劉 娥

（荊楚理工學(xué)院化工與藥學(xué)院，湖北 荊門448000）

甲磺酸伊馬替尼（Imatinib mesylate），商品名格列衛(wèi)，是瑞士諾華公司研發(fā)的一種酪氨酸激酶抑制劑，是第一個(gè)以蛋白激酶抑制作用模式發(fā)揮信號(hào)傳感抑制劑作用的上市藥物。2001年5月10日獲得美國(guó)食品與藥品管理局（FDA）的批準(zhǔn)，用于治療α－干擾素（Interfereon－alfa）治療無效的胚細(xì)胞危象病期、加速病期或慢性病期的慢性骨髓性白血病患者［1］，并以高效、低毒、針對(duì)性強(qiáng)的抗癌靶向性，取得了顯著療效，開啟了腫瘤分子靶向治療的新時(shí)代［2］。目前，甲磺酸伊馬替尼的合成及其作用機(jī)制的研究較多［3－6］，而對(duì)于其原料藥的質(zhì)量控制的研究并不多見。作者參照有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定方法［7－9］，建立了測(cè)定甲磺酸伊馬替尼的含量和有關(guān)物質(zhì)的HPLC方法。

1 實(shí)驗(yàn)

1．1 試劑與儀器

甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所；甲磺酸伊馬替尼原料藥（20121103、20121105、20121108），自制。

Agilent 1100型高效液相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；TU－1901型雙光束紫外可見分光光度計(jì)；CP－224S型電子分析天平，德國(guó)賽多利斯；Milli－Q型超純水機(jī)，美國(guó)Millipore公司。

1．2 方法

1．2．1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（150mm×4．6mm，5 μm）；流動(dòng)相：辛烷磺酸鈉和磷酸二氫鉀的緩沖溶液（pH值3．0）∶甲醇＝45∶55（體積比，下同），流速1．0 mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)285nm，柱溫30℃。

1．2．2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取干燥的甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品25．0mg，置于100mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成0．25mg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量取1．0mL甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇稀釋至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為2．5μg·mL－1的對(duì)照品溶液，備用。

1．2．3 供試品溶液的制備

精密稱取干燥的甲磺酸伊馬替尼原料藥25．0mg，置于100mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度，制成0．25mg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼供試品儲(chǔ)備液。精密量取1．0mL甲磺酸伊馬替尼供試品儲(chǔ)備液，加甲醇稀釋至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得濃度為2．5μg·mL－1的供試品溶液，備用。

2 結(jié)果與討論

2．1 色譜條件的選擇

2．1．1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

稱取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋制成濃度為10μg·mL－1的溶液，經(jīng)紫外分光光度計(jì)掃描，甲磺酸伊馬替尼在285nm處有最大吸收，故選取285nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2．1．2 流動(dòng)相的選擇

實(shí)驗(yàn)中分別選取甲醇－乙腈、甲醇－三乙胺、甲醇－磷酸鹽緩沖溶液（不同比例）作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，采用辛烷磺酸鈉和磷酸二氫鉀的緩沖溶液（pH值3．0）∶甲醇＝45∶55作為流動(dòng)相，分離效果較好，故采用辛烷磺酸鈉和磷酸二氫鉀的緩沖溶液（pH值3．0）∶甲醇＝45∶55為流動(dòng)相。

2．2 分離專屬性

稱取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品適量，加流動(dòng)相溶解并配制成濃度為0．1mg·mL－1的溶液。取5mL該溶液各4份，分別加1mol·L－1氫氧化鈉溶液、1mol·L－1鹽酸溶液、30%過氧化氫溶液各2mL、100℃水浴加熱1h，中和后加流動(dòng)相至10mL，進(jìn)樣，考察降解物的分離性能，色譜圖見圖1。

圖1 破壞性實(shí)驗(yàn)的HPLC圖譜Fig．1 Chromatograms of stress conditions experiment

由圖1可知，各峰分離良好，表明方法的分離專屬性好。

2．3 線性關(guān)系

分別精密量取1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品儲(chǔ)備液，加甲醇稀釋至10mL容量瓶中，定量，搖勻。分別取以上溶液各10 μL進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（y）為縱坐標(biāo)、濃度（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合得回歸方程y＝1542．2x＋2．216，R＝0．9999，結(jié)果表明濃度在2．5～12．5μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2．4 檢測(cè)限

精密量取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品溶液加甲醇稀釋制成一系列濃度溶液，取10μL注入液相色譜儀，當(dāng)主成分峰高為最大噪音峰高的3倍時(shí)，進(jìn)樣量即為檢測(cè)限，結(jié)果為0．5ng。

2．5 精密度

在相同色譜條件下，精密量取濃度為2．5μg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積為3782．6、3779．9、3788．5、3781．2、3789．7，平均峰面積為3784．38，方法的RSD（n＝5）為0．11%，表明方法的精密度良好。

2．6 穩(wěn)定性

在相同色譜條件下，精密量取同一批號(hào)濃度為2．5 μg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼供試品溶液10μL，分別于0h、2h、4h、6h、8h、12h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積為3768．5、3782．1、3779．6、3780．2、3772．3、3765．4，平均峰面積為3774．68，方法的 RSD（n＝6）為0．18%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2．7 重復(fù)性

在相同的色譜條件下，精密量取同一批號(hào)濃度為2．5μg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼供試品溶液10μL，進(jìn)樣，平行測(cè)定6次，RSD為0．68%（n＝6），表明方法的重復(fù)性良好。

2．8 加樣回收率

精密量取濃度為0．25mg·mL－1的甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL、2mL、3mL各2份，分別精密加入原料藥粉末約0．5mg，按1．2．3方法制備供試品溶液，取10μL進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab．1 Results of recovery rate experiment

由表1可知，方法的平均回收率為99．85%（n＝6）。

2．9 原料藥的測(cè)定

精密稱取3批甲磺酸伊馬替尼原料藥25mg，置于25mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻；分別精密量取1．0mL，置于50mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取濾液10μL，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。另取甲磺酸伊馬替尼對(duì)照品25mg，同法進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表2。

3 結(jié)論

建立了測(cè)定甲磺酸伊馬替尼原料藥含量和有關(guān)物質(zhì)的HPLC方法。確定色譜條件為：Diamonsil C18色譜柱（4．6mm×150mm，5μm），柱溫30℃，流動(dòng)相：辛烷磺酸鈉和磷酸二氫鉀的緩沖溶液（pH值3．0）∶甲醇＝45∶55，流速1．0mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)285 nm。結(jié)果表明，甲磺酸伊馬替尼濃度在2．5～12．5μg·mL－1范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99．85%（n＝6）。該方法操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏、準(zhǔn)確，樣品處理容易，可用于甲磺酸伊馬替尼的含量和有關(guān)物質(zhì)的檢測(cè)。

表2 原料藥中甲磺酸伊馬替尼含量和有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果／%Tab．2 Determination results of content and related substances of imatinib mesylate／%

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