黃若干藍(lán)鳴生黃平權(quán)陳 路覃佩莉梁 峰

1.廣西盈康藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023

RP－HPLC法測定三味清熱止癢洗劑中鹽酸麻黃堿的含量

黃若干1藍(lán)鳴生2黃平權(quán)1陳 路2覃佩莉1梁 峰1

1.廣西盈康藥業(yè)有限責(zé)任公司，廣西 南寧 530023；2.廣西壯族自治區(qū)藥用植物園，廣西 南寧 530023

目的：建立三味清熱止癢洗劑中鹽酸麻黃堿的含量測定方法。方法：采用反相高效液相色譜法，Inertsil ODS－SP C18（150mm×4.6μm）色譜柱，流動(dòng)相：甲醇－水－冰乙酸（50∶50∶1），檢測波長262nm。結(jié)果：鹽酸麻黃堿在0.0504～1.0080μg內(nèi)線性關(guān)系良好。平均回收率99.8%，RSD＝1.20（n＝9）。結(jié)論：該方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，可用于三味清熱止癢洗劑中鹽酸麻黃堿的含量測定。

三味清熱止癢洗劑；鹽酸麻黃堿；反相高效液相色譜法

三味清熱止癢洗劑是由敗醬草、麻黃、威靈仙三味藥材制成，具清熱燥濕、解毒祛風(fēng)止癢之功效，用于濕熱風(fēng)毒瘀阻所致的外陰瘙癢，癥見局部皮膚干燥、肥厚、瘙癢難忍者。原標(biāo)準(zhǔn)對(duì)方中麻黃主要成分鹽酸麻黃堿的測定采用薄層掃描法，檢測方法較為滯后，重現(xiàn)性不理想，因此對(duì)本品中鹽酸麻黃堿的含量測定方法進(jìn)行改進(jìn)，是非常必要和必須的。根據(jù)文獻(xiàn)［1－3］報(bào)道及預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本品中鹽酸麻黃堿的含量測定方法作了修訂，采用RP－HPLC對(duì)其進(jìn)行研究和測定，方法簡便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)。

1 儀器及試藥

日本島津公司LC－10ATVP高效液相色譜儀；SPD－10AVP分光光度計(jì)；威瑪龍色譜工作站；BP211D十萬分之一電子天平；鹽酸麻黃堿對(duì)照品 （中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：171241－200506）；三味清熱止癢洗劑樣品由廣西盈康藥業(yè)有限責(zé)任公司提供；甲醇為色譜純；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇－水－冰乙酸 （50∶50∶1）為流動(dòng)相；檢測波長262nm；柱溫：室溫，流速：1.0ml／mi，理論塔板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 專屬性試驗(yàn)取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1ml含60μg的溶液，搖勻，精密量取10ml，置25m l量瓶中，加入0.1mol／L的高碘酸試液1ml，搖勻，加入濃氨試液1ml，振搖5分鐘，加20%的冰乙酸溶液1m l，搖勻，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，制成24μg／L的對(duì)照品溶液；精密量取本品10ml，加2mol／L的氫氧化鈉溶液125m l，搖勻，加氯化鈉10g，振搖使溶解后，蒸餾，用盛有1mol／L鹽酸溶液1m l的100m l量瓶收集蒸餾液近95m l，加水至刻度，搖勻，精密量取10ml，置25m l量瓶中，按照對(duì)照品溶液制備方法，自加入高碘酸試液起，至用流動(dòng)相稀釋至刻度止，依法操作，搖勻，制成供試品溶液；按三味清熱止癢洗劑原標(biāo)準(zhǔn)的處方、工藝制備不含麻黃的陰性樣品，照供試品溶液制備方法制備成陰性樣品溶液。分別精密量取上述溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得，記錄色譜圖 （見圖1、2、3）。在上述色譜條件下，鹽酸麻黃堿峰的峰形和分離度均良好，陰性溶液在相應(yīng)保留時(shí)間無雜峰干擾。

圖1 鹽酸麻黃堿對(duì)照品HPLC色譜圖

圖2 三味清熱止癢洗劑供試品HPLC色譜圖

圖3 缺麻黃陰性樣品HPLC色譜圖

2.3 線性關(guān)系考察 精密量取鹽酸麻黃堿對(duì)照品貯備液（含鹽酸麻黃堿0.126mg／ml）1、5、10、15、20ml，分別置25ml容量瓶中，加入0.1mol／L的高碘酸溶液1ml，搖勻，加入濃氨試液1ml，振搖5分鐘，加20%的冰乙酸溶液1ml，搖勻，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別精密吸取以上溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量 （μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得回歸方程為：Y＝3386509.759X－4309.1369，r＝0.9999（n＝5）。結(jié)果表明，鹽酸麻黃堿在0.0504～1.0080μg之間呈良好線性關(guān)系。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品同一批樣品6份，在上述色譜條件下測定鹽酸麻黃堿含量，結(jié)果分別為0.7000、0.6991、0.6924、0.6940、0.6967、0.6888 mg／m l，RSD＝0.61（n＝6）。結(jié)果表明，本法用重復(fù)性良好。

