喬曉峰 李長德 解云川 王建業(yè) 羅文哲(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 54002)

腰椎間盤突出癥是腰椎纖維環(huán)破裂后髓核突出壓迫神經(jīng)根，造成以腰腿痛為主要表現(xiàn)的疾病。其發(fā)病機(jī)制一直存在著爭論〔1，2〕。研究表明，腰椎間盤突出癥患者體內(nèi)產(chǎn)生大量金屬蛋白酶、白細(xì)胞介素(IL)、腫瘤壞死因子(TNF)等，這些物質(zhì)在椎間盤退變和突出的病理過程中具有重要的調(diào)控作用〔3〕。因此，本研究通過檢測腰椎間盤突出癥患者髓核組織TNF-α、IL-8、IL-10表達(dá)水平，探討腰椎間盤退變和突出機(jī)制，為更好地治療腰椎間盤突出癥提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 選擇2011年8月至2012年12月我院骨科手術(shù)治療的腰椎間盤突出癥患者共56例，其中男32例，女24例，平均年齡(58.6±5.3)歲，均為慢性發(fā)病，進(jìn)行性加重。病程2.5～13年，平均7.0年。所有病例發(fā)病后均具有典型的坐骨神經(jīng)痛，直腿抬高試驗(yàn)(+)，加強(qiáng)試驗(yàn)(+)，其中伴有腰臀部疼痛52例，放射性神經(jīng)痛47例，下肢感覺障礙9例，下肢肌肉萎縮3例。手術(shù)均由同一組醫(yī)師施行，采用標(biāo)準(zhǔn)的開窗或半椎板切除，切除的腰椎間盤組織作為病變樣品。取同期來我院骨科的腰椎爆裂骨折脫位患者作為對照組，共34例，均為男性，平均年齡(35.2±8.4)歲，施行手術(shù)減壓并取未受累的腰椎間盤髓核組織作為對照組，無脊柱病史，無全身膠原免疫病史和急慢性感染史。

1.2 樣品處理 將腰椎間盤組織仔細(xì)剔除纖維環(huán)，保留髓核組織，以生理鹽水沖洗，置于－80℃冰箱中保存?zhèn)溆?。凍干的椎間盤髓核組織100 mg，超聲粉碎，加1 ml磷酸鹽緩沖液(PBS)制成勻漿，4℃、10 000 r/min離心，取上清，待檢。

1.3 指標(biāo)檢測 ELISA法對髓核上清液TNF-α、IL-8以及IL-10表達(dá)進(jìn)行檢測，ELISA試劑盒購自北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院免疫學(xué)研究所，按照試劑盒說明書操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，樣本差異比較采用兩樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

與對照組相比，腰椎間盤突出癥患者髓核組織TNF-α、IL-8表達(dá)明顯增加(P＜0.05，P＜0.01)，IL-10表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。見表1。

表1 髓核上清液中TNF-α、IL-8、IL-10的表達(dá)(±s，pg/ml)

表1 髓核上清液中TNF-α、IL-8、IL-10的表達(dá)(±s，pg/ml)

與對照組相比:1)P＜0.05，2)P＜0.01

34 3.24±0.25 8.91±1.32 15.36±7.64椎間盤突出癥組 56 6.73±0.861) 35.74±6.442)10.52±3.021)IL-8 IL-10對照組組別 n TNF-α

3 討論

退變的椎間盤中可自發(fā)地產(chǎn)生多種細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子在椎間盤退變中啟動(dòng)基質(zhì)降解酶和促進(jìn)炎癥反應(yīng)，直接參與椎間盤的退變過程。TNF-α主要由激活的巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，對中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞具有活化作用，并促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放IL-6、IL-8等，引發(fā)神經(jīng)根水腫、血管內(nèi)凝血等損害，TNF-α也被認(rèn)為是觸發(fā)與維持神經(jīng)源性疼痛過程中一個(gè)關(guān)鍵性病理因子，它可以促進(jìn)磷脂酶和明膠酶的表達(dá)，使血管基底膜中的膠原和層粘連蛋白降解，破壞血-神經(jīng)屏障，引起巨噬細(xì)胞侵入，進(jìn)一步釋放TNF-α等炎性因子〔4，5〕，出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀。IL-8是一種趨化性細(xì)胞因子，趨化中性粒細(xì)胞，誘導(dǎo)其變形、脫顆粒、胞漿內(nèi)鈣短暫上升等，對T淋巴細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞也有趨化作用，對炎癥和免疫過程有重要的調(diào)節(jié)作用。Carragee等〔6〕取腰椎間盤突出癥和脊柱側(cè)凸患者的髓核進(jìn)行培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)椎間盤組織可自發(fā)地產(chǎn)生IL-8和單核細(xì)胞化學(xué)趨向性蛋白-1(MCP-1)，從而促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞進(jìn)入椎間盤組織，加速突出物的吸收。IL-10是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的重要相關(guān)因子，對免疫應(yīng)答發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用，抑制免疫性T細(xì)胞的活化，抑制單核、巨噬細(xì)胞等多種炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，如IL-12、IL-6、IL-8等，是具有多向性生物學(xué)活性的強(qiáng)免疫抑制因子，并介導(dǎo)Th1和Th2兩類細(xì)胞之間的相互調(diào)節(jié)〔7〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明在椎間盤突出癥患者髓核組織局部炎癥性細(xì)胞因子增加，而抑制性細(xì)胞因子減少，進(jìn)而使突出物邊緣新生血管形成，巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞浸潤，促進(jìn)突出物的吞噬和吸收，并進(jìn)一步導(dǎo)致椎間隙變窄，纖維環(huán)松弛，椎體連接失穩(wěn)，這使得在運(yùn)動(dòng)時(shí)，纖維環(huán)作用于關(guān)節(jié)軟骨的應(yīng)力增加，尤其是外層纖維環(huán)，刺激周邊關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖，再經(jīng)軟骨內(nèi)化骨而形成骨贅。由此推測，TNF-α、IL-8、IL-10局部表達(dá)變化是椎間盤退變、突出的重要原因。

1 俞振翰，姜 宏，周紅海.腰椎間盤突出后的重吸收研究進(jìn)展〔J〕.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012;28(4):397-400.

2 Ganey TM，Meisel HJ.A potential role for cell-based therapeutic in the treatment of intervertebral disc herniation〔J〕.Eur Spine J，2002;11(2):S206-14.

3 汪東方.腰椎間盤突出患者椎間盤局部細(xì)胞因子的變化〔J〕.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009;25(11):1660-1.

4 Korge A，Siepe C，Mehren C，et al.Minimally invasive anterior approaches to the lumbosacral junction〔J〕.Oper Orthop Traumatol，2010;22(5):582-92.

5 王繼夫.48例腰椎間盤突出癥患者腰椎間盤組織中TNF-α水平測定及分析〔J〕.山東醫(yī)藥，2010;50(3):78.

6 Carragee EJ，Spinnikie AO，Alamin TF，et al.A prospective controlled study of limited versus subtotal posterior discectomy:short-term outcomes in patients with herniated lumbar intervertebral discs and large posterior anular defect〔J〕.Spine，2006;31(6):653-7.

7 張道杰，段朝霞.IL-10的研究進(jìn)展〔J〕.國際免疫學(xué)雜志，2003;26(1):39-41.