靳茜茜郭相杰曹愛奎許素軍高彩榮*

（1 山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，山西 太原030001；2 太原市婁煩縣公安局技術(shù)處，山西 婁煩 030300；3 山西省太原市公安局小店分局刑警大隊技術(shù)中隊，山西 太原 030032）

前列腺素D2和白三烯E4測定在過敏性猝死診斷中的應(yīng)用研究

靳茜茜1郭相杰1曹愛奎2許素軍3高彩榮*1

（1 山西醫(yī)科大學(xué)法醫(yī)學(xué)院，山西 太原030001；2 太原市婁煩縣公安局技術(shù)處，山西 婁煩 030300；3 山西省太原市公安局小店分局刑警大隊技術(shù)中隊，山西 太原 030032）

目的測定過敏性猝死者尿液中前列腺素D2（prostaglandin D2，PGD2）、白三烯E4（leukotriene E4，LTE4）體內(nèi)含量的變化，探討其在過敏性猝死診斷中的意義。方法搜集108例免疫正常人、6例過敏性猝死死者和23例非過敏性死者的尿液，采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗法（ELISA）分別檢測尸體尿液中PGD2和LTE4的含量。結(jié)果過敏性猝死死者尿液中的PGD2和LTE4含量顯著升高，與正常組及其他死因組比較P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；其他死因組和正常人組相比較，P＜0.01，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。過敏猝死者尿液中的PGD2和LTE4呈顯著正相關(guān)（r=0.798，P=0.057）。結(jié)論過敏性猝死死者尿液中PGD2及LTE4的水平增高，對過敏性猝死的診斷有一定的參考價值。

法醫(yī)病理學(xué)；過敏性猝死；前列腺素D2；白三烯E4；ELISA

過敏性疾病是人類重大疾病之一，近年來其發(fā)生率及病死率均在我國乃至世界范圍內(nèi)都有明顯增加的趨勢[1]。嚴(yán)重的過敏性休克起病急，難以預(yù)見，嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡，但缺乏特異性的診斷指標(biāo)和死后病理形態(tài)學(xué)改變，故其診斷一直都是臨床醫(yī)學(xué)和法醫(yī)學(xué)鑒定的難點。研究表明前列腺素D2（prostaglandin D2，PGD2）[2]、白三烯E4（leukotriene E4，LTE4）[3]是發(fā)生Ⅰ型過敏反應(yīng)時肥大細(xì)胞被激活后合成的重要因子，與其他介質(zhì)一起參與和介導(dǎo)過敏性炎癥過程，且通過尿液進(jìn)行代謝。故本文應(yīng)用ELISA試劑盒檢測過敏性休克猝死者尿液中PGD2、LTE4的水平，并對其在過敏性猝死診斷中的應(yīng)用價值進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

免疫正常人108例，年齡19～68歲，其中男性50例，女性58例。受試者均通過詢問病史、臨床檢查排除患有過敏性疾病和其他免疫系統(tǒng)疾病。過敏性猝死組6例，均來自本教研室2009至2012年法醫(yī)學(xué)鑒定的案例，死后診斷主要是根據(jù)接觸過敏原史、發(fā)病過程、臨床表現(xiàn)、死亡過程和尸體解剖（死后10～48h），并嚴(yán)格排除其他死亡原因。對照組為非過敏性猝死案例23例：其中顱腦損傷死亡4例，冠心病猝死6例，心肌病1例，一氧化碳中毒4例、肺炎4例、機(jī)械性窒息4例。尸體均經(jīng)過系統(tǒng)的尸體檢驗（死后10～48h）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本處理

留取正常人和提取尸體膀胱尿液5mL：2mL尿液用于檢測尿肌酐；余尿液1500r/min、5min離心后取上清測尿PGD2、LTE4。結(jié)果以尿PGD2或LTE4水平/尿肌酐水平（ng/mg）表示，以排除腎排泄因素的影響。

1.2.2 儀器和試劑

所用儀器為Wellscan MK3酶標(biāo)儀、Wellwash MK2洗板機(jī)（Thermo Labsystem）、Hitachi 7170A全自動生化分析儀（日立公司）。人前列腺素D2、白三烯4ELISA檢測試劑盒均購自武漢華美生物工程有限公司，尿肌酐試劑購自深圳邁瑞公司。

1.2.3 PGD2和LTE4含量測定

采用ELISA雙抗體夾心法測定尿液PGD2和LTE4含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的OD值。采用苦味酸法檢測尿肌酐的濃度。

1.2.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有測定結(jié)果均采用（）表示。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用最小顯著差異法（LDS-t）。相關(guān)性比較采用直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 尿PGD2、LTE4含量測定結(jié)果

