于海芳高 捷*

（1 河北聯合大學2010級研究生，河北 唐山 063000；2 河北聯合大學附屬醫(yī)院兒科，河北 唐山 063000)

維生素D對人脂肪細胞脂聯素、瘦素表達的影響

于海芳1高 捷*2

（1 河北聯合大學2010級研究生，河北 唐山 063000；2 河北聯合大學附屬醫(yī)院兒科，河北 唐山 063000)

目的研究1，25二羥維生素D對人脂肪細胞脂聯素、瘦素表達的影響。方法原代分離培養(yǎng)人大網膜前脂肪細胞：前脂肪細胞誘導分化為脂肪細胞：應用免疫組化法檢測脂聯素、瘦素的表達。結果成功培養(yǎng)人前脂肪細胞并誘導人前脂肪細胞分化為脂肪細胞。分化組脂聯素及瘦素表達水平高于未分化組，而1，25二羥維生素D對脂肪細胞脂聯素及瘦素表達水平均具有影響，差異均具有統計學意義（P＜0.05）。結論1，25二羥維生素D對人脂肪細胞脂聯素、瘦素的表達有抑制作用。

維生素D；脂聯素；脂肪細胞；瘦素

近年來，隨著生活水平的提高，兒童肥胖患兒逐年增多，肥胖是指由脂肪細胞的數目增多和體積增大引起。脂肪細胞不僅是脂質貯存庫，它還是一個分泌器官，可以分泌多種激素類物質如瘦素、脂聯素和抵抗素等[1]。維生素D是一組具有生物活性的脂溶性類固醇衍生物，它可以調節(jié)體內鈣、磷代謝，近年來研究表明，它還可以影響多個器官的功能，如神經、內分泌、免疫、生殖、上皮及毛發(fā)生長等。維生素D與肥胖及脂肪細胞的關系目前說法不一。

1 材料與方法

1.1 材料

胰酶（中科院血研所）；DMEM（中科院血研所（Gibco））；二甲基亞砜（DMSO）；胎牛血清及牛血清白蛋白（中科院血研所）；維生素D3（上?；牵⊿olarbio））；地塞米松（上?；牵⊿olarbio））；胰島素（上?；牵˙ecton））；轉鐵蛋白（上?；牵⊿olarbio））；異丙醇（上?；牵⊿olarbio））；油紅O（上?；牵⊿olarbio））。

1.2 方法

1.2.1 人大網膜前脂肪細胞的原代培養(yǎng)

組織取材于產科剖腹產孕婦，要求無任何疾病及服藥史。①超凈臺內取新鮮切除的大網膜脂肪組織；②充分剪碎脂肪組織；③加入0.2%的I型膠原酶，振蕩；④加入DMEM，吹打混勻后篩網過濾；⑤離心10min；⑥加入完全DMEM吹打混勻，分瓶于CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取增殖分化的第四代細胞進行實驗。

1.2.2 大網膜脂肪細胞形態(tài)觀察

①制作細胞爬片[2]；②多聚甲醛固定細胞爬片；③HE染色，然后鏡下觀察；④油紅O染色，封片，立即拍照。⑤顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學改變包括細胞內脂滴產生情況。

1.2.3 脂聯素、瘦素的表達

①制作細胞爬片置于培養(yǎng)箱中；②按照實驗設計分組：未分化組、誘導分化組、分化+10-4維生素D3組、分化+10-6維生素D3組、分化+10-8維生素D3組、分化+10-10維生素D3；③誘導分化后多聚甲醛固定細胞爬片；④0.1% TritonX-100孵育15min；⑤3%過氧化氫孵育15min；⑥滴加脂聯素、瘦素一抗（稀釋濃度為1∶100）；⑦滴加二抗，37℃孵育20min；⑧蘇木素復染，酒精脫水，樹膠封片，鏡下觀察；⑨每張細胞爬片隨機選取5個200倍的顯微鏡視野。

2 結 果

2.1 維生素D3對人大網膜脂肪細胞分化過程的抑制作用

對分化過程細胞行油紅O染色，在顯微鏡下觀察，觀察正在分化細胞脂滴的變化。脂肪細胞在分化過程中，成熟脂肪細胞的形態(tài)由梭形或三角形變成橢圓形，其內充滿脂滴。第7d的細胞，脂滴被油紅O著色而呈紅色，細胞質不著色，維生素D3是以劑量依賴的方式抑制人脂肪細胞脂聯素、瘦素的表達。

2.2 不同濃度維生素D對脂肪細胞脂聯素表達的影響

見表1。

2.3 不同濃度維生素D對脂肪細胞瘦素表達的影響

見表2。

3 討 論

瘦素是與體質密切相關的一種激素，下丘腦的瘦素受體與瘦素相結合，通過激活Janus酪氨酸蛋白激酶進行信號轉導，從而影響多種神經內分泌激素分泌，進而引起食欲降低及機體能量消耗增加，減輕體質量。瘦素還有一種功能，就是增加交感神經活性，使外周血液去甲腎上腺素的增加，激活脂肪細胞膜上的腎上腺素能的特異性受體，從而達到增加能量消耗，降低體質量的目的。脂聯素是近年來才發(fā)現的一種脂肪細胞因子，可以特異性表達在脂肪細胞中，具有使葡萄糖攝取量提高、脂肪酸氧化能力增加、抗動脈粥樣硬化以及抗炎等作用[3]。瘦素主要是由脂肪細胞分泌的一種重要激素[4]。1，25-二羥維生素D是維生素D的活性的代謝產物。既往有研究報道：活性維生素D可以調控豬或鼠脂肪細胞的分化[5]。本研究結果顯示脂聯素主要表達在人脂肪細胞胞漿內。分化組脂肪細胞脂聯素表達水平明顯高于未分化組，而10-4維生素D3、10-6維生素D3、10-8維生素D3、10-10維生素D3對分化的脂肪細胞脂聯素表達水平具均有抑制作用。瘦素的表達主要在細胞漿內，10-4維生素D3、10-6維生素D3、10-8維生素D3、10-10維生素D3對分化的脂肪細胞瘦素表達水平均具有抑制作用。基于以上研究在臨床上我們可以給予肥胖兒童安全量的維生素D，從而有望控制肥胖兒童體質量并改善兒童脂代謝水平。

表1 不同濃度維生素D對脂肪細胞脂聯素表達的影響

表2 不同濃度維生素D對脂肪細胞瘦素表達的影響

[1] Elabd C,Chiellini C,Carmona M,et al.Human multipotent adiposederived stem cells differentiate into functional brown adipocytes [J].Stem Cells,2009,27(11):2753-2760.

[2] 徐洪,宋旭東,李瑩,等.貼壁細胞在載玻片上爬片的新方法[J].中國應用生理學雜志,2009,25(2):283-285.

[3] Ozturk ZG,Ekmekci H,Ekmekci OB,et al.Nontraditional risk factors in carotid artery disease[J].Clin Appl Thromb Hemost, 2010,16(5):554-558.

[4] 巫國輝,趙鋒,袁鏗,等.瘦素對脂肪細胞的直接調節(jié)作用[J].中國美容醫(yī)學,2007,16(10):1346-1349.

[5] Lenders CM,Feldman HA,Von Scheven E,et al.Relation of body fat indexes to vitamin D status and deficiency among obese adolescents[J].Am J Clin Nutr,2009,90(3):459.

R589.2

B

1671-8194（2013）11-0072-02

*通訊作者