，湖北 潛江 433124;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院藥學(xué)部，湖北 十堰 442000)

復(fù)方甘草搽劑由甘草流浸膏、甘油、乙醇等組方，是外用中藥醫(yī)院制劑(批準文號為鄂藥制字Z20110958)，主要有消炎止癢作用，外搽患處，用于治療皮膚干燥、瘙癢。高濃度甘草流浸膏具有抗真菌作用[1]，是處方的主要有效成分，原質(zhì)量標(biāo)準中只有甘草成分的鑒別試驗，沒有含量測定方法。為了控制本制劑的質(zhì)量，筆者以甘草的主要成分甘草酸為定量指標(biāo)，參考相關(guān)文獻[2－5]建立了測定甘草酸的高效液相色譜法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Dionex Ultimate3000型高效液相色譜儀(美國戴安公司，低壓四元梯度泵、自動進樣器、多波長紫外檢測器、柱溫箱);變色龍色譜工作站(美國戴安公司);UP5200H型超聲清洗機(熊貓集團電子計量有限公司);AUW120D型電子分析天平(十萬分之一，日本島津公司);GWA－UN超純水機(北京普析通用公司)。甲醇為色譜純(美國天地公司);水為超純水;甘草酸銨對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為110731－201116，含量93.1%);復(fù)方甘草搽劑(本院制劑室生產(chǎn)，批號為20120215，20120308，20120329)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Cosmosil C18柱(美國 Waters公司，250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 －0.2 mol/L 醋酸銨 － 冰醋酸(65 ∶35 ∶1);柱溫:30℃;流速:1 mL/min;進樣量:10 μL;檢測波長:241 nm;甘草酸與其他成分分離度好，理論板數(shù)以甘草酸峰計應(yīng)不低于5 500。

2.2 溶液制備

精密稱取甘草酸銨對照品57.0 mg(含量93.1%，1 mg甘草酸銨折合甘草酸0.979 5 mg)，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得對照品貯備液(含甘草酸1.039 6 mg/mL);精密量取對照品貯備液2 mL，用甲醇稀釋至10 mL，即得對照品溶液(以甘草酸計質(zhì)量濃度為 207.92 μg/mL)。取復(fù)方甘草搽劑(100 mL/瓶)，振搖均勻，精密量取10 mL，置50 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，超聲處理5 min(功率300 W，頻率40 kHz)，放冷至室溫，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方量制備缺甘草流浸膏的搽劑，依照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗:取2.2項下3種溶液各10 μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下，復(fù)方甘草搽劑的供試品溶液和對照品溶液的甘草酸峰保留時間一致，理論板數(shù)以甘草酸峰計為5 500，而且陰性對照品溶液對測定無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密量取甘草酸對照品貯備液0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0 mL，置 10 mL 容量瓶中，用甲醇定量稀釋成含甘草酸 10.40，20.79，51.98，103.96，207.92，519.79，1 039.60 μg/mL 的系列對照品溶液，精密取 10 μL，注入液相色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)、對照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)繪制標(biāo)準曲線，得標(biāo)準曲線方程 Y=0.145 5 X－0.013 6，r2=1(n=7)。結(jié)果表明，甘草酸質(zhì)量濃度在 10.40 ～ 1 039.58 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗:取同一對照品溶液(207.92 μg/mL)10 μL，在擬訂色譜條件下連續(xù)自動進樣5次。結(jié)果甘草酸峰面積的 RSD為0.04%(n=5)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗:取同一批號(批號為20120329)的樣品，依法制備5份供試品溶液，按擬訂色譜條件測定色譜峰面積，代入線性方程計算含量。結(jié)果甘草酸的平均含量為122.20 μg/mL，RSD為0.74%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性好。

穩(wěn)定性試驗:取同一供試品溶液，在室溫下放置1，8，16，24，48，72 h，分別測定。結(jié)果甘草酸峰面積的 RSD為0.33%(n=6)，表明供試品溶液在72 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗:精密量取已知含量的樣品(批號為20120329)2，5，10 mL各2份，按高中低濃度精密加入甘草酸對照品溶液1，3，6 mL，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 甘草酸加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，在擬訂色譜條件下，取對照品溶液(207.92 μg/mL)和供試品溶液各 10 μL，進樣測定峰面積，以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為20120215，20120308，20120329的3 批甘草酸樣品含量分別為 612.10，611.42，611.04 μg/mL。

3 討論

經(jīng)試驗，采用甲醇－0.2 mol/L醋酸銨－冰醋酸(65∶35∶1)流動相替代2010年版《中國藥典(一部)》“甘草流浸膏”項下的流動相[2]，甘草酸的峰分離度好，可排除其他雜質(zhì)的干擾。所建立的甘草酸含量測定方法操作簡單，回收率高，可用于本制劑的質(zhì)量控制。

依照中國藥典規(guī)定，甘草流浸膏中含甘草酸不得少于1.8%(g/mL)，結(jié)合甘草流浸膏在本制劑處方中的用量為3%(體積分數(shù))，考慮樣品含量測定結(jié)果，建議暫訂本制劑的含量以甘草酸計應(yīng)不得低于0.58 g/L。

[1]徐林霞，武延雋.甘草流浸膏抗真菌作用的實驗研究[J].長治醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，23(1):11－13.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:376.

[3]劉 源.高效液相色譜法測定利肺片中甘草酸含量[J].中國藥業(yè)，2012，21(1):27 －28.

[4]王麗瓊.反相高效液相色譜法測定甘草浸膏中甘草酸和甘草苷含量[J].中國藥業(yè)，2009，18(17):16－17.

[5]楊 輝.甘草及其制劑中甘草酸含量測定研究進展 [J].中國藥業(yè)，2008，17(10):73 －74.