免疫正常人組、對照組和過敏性猝死組尿PGD2/尿肌酐、LTE4/尿肌酐水平檢測結(jié)果見表1。

表1 三組尿PGD2/尿肌酐、LTE4/尿肌酐水平（ng/mg creatinine，）

實驗結(jié)果表明：過敏性猝死組尿PGD2/尿肌酐、LTE4/尿肌酐水平顯著高于對照組及免疫正常人組（P＜0.05）。對照組與免疫正常人組間也有顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 過敏性猝死組PGD2與LTE4的相關(guān)性分析

對過敏猝死組中的PGD2/尿肌酐與LTE4/尿肌酐的值作Pearson相關(guān)分析，得r=0.798，P=0.057，示過敏性猝死組PGD2/尿肌酐與LTE4/尿肌酐呈正相關(guān)。

3 討 論

嚴(yán)重過敏反應(yīng)是一種嚴(yán)重的、危及生命的全身性超敏反應(yīng)。近年來過敏性疾病已經(jīng)成為21世紀(jì)嚴(yán)重影響人類健康的全球性疾病。嚴(yán)重的過敏反應(yīng)可導(dǎo)致過敏性休克，不僅是臨床醫(yī)學(xué)的一大難點，也常常引起醫(yī)療糾紛等一系列法律問題。據(jù)文獻(xiàn)報道和我們前期的研究觀察，國外如美國的馬里蘭州、澳大利亞、意大利，食物是引起過敏反應(yīng)性死亡的首要原因；而在中國等國家，目前引起過敏性死亡的主要原因是藥物過敏反應(yīng)，特別是抗生素類藥物。顯然藥物過敏反應(yīng)已經(jīng)成為我國過敏反應(yīng)的主要原因及公共健康問題。但過敏性死亡常規(guī)尸檢并無特異性的病理改變，加之死后存在細(xì)胞自溶和化學(xué)物質(zhì)的降解，其法醫(yī)學(xué)死后診斷還面臨巨大的困難。故尋找準(zhǔn)確的過敏性猝死診斷標(biāo)記物勢在必行。

盡管目前有一些可幫助診斷過敏性猝死的指標(biāo)，包括IgE、組胺、類胰蛋白酶等，但其在實際應(yīng)用中還存在許多問題。血清總IgE或特異性IgE受水平、年齡、寄生蟲感染等多種因素影響，正常含量變化范圍大，且無統(tǒng)一的檢測方法[4-5]。血漿組胺半衰期極短，不易檢測到。血清總類胰蛋白酶水平，也可因非IgE依賴性途徑而升高，且在發(fā)生食物過敏或低血壓、非休克狀態(tài)時，類胰蛋白酶水平很少增高[6-7]。

死后尸體血清常由于尸體存放時間過長、運(yùn)輸過程易發(fā)生搖晃等多種因素發(fā)生溶血，進(jìn)而影響結(jié)果的測定。尿液則相對穩(wěn)定，故本文搜集并測定尸體尿液中相關(guān)的成分。為了以排除個體腎排泄因素影響，本文結(jié)果以尿PGD2或LTE4水平/尿肌酐水平（ng/mg）表示。

PGD2主要來源于肥大細(xì)胞的活化，尚有部分源于血小板、活化的巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、Th2細(xì)胞亞群[8]。體外實驗已證實[9-10]，PGD2和組胺一樣是抗原刺激肥大細(xì)胞產(chǎn)生的花生四烯酸衍生物。PGD2能有效的誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞聚集，有廣泛的炎癥作用，是過敏反應(yīng)重要的調(diào)節(jié)分子。過敏性休克猝死時，肥大細(xì)胞活化和脫顆粒導(dǎo)致尿液中PGD2含量增高，故尿液中PGD2水平有助于診斷過敏性休克。

白三烯（Leukotrienes，LTs）作為嚴(yán)重過敏時活化的肥大細(xì)胞脫顆粒所釋放的介質(zhì)之一，其炎癥作用日益受到重視。臨床實踐中，尤其在哮喘的診斷和治療上已被廣泛研究[11-12]。但在過敏性猝死法醫(yī)學(xué)診斷的應(yīng)用卻鮮有報道。其中，尿LTE4以占體內(nèi)白三烯含量的4%～7%的比例相對恒定排泄，故以LTE4水平衡量體內(nèi)白三烯的含量[13]。

本實驗使用雙抗體夾心法測定過敏猝死死者體內(nèi)PGD2的水平，其結(jié)果顯著高于正常免疫人及對照組，表明尿液中的PGD2或LTE4水平/尿肌酐水平可以作為過敏性休克猝死診斷的實驗室檢測方法。本實驗結(jié)果還表明，非過敏死因組（對照組）與正常人組間也有顯著性差異，表明尸體尿液較活體成分不是完全一致的，故過敏性休克的死后診斷不能完全依靠臨床醫(yī)學(xué)參考值范圍，而需要建立新的尸體參考值范圍。

[1] 中國醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)分會.哮喘免疫治療研討會紀(jì)要[J].中國結(jié)核和呼吸雜志,23(10):586-587.

