何俊婷王曉博曹愛(ài)蘭* 任 哲惠選柱王景峰

（1 陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

芳樟醇為指標(biāo)對(duì)金銀花藥材質(zhì)量的研究

何俊婷1王曉博1曹愛(ài)蘭2* 任 哲1惠選柱3王景峰3

（1 陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西 西安 710075；2 陜西中藥研究所，陜西 西安 710075；3 陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹制藥有限責(zé)任公司，陜西 西安 710075）

目的 研究金銀花藥材中芳樟醇的含量測(cè)定方法，及其加速穩(wěn)定性試驗(yàn)條件下含量隨時(shí)間變化的規(guī)律，為確定金銀花質(zhì)量研究提供科學(xué)依據(jù)。方法 采用氣相色譜法檢測(cè)金銀花中芳樟醇含量，通過(guò)加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)測(cè)定不同貯藏時(shí)期金銀花中芳樟醇變化。結(jié)果 芳樟醇線性范圍為0.0516～1.2907 mg/mL（r=0.9999），平均回收率為101.3%；金銀花經(jīng)加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)后，芳樟醇下降率為1.91%～2.80%。結(jié)論 本方法可用于金銀花中芳樟醇的含量測(cè)定，金銀花藥材經(jīng)加速穩(wěn)定性研究后芳樟醇含量有小幅度的下降，但未發(fā)生顯著變化，金銀花中芳樟醇成分較為穩(wěn)定，在藥材有效期內(nèi)可作為指標(biāo)性成分對(duì)金銀花進(jìn)行質(zhì)量控制。

金銀花；芳樟醇；氣相色譜法；揮發(fā)油；穩(wěn)定性

金銀花揮發(fā)油是魚金注射液有效成分，是通過(guò)水蒸氣蒸餾得到的藥用中間體之一。干金銀花中揮發(fā)油成分有60多種，多為以芳香醇為主低沸點(diǎn)的不飽和萜烯類[1]。2006年，國(guó)家藥品不良反應(yīng)中心因不良反應(yīng)問(wèn)題暫停了魚金注射液的使用。生產(chǎn)企業(yè)根據(jù)《中藥注射劑安全性再評(píng)價(jià)質(zhì)量控制評(píng)價(jià)技術(shù)原則》（試行）[4]要求，為提高注射劑的質(zhì)量和安全水平，應(yīng)采取有效措施保證原料質(zhì)量的穩(wěn)定。而金銀花藥材相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)其揮發(fā)油進(jìn)行規(guī)定和檢驗(yàn)，為保證制劑安全、可靠、穩(wěn)定、可控，企業(yè)做了大量的研究工作，本文對(duì)金銀花藥材中揮發(fā)性成分芳樟醇進(jìn)行含量控制[5]，并經(jīng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)后對(duì)金銀花中的芳樟醇進(jìn)行測(cè)定，為原料的選擇、貯藏條件及期限提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

GC7890A氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器（美國(guó)安捷倫）；AG-135型電子分析天平（德國(guó)梅特勒）；揮發(fā)油提取器及冷凝裝置（西安玻璃儀器廠）；WD-A藥物穩(wěn)定性檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）。

表1 芳樟醇回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2 試藥

芳樟醇（1503-200001，中國(guó)藥品生物制品檢定所）；乙酸乙酯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；甲苯（分析純，天津市富宇精細(xì)化工有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 金銀花采收[2]：本品為忍冬科植物忍冬 Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾或帶初開的花，6月份采收于山東平邑縣，為成長(zhǎng)中期花蕾，十批樣品批號(hào)為120601～120610。

2.2 揮發(fā)油量測(cè)定：取干金銀花約500g置圓底燒瓶中，加8倍藥材量的水，搖勻。連接揮發(fā)油測(cè)定裝置，回流提取6h，按規(guī)定[3]方法操作讀取揮發(fā)油量。 結(jié)果顯示，蒸餾得到的揮發(fā)油在室溫下為凝固的半固體狀態(tài)，粘稠，不流動(dòng)。顏色微黃，偏白。由于金銀花揮發(fā)油特殊的易凝固狀態(tài)，造成其掛壁嚴(yán)重，揮發(fā)油中易夾雜水泡，因此檢讀揮發(fā)油量較為困難，誤差較大。

2.3 芳樟醇含量測(cè)定

2.3.1 供試品制備：精密稱取本品50g，于圓底燒瓶中，加水500mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，再加乙酸乙酯2mL，連接回流冷凝管裝置。加熱回流6h，停止加熱，放置片刻，分取乙酸乙酯層，測(cè)定器再用乙酸乙酯洗滌2次，每次1mL。合并洗滌液，定量轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，并加入乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

2.3.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：色譜柱：安捷倫DB-WAX型毛細(xì)管色譜柱(60μm×250μm×0.25μm)；檢測(cè)器：FID；氮?dú)鉃檩d氣,載氣流速2.0 mL/min；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流比：5∶1；程序升溫：初始120℃，保持5min，以每分鐘5℃升至190℃，保持2min，以每分鐘30℃升至250℃；進(jìn)樣量為1μL；理論板數(shù)按芳樟醇峰計(jì)算，應(yīng)不低于800。色譜圖見圖1。

