章 革 李 濤

（營(yíng)口市婦產(chǎn)兒童醫(yī)院，遼寧 營(yíng)口 115000）

乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究

章 革 李 濤

（營(yíng)口市婦產(chǎn)兒童醫(yī)院，遼寧 營(yíng)口 115000）

乳腺癌；基因；蛋白表達(dá)；實(shí)驗(yàn)研究

細(xì)胞黏附因子為一種細(xì)胞表面跨膜糖蛋白分子，分布于諸多細(xì)胞表面，包括淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、RBC，成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等。

CD44參與淋巴細(xì)胞的激活，以及細(xì)胞間透明質(zhì)酸的特異性黏附，變異性CD44基因的多樣性表達(dá)與腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等腫瘤生物學(xué)行為相關(guān)。

我們應(yīng)用免疫組化方法對(duì)乳腺癌中CD44S和CD44V6基因蛋白產(chǎn)物表達(dá)與組織學(xué)分型、脈管浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移、預(yù)后、復(fù)發(fā)等相關(guān)性進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集本院2000年1月至2010年12月間，161例原發(fā)性乳腺癌根治術(shù)后的臨床病理及隨訪資料，最大年齡83歲，最小年齡29歲，中位56歲。病史9個(gè)月～6年，最長(zhǎng)隨訪時(shí)間為7年。根據(jù)WHO（2003）乳腺癌分類及分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行組織學(xué)分類。

1.2 方法

每例選出最具組織學(xué)分型代表性、最大腫瘤表面部分，10%福爾馬林固定，石蠟包埋，常規(guī)4～5μm連續(xù)切片供實(shí)驗(yàn)研究。采用免疫組化檢測(cè)CD44s、CD44V6、CD34在乳腺癌中的表達(dá)，具體實(shí)驗(yàn)步驟參照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖液中120℃ 5min Monoclonal Antibody CD44S 瑞典（NOVO Castra）1∶50稀釋。Monoclonal Antibody CD44V6美國(guó)（R&D 1∶1000） 稀釋。ABC方法免疫染色，脈管浸潤(rùn)實(shí)驗(yàn)研究采用CD34單抗（R&D1:100）標(biāo)記脈管內(nèi)皮細(xì)胞，與H·E雙重染色鑒別血管、淋巴管。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

CD44S 200X全視野：（—）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%、（1+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%、（2+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%～75%、（3+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜75%。CD44V6×200全視野：（—）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%、（1+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)25%～50%、（2+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)50%～75%、（3+）：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜75%。

脈管浸潤(rùn)：以CD34陽(yáng)性表達(dá)確認(rèn)脈管內(nèi)皮細(xì)胞，管腔內(nèi)觀察到腫瘤細(xì)胞或瘤栓者為浸潤(rùn)陽(yáng)性。（管腔內(nèi)觀察到RBC為血管，無(wú)RBC是淋巴管）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，各組間相關(guān)性檢測(cè)采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 乳腺癌組織中，CD44S表達(dá)陽(yáng)性率為32.9%，CD44V6表達(dá)陽(yáng)性率為67.0%；CD44表達(dá)陽(yáng)性率與組織學(xué)類型之間無(wú)顯著性差異；脈管浸潤(rùn)在各組織學(xué)分型中，分別為硬癌＞導(dǎo)管內(nèi)癌＞乳頭狀腺癌；脈管浸潤(rùn)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.001）或遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移（P＜0.05）間有顯著性差異；脈管浸潤(rùn)陽(yáng)性者中CD44S表達(dá)陽(yáng)性率為70%，CD44V6表達(dá)陽(yáng)性率為58%；腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶間CD44基因蛋白的表達(dá)為原發(fā)灶CD44S表達(dá)陽(yáng)性率72.7%，CD44V6表達(dá)陽(yáng)性率100%；腋窩淋巴結(jié) CD44S表達(dá)呈陰性，CD44V6表達(dá)陽(yáng)性率為63.6%；脈管內(nèi)癌細(xì)胞CD44S表達(dá)陽(yáng)性率為8.7%；脈管內(nèi)癌細(xì)胞CD44V6表達(dá)陽(yáng)性率為（20%）；CD44陽(yáng)性表達(dá)與死亡呈正相關(guān)；CD44陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)呈正相關(guān)。

2.2 CD34基因蛋白標(biāo)記脈管內(nèi)皮細(xì)胞，突出顯現(xiàn)脈管形態(tài)學(xué)特征。

3 討 論

CD44是一種由單一基因編碼構(gòu)成的一類具有高度特異性的多功能單鏈跨膜糖蛋白，其變構(gòu)體CD44V6主要參與異質(zhì)性黏附，即瘤細(xì)胞與宿主細(xì)胞及宿主基質(zhì)的黏附，異質(zhì)性黏附在癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移過(guò)程中起到促進(jìn)作用[1]。本實(shí)驗(yàn)研究檢測(cè)161例乳腺癌標(biāo)本中，CD44S陽(yáng)性表達(dá)為32.9%，CD44V6陽(yáng)性表達(dá)為67.0%，CD44V6的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于CD44S。見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌中CD44S、CD44V6表達(dá)

腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CD44S無(wú)表達(dá)，CD44V6表達(dá)64%，其原發(fā)灶CD44S表達(dá)72%，V6表達(dá)100%。提示已有轉(zhuǎn)移的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶中均能檢測(cè)出CD44V6的高表達(dá)。符合Yoshida等[1]張真等[2]的觀點(diǎn)。

原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中，CD44基因蛋白產(chǎn)物表達(dá)的減弱與缺失提示CD44S基因蛋白在伴隨癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)移灶之前，擔(dān)負(fù)著癌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附及在基質(zhì)中的運(yùn)動(dòng)，在癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散、浸潤(rùn)的過(guò)程中，癌細(xì)胞突破腫瘤與宿主間的免疫屏障受CD44S特異性單克隆抗體的抑制，以至表達(dá)缺失。

在原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶中，CD44V6的高表達(dá)率提示腫瘤細(xì)胞可能獲得淋巴細(xì)胞的“偽裝”逃避人體免疫屏障的識(shí)別，且易于進(jìn)入淋巴結(jié)，并依賴CD44V6的黏附特性，完成腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移，侵襲等生物學(xué)行為，與左文述等的報(bào)道一致[3]。

Kim H等認(rèn)為：“CD44的表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞增殖、分化有關(guān)”[4]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為：不能否定CD44的表達(dá)可能與腫瘤細(xì)胞增殖、分化有關(guān)，但就乳腺癌組織學(xué)分類而言，各組織學(xué)類型間CD44基因蛋白的表達(dá)無(wú)顯著性差異。見(jiàn)表2。

同時(shí)，本實(shí)驗(yàn)研究中，CD44與腫瘤預(yù)后，復(fù)發(fā)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：CD44V6的陽(yáng)性表達(dá)提示腫瘤預(yù)后不良，且證實(shí)與腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能有相關(guān)性。與Ponta H[5]等的觀點(diǎn)一致。見(jiàn)表3。

瘤細(xì)胞在脈管內(nèi)出現(xiàn)是建立轉(zhuǎn)移不可缺少的物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)用CD34標(biāo)記脈管內(nèi)皮細(xì)胞，突出顯現(xiàn)脈管形態(tài)學(xué)特征，同時(shí)配合H·E復(fù)染，準(zhǔn)確地觀察到了脈管內(nèi)瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)及血管、淋巴管的鑒別。觀察結(jié)果顯示：CD34單克隆抗體標(biāo)記，內(nèi)皮細(xì)胞著色清晰，脈管形態(tài)顯現(xiàn)明了[6,7]。脈管內(nèi)經(jīng)Esin復(fù)染可確切觀察RBC的有無(wú)，以此鑒別血管或淋巴管。應(yīng)用其方法觀察發(fā)現(xiàn)：脈管浸潤(rùn)與乳腺癌中各組織學(xué)分型的生物學(xué)行為相吻合，其發(fā)生率依次為硬癌＞導(dǎo)管內(nèi)癌＞乳頭狀腺癌。脈管浸潤(rùn)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P＜0.001）遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移（P＜0.005）有顯著性差異，提示CD44基因蛋白產(chǎn)物的表達(dá)有脈管浸潤(rùn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移及脈管浸潤(rùn)與組織學(xué)分型及生物學(xué)行為中有直接或間接意義。

表2 CD44基因蛋白表達(dá)與組織學(xué)分型

表3 CD44表達(dá)與腫瘤復(fù)發(fā)

綜上所述：細(xì)胞黏附因子CD44S、CD44V6在乳腺癌轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等生物學(xué)過(guò)程中，發(fā)揮著生物學(xué)介導(dǎo)、黏附作用。CD44S、CD44V6在癌組織中的強(qiáng)表達(dá)提示腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、預(yù)后不良。腫瘤原發(fā)灶與轉(zhuǎn)移灶間CD44S表達(dá)缺失或減弱可能與CD44單抗的抑制、阻止及蛋白終產(chǎn)物生物學(xué)效應(yīng)的改變相關(guān)[8,9]。CD44的變異性表達(dá)可做為早期診斷瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)。CD34基因蛋白標(biāo)記脈管內(nèi)皮細(xì)胞，突出顯現(xiàn)脈管形態(tài)學(xué)特征，可作為脈管內(nèi)瘤細(xì)胞觀察及血管、淋巴管鑒別的客觀指標(biāo)和方法。

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1671-8194（2013）11-0073-02