李喜香劉效栓張小華禚 君豆金彥劉軍剛高小恒張 堅張芳麗馬 嵐鄭立娟吳 迪

養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性及皮膚過敏性實驗研究※

李喜香1劉效栓1張小華1禚 君1豆金彥1劉軍剛1高小恒1張 堅2張芳麗2馬 嵐2鄭立娟2吳 迪2

目的通過對養(yǎng)陰生肌膜的安全性試驗，為臨床安全用藥提供依據(jù)。方法將養(yǎng)陰生肌膜貼于家兔顎黏膜處接觸4h，觀察該膜對顎黏膜有無刺激性，并在光鏡下觀察其組織病理學變化；將養(yǎng)陰生肌散對豚鼠進行致敏和攻擊，觀察其對豚鼠有無皮膚過敏反應(yīng)發(fā)生。結(jié)果養(yǎng)陰生肌膜對兔顎黏膜未引起刺激性反應(yīng)，對豚鼠皮膚未產(chǎn)生過敏性反應(yīng)。結(jié)論養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性及皮膚過敏性、安全性指標基本符合規(guī)定要求。

養(yǎng)陰生肌膜；黏膜刺激性；皮膚過敏性

養(yǎng)陰生肌膜是將甘肅省中醫(yī)院醫(yī)院制劑養(yǎng)陰生肌散（甘藥制字Z04000835）經(jīng)劑型改革而得，主要用于治療口腔潰瘍[1-2]。養(yǎng)陰生肌膜為口腔內(nèi)貼膜，因與口腔黏膜直接接觸，膜內(nèi)的某些成分有可能會通過口腔黏膜吸收進入血液循環(huán)，為了解其安全性，我院進行了養(yǎng)陰生肌膜的黏膜刺激性及皮膚過敏性試驗。

1 實驗材料

1.1 動物日本大耳白兔，雌雄各半，體重2kg左右，購自蘭州生物制品研究所，實驗動物使用許可證號：SCXK（甘）2012-0001。豚鼠，雌性，體重200～300g，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，實驗動物使用許可證號：SCXK（甘）2010-0001。

1.2 藥物及試劑養(yǎng)陰生肌膜，批號：20111224，由甘肅省中醫(yī)院提供。2,4-二硝基氯苯，批號：97-05-01，上海試劑廠。新潔爾滅消毒液，批號：100901A，山東利爾康消毒科技有限公司。甲醛溶液（分析純），批號：981110，西安化學試劑廠。氯化鈉注射液，批號：020605482，西安京西雙鶴藥業(yè)有限公司。松香和石蠟，購自蘭州科邁公司。戊巴比妥鈉，批號：F20020915，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司。

1.3 儀器FA1604S型電子天平，上海天平儀器廠產(chǎn)品。

1.4 方法

1.4.1 黏膜刺激性試驗[1-6]取家兔4只，將左側(cè)顎黏膜作為空白膜陰性對照組，右側(cè)顎黏膜作為養(yǎng)陰生肌膜組。3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射將家兔麻醉，用0.2%新潔爾滅對家兔的口腔內(nèi)、外進行消毒。將空白膜用蒸餾水浸濕后貼于家兔左側(cè)顎黏膜上，將養(yǎng)陰生肌膜用蒸餾水浸濕后貼于家兔右側(cè)顎黏膜上，保持2～4h。去掉貼膜，用棉簽蘸取少許生理鹽水清洗貼敷部位，觀察該部位有無充血、水腫等刺激現(xiàn)象，連續(xù)觀察24h。處死動物，剪取敷藥部位及其周邊少許未敷藥部位組織，置于4%甲醛溶液中固定，石蠟切片，HE染色，光鏡下觀察組織病理學變化。根據(jù)局部黏膜刺激性反應(yīng)分級標準進行評分，然后再根據(jù)局部黏膜刺激性評價標準進行強度等級評價。

1.4.2 皮膚過敏性試驗[1-7]取豚鼠30只，隨機分成生理鹽水組、2,4-二硝基氯苯陽性對照組和養(yǎng)陰生肌膜組，每組10只。3%戊巴比妥鈉30mg/kg腹腔注射將豚鼠麻醉，背部皮膚脫毛，脫毛后24h，選無皮損豚鼠進行試驗。取0.2ml生理鹽水滴在陰性對照組豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)；取1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml滴在陽性對照組豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)；將養(yǎng)陰生肌膜貼于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，并用無刺激性的膠帶固定。各組持續(xù)致敏6h。分別于首次致敏后第7天和第14天，以同樣方法重復致敏一次。在末次致敏后14d，分別將生理鹽水0.2ml、0.1% 2,4-二硝基氯苯丙酮溶液0.2ml和養(yǎng)陰生肌膜貼（滴）在各組豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)進行攻擊，6h后去掉受試藥物，即刻開始觀察接觸受試藥物的皮膚有無紅斑、水腫等皮膚過敏現(xiàn)象出現(xiàn)，并于0h、24h、48h連續(xù)進行觀察和記錄。根據(jù)皮膚過敏反應(yīng)評分標準進行皮膚過敏性評分，然后再根據(jù)皮膚過敏性試驗致敏率分類表對受試藥物進行皮膚過敏率評定。

