張 昀，胡海廷，李 欽

（河南大學(xué) 藥學(xué)院，河南 開(kāi)封 475004）

視明顆粒劑由柴胡、木賊、羌活、防風(fēng)、甘草等13味中藥組成，有活血理氣、疏肝明目的功效。該制劑成分干擾大，質(zhì)量控制非常不易，處方中的藥材鑒別未見(jiàn)報(bào)道。為適應(yīng)我國(guó)中藥現(xiàn)代化的要求，我們對(duì)該顆粒劑中的全部藥材進(jìn)行了鑒別研究，填補(bǔ)了該處方質(zhì)量控制中定性鑒別的空白。

1 儀器及試藥

1.1 儀器

KQ－300VDE超聲提取器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

丹參酮ⅡA 對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110766－200714）；芍藥苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736－200722）；其余試劑均為分析純；樣品自制。

2 方法與結(jié)果

選擇主要有效成分對(duì)制劑中蒼術(shù)、丹參、赤芍、柴胡、木賊、羌活、防風(fēng)、橘紅、生地、白術(shù)、懷牛膝、菟絲子、甘草進(jìn)行檢識(shí)［1－5］，照薄層色譜法（2010版藥典一部附錄ⅥB）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2.1 羌活

取樣品10g，研細(xì)，置250mL 圓底燒瓶中，加水100mL，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，在提取柱下端預(yù)先放置5mL石油醚，加熱回流6h，將石油醚部分取出，濃縮至1mL，作為供試品溶液。取羌活對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得羌活空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（7∶3）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%香草醛硫酸試液為顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1。

2.2 柴胡

取樣品10g，加水30mL，超聲10min，用乙醚萃取2次，每次20mL，棄去乙醚液，用飽和濃度的正丁醇萃取2次，每次20mL，合并正丁醇液，水浴蒸干，加1mL甲醇溶解，即為供試品溶液。取柴胡對(duì)照藥材粉末0.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得柴胡空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（8∶2∶1）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%對(duì)二甲氨基苯甲醛與體積分?jǐn)?shù)為40%硫酸溶液的混合液為顯色劑，60℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖2。

2.3 蒼術(shù)

取樣品10g，研細(xì)，置250mL圓底燒瓶中，加水100mL，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，在提取柱下端預(yù)先放置5 mL 乙醚，加熱回流6h，將乙醚部分取出，揮干乙醚，殘?jiān)右宜嵋阴?mL 溶解，作為供試品溶液。取蒼術(shù)對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得蒼術(shù)空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（20∶1）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%對(duì)二甲氨基苯甲醛與體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸溶液的混合液為顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，并應(yīng)顯有一相同的污綠色主斑點(diǎn)（蒼術(shù)素）；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖3。

2.4 橘紅

取樣品10g，研細(xì)，加甲醇20mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。取橘紅對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得橘紅空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一用5g／L 氫氧化鈉溶液制備的硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（100∶17∶10）為展開(kāi)劑，展開(kāi)約3cm，取出，晾干，再以甲苯－乙酸乙酯－甲酸－水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開(kāi)劑，三氯化鋁試液為顯色劑，置紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖1 羌活定性鑒別圖

圖2 柴胡定性鑒別圖

圖3 蒼術(shù)定性鑒別圖

圖4 橘紅

2.5 防風(fēng)

取樣品15g，研細(xì)，加丙酮30mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1mL溶解，作為供試品溶液。取防風(fēng)對(duì)照藥材粉末1.5g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得防風(fēng)空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以三氯甲烷－甲醇（4∶1）為展開(kāi)劑，置紫外光燈254nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖5。

2.6 丹參

取樣品15g，研細(xì)，加乙醚30 mL，振搖，放置1h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL 溶解，作為供試品溶液。取丹參對(duì)照藥材粉末1g，加乙醚5mL，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得丹參空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。取丹參酮ⅡA 對(duì)照品，加乙酸乙酯制成2g／L 丹參酮ⅡA 對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）為展開(kāi)劑。供試品色譜中，對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)；與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同暗紅色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖6。

2.7 赤芍

取樣品20g，研細(xì)，加乙醚30mL，超聲10min，濾過(guò)，棄去濾液，殘?jiān)蛹状汲?0min，提取2次，每次30mL，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL 溶解，用飽和濃度的正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，加氨試液5mL洗滌。用飽和濃度的正丁醇洗滌2次，每次15mL，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1mL溶解，拌入中性氧化鋁2g，水浴蒸干。上中性氧化鋁柱（100～200 目，4 g，內(nèi)徑10～15mm），以乙酸乙酯30 mL 預(yù)洗，繼以甲醇40 mL洗脫，收集甲醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 溶解，作為供試品溶液。取赤芍對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得赤芍空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。取芍藥苷對(duì)照品，加甲醇制成0.5g／L芍藥苷對(duì)照品溶液，即得對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各20μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－甲酸（40∶5∶10∶0.2）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%香草醛硫酸試液為顯色劑，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同藍(lán)紫色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖7。