[2] Arimura A,Yasui K,Kishino J,et al.Prevention of allergic inflammation by a novel prostaglandin receptor antagonist,S-5751[J].J Pharmacol Exp Ther,2001,298(2):411-419.

[3] Kaneko I,Suzuki K,Matsuo K,et al.Cysteinyl leukotrienes enhance the degranulation of bone marrow-derived mast cells through the autocrine mechanism[J].Tohoku J Exp Med,2009,217(3):185-191.

[4] Baur X,Szuppon A.Diagnostic validation of specific IgE antibody concentrations,skin prock testing,and challenge tests in chemical workers with symptoms of sensitivity different anhy-drides[J]. Allergy Clin Immunol,1995,96(4):489-494.

[5] 曾迎紅,張丹,樹葉,等.437例變態(tài)反應(yīng)性疾病患兒血清特異性IgE抗體檢測和分析[J].中國當(dāng)代兒科雜志,2009,11(7):543-545.

[6] Sampson HA,Mendelson L,Rosen JP.Fatal and near-fatal anaphylactic reactions to food in children and adolescents[J].N Engl J Med,1992,327(6):380-384.

[7] 任華麗,張宏譽(yù).類胰蛋白酶在過敏性疾病診斷中的應(yīng)用[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2005,28(8):828-830.

[8] 應(yīng)延風(fēng),胡野.前列腺素D2對支氣管哮喘免疫細(xì)胞功能調(diào)解作用[J].國際呼吸雜志,2007,27(11):837-842.

[9] Powell WS.Novel PGD(2) receptor expressed in eosinophils[J]. Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids,2003,69(2-3):179-185.

[10] Spik I,Brenuchon C.Activation of the prostaglandin D2receptor DP2/CRTH2 increase allergic inflammation in mouse[J].J Immunol,2005,174(6):3703-3708.

[11] Knorr B,Franechi LM.Montelukast,a leukotriene receptor antagonist,for the treatment of persistent asthma in children aged 2 to 5 years[J].Pediatrics,2005,108(5):E48.

[12] Kleinman R,Mura M,Liu MY.半胱酰胺白三烯拮抗劑治療兒童哮喘[J].中國當(dāng)代兒科雜志,2005,7(5):398-403.

[13] Smith CM,Hawksorth RJ,Thien FC.Urinary leukotriene E4in bronchial asthma[J].Eur Respir J,1992,5(6):693-699.

Evaluation on the Applicability of Prostaglandin D2and Leukotriene E4Assay to Postmortem Diagnosis of the Sudden Death from Hypersensitivity

JIN Qian-qian1, GUO Xiang-jie1, CAO Ai-kui2, XU Su-jun3, GAO Cai-rong1*
(1 Forensic Medicine, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China; 2 Loufan Public Security Bureau, Loufan 030300, China; 3 Xiaodian Public Security Bureau, Taiyuan 030002, China)

ObjectiveTo determine prostaglandin D2(PGD2)and leukotriene E4(LTE4) concentration in urinary samples of the individuals who were certified as sudden death from hypersensitivity and to explore the significance of them in the diagnosis of hypersensitivity .MethodsUrinary level of PGD2and LTE4were measured in 108 healthy adults, 6 cases died from hypersensitivity and 23 cases died from other reasons which excludes hypersensitivity by sandwich enzyme immunoassay technique.ResultsThe urinary levels of PGD2and LTE4in cases deid from hypersensitivity were significantly higher than those in healthy adults and 23 cases died from other reasons which excludes hypersensitivity(P＜0.05), so did the significance between the health adults and cases died from other reasons. There was a significantly positive correlation between urinary PGD2and LTE4(r=0.798, P=0.057).ConclusionUrinary PGD2and LTE4increase in cases died from hypersensitivity suggesting that PGD2and LTE4may serve as the indexes for the diagnosis of sudden death from hypersensitivity.

Forensic pathology; Sudden death from hypersensitivity; Prostaglandin D2; Leukotriene E4; ELISA

R392.8

B

1671-8194（2013）11-0001-02

國家自然基金項目資助（項目編號81172905）

*通訊作者：E-mail： Gaocairong5175@163.com