2 結(jié)果

與貼膜前比較，貼膜后家兔顎黏膜無明顯紅斑和水腫。與空白膜組比較，養(yǎng)陰生肌膜組家兔顎黏膜未出現(xiàn)明顯紅斑和水腫。結(jié)果見表1～3。

表1 局部黏膜刺激性反應(yīng)分級標準

表2 局部黏膜刺激性評價標準

表3 養(yǎng)陰生肌膜黏膜刺激性試驗

病理切片顯示，家兔1空白膜組和養(yǎng)陰生肌膜組黏膜上皮為角質(zhì)的復層鱗狀上皮，固有層為致密的結(jié)締組織組成，其下黏膜下層為疏松結(jié)締組織，內(nèi)含小唾液腺（見一團漿液性腺體，系主為黏液性腺體）、較大的血管、淋巴管、神經(jīng)及脂肪組織，并見多量橫紋肌組織，以上各層組織均未見改變，形態(tài)如常，家兔1空白膜組與養(yǎng)陰生肌膜組之間未見差別。家兔2空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組；家兔3空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組；家兔4空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組病理切片情況與家兔1空白膜組、養(yǎng)陰生肌膜組相同（見圖1～4）。

圖1 家兔1與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖2 家兔2與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖3 家兔3與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

圖4 家兔4與受試藥物接觸后組織黏膜病理變化（HE染色）（圖A、B、C為空白膜組家兔黏膜組織切片，圖D、E、F為養(yǎng)陰生肌膜組家兔黏膜組織切片）

生理鹽水組豚鼠均未出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)，致敏率為0%；2,4-二硝基氯苯組豚鼠皮膚均出現(xiàn)明顯的紅斑和水腫，隨著時間的推移，紅斑逐漸加深，而水腫則緩慢消退，表明該組豚鼠出現(xiàn)了明顯的皮膚過敏反應(yīng)，致敏率為100%，反應(yīng)強度為極度致敏性；養(yǎng)陰生肌膜組除9號豚鼠皮膚出現(xiàn)勉強可見的紅斑外，其余均未出現(xiàn)皮膚過敏反應(yīng)，致敏率為10%。參照皮膚過敏性試驗致敏率分類表（表6），致敏率在0%～10%范圍內(nèi)，致敏強度為無致敏性，因此可以認為養(yǎng)陰生肌膜對皮膚未出現(xiàn)過敏反應(yīng)（結(jié)果見表4～7）。

表4 皮膚過敏反應(yīng)評分標準

表5 皮膚過敏性試驗致敏率分類表(%)

表6 養(yǎng)陰生肌膜皮膚過敏反應(yīng)強度評價

表7 養(yǎng)陰生肌膜皮膚過敏試驗(n,%)

3 討論

黏膜刺激性試驗的目的是觀察受試藥物一次或多次接觸黏膜后所產(chǎn)生的刺激性反應(yīng)情況，考察黏膜在接觸受試藥物后是否出現(xiàn)充血、滲出、變性或壞死等局部反應(yīng)，是藥物安全性評價的重要指標之一。經(jīng)試驗，養(yǎng)陰生肌膜組對家兔顎黏膜未引起紅斑、水腫等刺激癥狀，表明養(yǎng)陰生肌膜對黏膜無刺激性。皮膚過敏試驗是一種對受試藥物產(chǎn)生免疫學傳遞的皮膚反應(yīng)，主要觀察受試藥物多次接觸皮膚后，機體免疫系統(tǒng)在皮膚上的表現(xiàn)，即有無過敏癥狀、強度如何。皮膚過敏試驗是貼膜制劑安全性評價所必需的指標。經(jīng)試驗，養(yǎng)陰生肌膜對豚鼠皮膚進行致敏和攻擊后，未出現(xiàn)紅斑、水腫等皮膚過敏癥狀，而陽性對照組2,4-二硝基氯苯則出現(xiàn)了強烈的皮膚過敏癥狀，表現(xiàn)為豚鼠背部與藥物接觸部位均出現(xiàn)不同程度的紅斑和水腫，說明養(yǎng)陰生肌膜對皮膚無過敏性。

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R965

A

1673-5846(2013)08-0034-03

1甘肅省中醫(yī)院藥學部，甘肅蘭州 730050

2蘭州大學基礎(chǔ)醫(yī)學院藥理學研究所，甘肅蘭州 730050

甘肅省重點中醫(yī)藥科研項目，編號：（GZK-2010-Z13）