2.5 中間精密度試驗(yàn) 精密吸取本品同一份樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定其中鹽酸麻黃堿含量，分別在不同的日期、不同分析人員、不同的高效液相色譜儀等條件下制備供試品測定，結(jié)果為：島津LC－10AT高效液相色譜儀的測定值為0.6920、0.6898、0.6921、0.6903、0.6950、0.6896 mg／m l，RSD＝0.29（n＝6）；島津LC－20AT高效液相色譜儀的測定值為0.6887、0.6940、0.6983、0.6870、0.6920、0.6976mg／m l，RSD＝0.66（n＝6）；威瑪龍高效液相色譜儀的測定值為0.6867、0.6902、0.6940、0.6970、0.6941、0.6852mg／m l，RSD＝0.67（n＝6）。說明本法用于三味清熱止癢洗劑中鹽酸麻黃堿含量測定，中間精密度良好。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知鹽酸麻黃堿含量的本品3ml（含鹽酸麻黃堿1.0525mg／ml），分別精密加入對(duì)照品儲(chǔ)備溶液（濃度為0.5127mg／m l）5、7、9ml，低、中、高濃度各3份，依法處理測定。結(jié)果平均回收率為99.8%，RSD＝1.2%（n＝9），表明本法準(zhǔn)確性良好。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，每隔2h進(jìn)樣一次，依法測定其峰面積，直至12h。峰面積分別為338324、331827、335429、332803、328703、334566、332051，平均峰面積333386，RSD＝0.92（n＝6）。結(jié)果表明，所制備的供試品在12小時(shí)內(nèi)進(jìn)樣，能滿足含量測定的要求。

2.8 樣品含量的測定 按上述方法分別對(duì)10批產(chǎn)品進(jìn)行含量測定，為考察有效期內(nèi)產(chǎn)品的鹽酸麻黃堿含量情況，測定結(jié)果見表2。

表2 十批產(chǎn)品含量測定

3 討論

在供試品溶液配制實(shí)驗(yàn)中，分別嘗試過乙醚萃取法、蒸餾法進(jìn)行處理后，再按照對(duì)照品溶液處理方法依次加入高碘酸溶液、濃氨試液、冰乙酸溶液等進(jìn)行處理，結(jié)果乙醚萃取法因萃取過程中溶液極易乳化，水層和乙醚層難以分離，方法繁瑣、耗時(shí)，且主成分峰前沿有一雜質(zhì)峰干擾，未采用。最終以蒸餾法制備方法簡便，供試液較澄清，鹽酸麻黃堿成分提取完全，主成分色譜峰不受雜峰干擾等優(yōu)點(diǎn)而采用。在高碘酸溶液衍生化過程，最初使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值，但在進(jìn)樣測定時(shí)出現(xiàn)鈉鹽遇有機(jī)溶劑析出沉淀，堵塞儀器流動(dòng)相管路，后經(jīng)優(yōu)化和改進(jìn)，改用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值，解決了鈉鹽析出堵塞儀器流動(dòng)相管路的問題。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，建立的測定方法較原標(biāo)準(zhǔn)采用的薄層掃描法簡便、準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可用于三味清熱止癢洗劑的含量測定及質(zhì)量控制。

［1］周玲，吳德康，唐于平，等.麻黃中化學(xué)成分研究進(jìn)展 ［J］.南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，24（1）：71－74.

［2］國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典 （一部）［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：300，496，489.

［3］楊輝.HPLC法測定三味清熱止癢洗劑中麻黃堿的含量［J］.廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，9（3）：75－77.

Determ ination of Ephedrine Hydrochloride in Sanwei Qingre Anti－itch Lotion by RP－HPLC

HUANG Ruo-gan1LAN Ming-sheng2HUANG Ping-quan1LU Chen2QIN Pei－li1LIANG Feng1
（1.Guangxi Yingkang Pharmacy Co.Ltd.，Nanning 530023；2.Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plant，Nanning 530023）

Objective：Establish amethod to determine the ephedrine hydrochloride in SanweiQingre anti－itch lotion.Methods RP－HPLC analysis was carried out in the condition of Inertsil ODS－SP C18 column（150mm×4.6μm），the mobile phase was methanol－water－acetic acid glacial（50：50：1），the detection wave－length was 262nm.Results：The ephedrine hydrochloride showed a good linearity at a range of 0.0504～1.0080μg，and the average recovery was 99.8%（RSD＝1.20，n＝9）.Conclusion：Themethod is rapid，accurate and specific.It can be used in the quantitative determination of the ephedrine in SanweiQingre anti－itch lotion.

SanweiQingre anti－itch lotion；ephedrine hydrochloride；RP－HPLC

R284.1

A

1007－8517（2013）20－0009－02

2013.08.21）

廣西壯族自治區(qū)科技廳千億元重大科技攻關(guān)工程項(xiàng)目（桂科攻11107010－3－7）。

黃若干 （1973－），男，本科。主要從事中藥制劑分析及中藥研究開發(fā)。