2.8 木賊

取樣品20g，加體積分?jǐn)?shù)為75%甲醇50mL、鹽酸2mL，加熱1h，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL溶解，用乙酸乙酯提取2次，每次10mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，殘?jiān)蛹状? mL 溶解，作為供試品溶液。取木賊對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得木賊空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯－甲酸（8∶4∶0.4）為展開(kāi)劑，50g／L三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，立即置紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色熒光斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖8。

圖5 防風(fēng)

圖6 丹參

圖7 赤芍

圖8 木賊

2.9 菟絲子

取樣品15g，加石油醚30mL，超聲30min，棄去石油醚液，殘?jiān)蛹状?0mL，超聲30min，濾過(guò)，濾液濃縮至干，加甲醇1 mL 溶解，作為供試品溶液。取菟絲子對(duì)照藥材粉末2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得菟絲子空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以乙酸乙酯－丁酮－甲酸－水（11∶1∶1∶1）為展開(kāi)劑，三氯化鋁試液為顯色劑，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置紫外光燈254nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖9。

2.10 生地

取樣品10g，加乙醚30mL，超聲提取10min，濾過(guò)，蒸干濾液，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。取生地對(duì)照藥材粉末2g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得生地空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－氨水（8∶2∶0.2）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%香草醛硫酸試液和茴香醛試液的混合液為顯色劑，105℃加熱至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖10。

2.11 白術(shù)

取樣品10g，加水50mL，超聲30min，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，水浴蒸干，加1mL甲醇溶解，作為供試品溶液。取白術(shù)對(duì)照藥材粉末1g，加乙醚30mL，超聲10min，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得白術(shù)空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以環(huán)己烷－乙酸乙酯（7∶3）為展開(kāi)劑，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%對(duì)二甲氨基苯甲醛與體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液的混合液為顯色劑，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖11。

圖9 菟絲子

圖10 生地

圖11 白術(shù)

2.12 甘草

取樣品20g，加乙醚40mL，超聲15min，提取2次，棄去乙醚液，加甲醇50mL，超聲30min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0mL 溶解，正丁醇提取3次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用飽和濃度的正丁醇洗滌3次，每次20mL，取正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?mL溶解，作為供試品溶液。取甘草對(duì)照藥材粉末1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得甘草空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一用10g／L 氫氧化鈉溶液制備的硅膠 G 薄層板上，以乙酸乙酯－甲酸－水（15∶3∶2）為展開(kāi)劑，體積分?jǐn)?shù)為10%硫酸乙醇溶液為顯色劑，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光及紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖12、圖13。

2.13 牛膝

取樣品20g，加乙醇50mL，加熱回流40min，取上清液30mL，加鹽酸3mL，加熱回流1h，濃縮至約5mL，加水10mL，用石油醚（60～90℃）20mL提取，提取液蒸干，殘?jiān)右掖? mL 溶解，作為供試品溶液。取牛膝對(duì)照藥材粉末4g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按成品方法制得牛膝空白顆粒，同法制成陰性對(duì)照液。吸取上述溶液各20μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以三氯甲烷－甲醇（30∶1）為展開(kāi)劑，磷鉬酸試液為顯色劑，110℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)；陰性對(duì)照色譜上無(wú)干擾。結(jié)果見(jiàn)圖14。

圖12 甘草

圖13 甘草

圖14 牛膝

3 討論

視明顆粒方劑藥物經(jīng)幾十年的臨床驗(yàn)證，療效確切，為治療血瘀氣滯型視網(wǎng)膜病變的經(jīng)驗(yàn)方。對(duì)制劑中所有成分蒼術(shù)、丹參、赤芍、柴胡、木賊、羌活、防風(fēng)、橘紅、生地、白術(shù)、懷牛膝、菟絲子、甘草進(jìn)行檢識(shí)，檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)便、重視性好。其中，赤芍的薄層鑒別采用中性氧化鋁柱，除去樣品中黃酮類成分的背景干擾，色譜圖更清晰準(zhǔn)確。對(duì)柴胡、菟絲子、生地干擾成分多的鑒別，摸索出了合適的色譜系統(tǒng)，分離效果好。

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