王明躍 葉曉林

（1.成都市都江堰市第二人民醫(yī)院，四川 成都 611830；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都 611137）

目前許多感冒藥中含有多種藥物成分，其含量的測(cè)定采用的方法也不同。如復(fù)方氨酚苯海拉明片（規(guī)格：每片含對(duì)乙酰氨基酚300mg、咖啡因30mg、鹽酸麻黃堿715mg、鹽酸苯海拉明715mg）國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚和咖啡因［1］。小兒氨酚黃那敏顆粒系由對(duì)乙酰氨基酚、馬來(lái)酸氯苯那敏等組成的復(fù)方制劑，現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)只建立了測(cè)定對(duì)乙酰氨基酚的含量的可見(jiàn)／紫外分光光度法［2］。維C 銀翹片由金銀花、連翹、荊芥、對(duì)乙酰氨基酚、維生素C、馬來(lái)酸氯苯那敏等14味藥制成，乙酰氨基酚的含量采用HPLC法測(cè)定，維生素C的含量用容量滴定法測(cè)定［3］。氨酚咖黃烷胺片主要成分為對(duì)乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、人工牛黃、咖啡因，乙酰氨基酚的含量測(cè)定方法為容量法［4］。本文采用HPLC 法直接測(cè)定乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C 四種組份含量，專屬性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)捷，結(jié)果滿意。

1 材料與方法

1.1 材料

Water 1525型高效液相色譜儀；Water 2487型雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器；Water 2487型自動(dòng)進(jìn)樣器。RWEKA DT 800 型溶出度實(shí)驗(yàn)儀。乙晴（色譜純，Korea SK）；庚烷磺酸鈉為分析純。復(fù)方氨酚咖麻片（韓國(guó)Komar公司）由對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C 組成。對(duì)照品對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C為Pharmcia產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Capcell-pak C18（5μm，4.6×150 mm，Shiseido）；流動(dòng)相：乙晴／緩沖液=（30／70）；緩沖液：庚烷磺酸鈉1.0g 加250ml超純水，同時(shí)加入2ml高氯酸；每1000ml乙腈加入2ml高氯酸。檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；流速1.0 ml·min-1；進(jìn)樣體積10μl，柱溫25℃。

1.2.2 對(duì)照品溶液制備

分別精密稱取對(duì)乙酰氨基酚（60 mg）、咖啡因（25 mg）、鹽酸麻黃堿（25 mg）和維生素C（180 mg）對(duì)照品，加100 ml的50%甲醇制成混合溶液，作為對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液制備

取本品20片，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于乙酰氨基酚60mg、咖啡因25mg、鹽酸麻黃堿25mg、維生素C 180mg），置100mL量瓶中，加50%甲醇，超聲處理10min，加50%甲醇至刻度。用0.45m 微孔濾膜濾過(guò)，取濾液，作為供試品溶液。取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

1.2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取對(duì)乙酰氨基酚375mg、咖啡因156.25 mg、鹽酸麻黃堿156.25mg和維生素C 1000mg置同一100ml量瓶中，加50%甲醇適量使溶解，最后稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述混合對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6、8ml分別置25ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻。根據(jù)上述色譜條件分別進(jìn)樣10 μl，記錄色譜圖。以各組分峰面積之比為縱坐標(biāo)，藥物濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得回歸方程。

1.2.5 精密度試驗(yàn)

取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄各組分的面積，計(jì)算RSD 值。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，間隔2小時(shí)進(jìn)樣一次，共計(jì)8h，記錄各組分峰面積，計(jì)算RSD 值。

1.2.7 回收率試驗(yàn)

精密稱取對(duì)乙酰氨基酚120 mg、咖啡因50 mg、鹽酸麻黃堿50mg和維生素C 360mg置同一100ml量瓶中，加50%甲醇適量使溶解，最后稀釋至刻度，搖勻。精密量取上述混合對(duì)照品溶液10、12.5、15ml分別置25ml量瓶中，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別相當(dāng)于處方量的80%、100%和120%。根據(jù)上述色譜條件分別進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，測(cè)定各組分峰面積，計(jì)算回收率，共進(jìn)樣6次，以平均值計(jì)算。

1.2.8 樣品含量測(cè)定

精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積之計(jì)算含量，共測(cè)定3個(gè)樣品。以下式計(jì)算分析含量百分比（Assay）：測(cè)定含量／標(biāo)注含量（35 mg）×100%。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系的考察

結(jié)果表明，四種組分可以很好的分離，峰形對(duì)稱、無(wú)拖尾現(xiàn)象（圖1）。乙酰氨基酚在15mg·100ml-1～120mg·100ml-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=287919x+187227，r=0.9999?？Х纫蛟?.25mg·100ml-1～50mg·100ml-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=695624x-35886，r=0.9994。鹽酸麻黃堿在6.25mg·100ml-1～50mg·100ml-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=201088x+389167，r=0.9998。維生素C 在40mg·100ml-1～320mg·100ml-1范圍內(nèi)，峰面積與濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，線性方程為y=27965x+188324，r=0.9994。

圖1 對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C的色譜圖

2.2 精密度試驗(yàn)

同一標(biāo)準(zhǔn)溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C 的RSD 分別是0.81%、0.71%、0.38%和0.22%。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

同一供試品溶液，間隔2h進(jìn)樣一次，共計(jì)8h，結(jié)果對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C 的RSD 分別是0.70%、0.83%、0.45%和0.56%。表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定，儀器性能穩(wěn)定。

2.4 回收率試驗(yàn)

分別取供試液進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定，相當(dāng)于處方量的80%、100%和120%，測(cè)定各組分峰面積，計(jì)算回收率，以平均值計(jì)算。其回收率以及RSD 值，平均回收率非常接近100%，RSD在允許范圍內(nèi)，見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果

2.5 樣品含量測(cè)定

精密吸取上述對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以峰面積之計(jì)算含量，共測(cè)定3個(gè)樣品。以下式計(jì)算分析含量百分比（Assay）：測(cè)定含量／標(biāo)注含量×100%。結(jié)果顯示，3個(gè)樣品對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C的含量百分比均值結(jié)果見(jiàn)表2。

3 討論

作者采用高效液相色譜同時(shí)檢測(cè)復(fù)方氨酚咖麻片中對(duì)乙酰氨基酚、咖啡因、鹽酸麻黃堿和維生素C 的含量，以210nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，在同一條件下可以很好的分離四種藥物成分，色譜圖顯示無(wú)拖尾現(xiàn)象，顯示該法靈敏度高，準(zhǔn)確度和精密度好，操作簡(jiǎn)便，可作為該類制劑的含量測(cè)定和質(zhì)量評(píng)價(jià)監(jiān)控方法。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果（%）

1 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)12冊(cè).復(fù)方氨酚苯海拉明片試行標(biāo)準(zhǔn)：WS2100012（HD21152）22.［S］／／國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，2002：162.

2 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.小兒氨酚黃那敏顆粒試行標(biāo)準(zhǔn)：WS2100012（HD20214）22002［S］／／國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，2002：53.

3 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS32B2400029822003［S］.

4 國(guó)家藥典委員會(huì).國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)［S］.第七冊(cè).2002：7-240.