圖1 GC圖（A 芳樟醇對(duì)照品；B 金銀花供試品）

2.3.3 對(duì)照品溶液的制備：取芳樟醇對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1mL含1.2907 mg作為對(duì)照品溶液。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察：精密吸取對(duì)照品溶液，用乙酸乙酯配置成芳樟醇濃度分別為0.0516，0.1291，0.2581，0.3872，0.5163，1.2907 mg/mL的對(duì)照品梯度溶液，進(jìn)樣，以色譜峰面積和濃度進(jìn)行分析。表明，甲基正壬酮在濃度為0.0516～1.2907 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，線性回歸方程為：Y=2665.8x+11.4，r=0.9999。

2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液，按2.3.2色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次，通過(guò)峰面積計(jì)算，得到芳樟醇峰面積的RSD（n=5）為1.3%，表明所用儀器精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取供試品溶液一份，按2.3.2方法，分別于0，2，4，6，8，10，12，24h進(jìn)樣，測(cè)得峰面積計(jì)算RSD為1.26%，表明該樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)測(cè)：精密取同一批樣品（批號(hào)120607）5份，按2.3.1方法制備供試品，按2.3.2測(cè)定，測(cè)定供試品芳樟醇平均含量為29.84μg/g，RSD為2.1%。

2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)：取已知芳樟醇含量的供試品溶液（批號(hào)：120610）5份，供試品濃度為28.85μg/g，分別精密加入與供試品等體積的對(duì)照品，混合均勻，測(cè)定其中芳樟醇峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果芳樟醇平均加樣回收率為101.3%。見表1。

2.4.6 樣品測(cè)定：分別取是個(gè)批號(hào)的金銀花，每批樣品取兩份，按供試品制備方法制備樣品。在上述色譜條件下分析測(cè)定，測(cè)定出芳樟醇的峰面積，計(jì)算含量，測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 金銀花中芳樟醇的含量

2.5 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)[5]

取三個(gè)批號(hào)干金銀花藥材對(duì)其進(jìn)行加速穩(wěn)定考察。將金銀花藥材在40℃±2℃，相對(duì)濕度75%±5%條件下儲(chǔ)藏6個(gè)月，濕度調(diào)節(jié)選擇NaCl飽和溶液（15.5-60℃，RH75%±1%）。在試驗(yàn)期間第0、1、2、3、6個(gè)月末取樣照上述方法制備及檢測(cè)樣品，測(cè)定含量變化情況見表3。

表3 加速穩(wěn)定性試驗(yàn)金銀花中芳樟醇含量（μg/g）

3 討 論

《中國(guó)藥典》2010版一部中金銀花藥材含量測(cè)定成分為綠原酸和木犀草苷[2]，對(duì)以金銀花揮發(fā)油為藥效成分的制劑的原料控制并不全面，我們需要從揮發(fā)油的角度對(duì)金銀花進(jìn)行質(zhì)量研究。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)金銀花的揮發(fā)油在室溫下為半固體狀態(tài)，難以通過(guò)常規(guī)的測(cè)定揮發(fā)油量來(lái)控制金銀花的質(zhì)量。因此，對(duì)揮發(fā)油中的指標(biāo)性成分芳樟醇進(jìn)行含量控制。通過(guò)方法學(xué)研究，表明本文建立的氣相色譜法能準(zhǔn)確測(cè)定金銀花中芳樟醇的含量。本方法簡(jiǎn)便，可操作性強(qiáng)，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，通過(guò)十個(gè)批次樣品的檢驗(yàn)，芳樟醇含量范圍為28.11～35.93μg/g，為金銀花中芳樟醇的含量限度提供了依據(jù)[6]。

通過(guò)三個(gè)批次金銀花的加速穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，顯示金銀花在溫度、濕度和光照的影響下，芳樟醇作為其控制金銀花中揮發(fā)油的指標(biāo)性成分，穩(wěn)定性好，在考察期內(nèi)芳樟醇含量下降率低于5%，未發(fā)生顯著變化。為保證制劑質(zhì)量，保證原料藥的優(yōu)良，建議將其儲(chǔ)存在陰涼、干燥處，貯藏期限不宜超過(guò)其有效期，庫(kù)房收發(fā)貨物保證“先進(jìn)先出”原則。

參考文件

[1] 張玲,彭廣芳,林慧彬,等.山東金銀花揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)藥學(xué)雜志,1995,19(11):651.

[2] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:205.

[3] 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典附錄Ⅹ D(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:63.

[4] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥注射劑安全性再評(píng)價(jià)質(zhì)量控制評(píng)價(jià)技術(shù)原則[Z].國(guó)食藥監(jiān)辦[2010]395號(hào).

[5] 萬(wàn)琴,蕭偉,王振中,等.氣相色譜法測(cè)定金銀花中芳樟醇的含量[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(4):317.

[6] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[Z].國(guó)食藥監(jiān)注[2006]678號(hào).

R282

B

1671-8194（2013）25-0070-03

陜西省科技統(tǒng)籌創(chuàng)新工程計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào)：2011KTCG03-03)

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