周 威 牟定浪 郝小燕

貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550004

沙塘木總生物堿提取工藝研究

周 威 牟定浪 郝小燕

貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550004

目的：探討沙塘木藥材中總生物堿的提取工藝。方法：通過對(duì)沙塘木總生物堿提取參數(shù)中乙醇濃度、固液比、提取時(shí)間及提取次數(shù)進(jìn)行單因素試驗(yàn)，采用正交優(yōu)化試驗(yàn)法進(jìn)一步優(yōu)化，以沙塘木總生物堿提取率作為考察指標(biāo)。優(yōu)化沙塘木總生物堿的提取工藝。結(jié)果：經(jīng)過正交試驗(yàn)得出的最佳工藝條件為：乙醇濃度50%，固液比1：120，提取時(shí)間1.25h，水浴回流提取4次，在此條件下沙塘木總生物堿的平均提取率為59.88μmol／g，平均浸膏得率為8.17%。結(jié)論：經(jīng)優(yōu)化得到的沙塘木總生物堿的提取工藝穩(wěn)定、可行，沙塘木提取物中總生物堿提取率最高。

沙塘木；總生物堿；提取工藝；正交試驗(yàn)

沙塘木為蕓香科植物山油柑Acronychia pedunculata （L.）Miq.的干燥莖枝及葉。沙塘木性平，味辛、苦。歸肝、胃、肺經(jīng)。具有行氣止痛，化痰止咳，活血祛瘀的功效。主治支氣管炎，感冒咳嗽，風(fēng)濕性腰腿痛，跌撲瘀痛，胃痛，疝氣痛［1］。以沙塘木為主要組方藥材的中藥專利保護(hù)產(chǎn)品白沙塘漿，由于療效確切，質(zhì)量穩(wěn)定，深受患者親睞。

經(jīng)文獻(xiàn)檢索未見沙塘木藥材的研究報(bào)道，對(duì)沙塘木開展相關(guān)基礎(chǔ)性研究工作是十分必要的。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用L9（34）正交優(yōu)化試驗(yàn)，優(yōu)化沙塘木總生物堿的提取工藝，為沙塘木總生物堿的開發(fā)研究奠定基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

N－1000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海艾朗儀器有限公司），SHB －III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)域科工貿(mào)有限公司），AY－120型分析電子天平（日本島津），電子控溫水浴鍋（上海愛朗儀器有限公司），101－2電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠），KQ－250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），DFT－200C型粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）。

沙塘木藥材由貴陽(yáng)德昌祥藥業(yè)有限公司提供，為蕓香科植物山油柑Acronychia pedunculata（L.）Miq.的干燥莖枝，粉碎，過24目篩，備用。實(shí)驗(yàn)所用試劑（濃硫酸、氫氧化鈉、無(wú)水乙醇、甲基紅、溴甲酚綠、氯仿、碘化鉍鉀、碘化鉀、碘、硅鎢酸、冰醋酸等）均為分析純。水為自制蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 沙塘木總生物堿的含量測(cè)定

2.1.1 甲基紅－溴甲酚綠顯色劑的配制 精密稱取0.0500g的甲基紅固體，放入50mL的容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，得到0.1%甲基紅。精密稱取0.1000g溴甲酚綠固體，放入50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度，得到0.2%溴甲酚綠。然后取0.1%甲基紅20mL與0.2%溴甲酚綠30mL放入容量瓶中混合均勻，得到0.04%甲基紅－0.12%溴甲酚綠顯色劑。

2.1.2 0.01mol／L硫酸的配制 取0.5mL的濃硫酸放入裝有一定量蒸餾水的10mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度。取被稀釋硫酸0.5mL放入裝有一定量蒸餾水的10mL的容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，得到0.046mol／L的硫酸溶液。按照取1mL 0.046mol／L硫酸與3.6mL蒸餾水的比例，混合得到0.01mol／L硫酸滴定液。

2.1.3 0.02mol／L氫氧化鈉的配制 用蒸餾水配制飽和氫氧化鈉，取上述飽和氫氧化鈉1mL放入10mL量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度。取該氫氧化鈉溶液1mL放入100mL量瓶中用蒸餾水稀釋至刻度，得到0.02mol／L的氫氧化鈉。

取0.01mol／L的硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液4.6mL于錐形瓶中，加入甲基紅－溴甲酚綠1滴。用待校正的0.02mol／L氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定，結(jié)果消耗該氫氧化鈉溶液4.7mL。計(jì)算得到配制的0.02mol／L氫氧化鈉實(shí)際濃度為0.0196mol／L。濃度校正因子F＝0.98。

2.1.4 總生物堿含量的測(cè)定 取浸膏0.01g于錐形瓶中，加2mL氯仿超聲10min溶解樣品；然后加入9.2mL 0.01mol／L硫酸溶液，水浴加熱，除去氯仿。冷卻后，加入甲基紅－溴甲酚綠顯色劑2滴，用0.02mol／L氫氧化鈉溶液進(jìn)行滴定。根據(jù)公式［2］計(jì)算沙塘木總生物堿提取率（μmol／g藥材）。

沙塘木總生物堿的定性鑒別 沙塘木乙醇提取物溶液，①滴加碘化鉍鉀試劑，溶液變?yōu)槌燃t色，且有橙紅色沉淀出現(xiàn)。②滴加碘－碘化鉀試劑，溶液有棕色沉淀出現(xiàn)。③滴加硅鎢酸試劑，溶液變?yōu)辄S色，且出現(xiàn)黃色沉淀。根據(jù)以上三種經(jīng)典生物堿沉淀反應(yīng)情況，推斷沙塘木的乙醇提取物中含有生物堿類成分。結(jié)果與酸堿滴定相同。

2.3 單因素試驗(yàn)考察

2.3.1 提取溶媒的選擇 稱取沙塘木粗粉5g，分別加入20倍量的30%、50%、70%、90%乙醇，水浴回流提取1次，提取時(shí)間為1.0h。濾過，用少量提取溶液洗滌，濾液濃縮，干燥得到浸膏。按“2.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算沙塘木總生物堿提取率（μmol／g）。結(jié)果見圖1。

結(jié)果表明，50%乙醇溶液作為提取溶媒時(shí)，沙塘木總生物堿提取率最高，乙醇濃度過高或過低并不增加浸出液中總生物堿含量，故選擇50%乙醇溶液作為提取溶媒。

2.3.2 固液比的選擇 稱取沙塘木粗粉5～2g，分別加入1：10，1：20，1：40，1：80，1：100倍量的50%乙醇溶液，水浴回流提取1次，提取時(shí)間為1.0h。濾過，用少量提取溶液洗滌，濾液濃縮，干燥得到浸膏。按“2.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算沙塘木總生物堿提取率（μmol／g）。結(jié)果見圖2。結(jié)果顯示，沙塘木總生物堿的提取率隨著乙醇溶液的用量增大而升高，因此選擇1：100作為最佳固液比。

2.3.3 提取時(shí)間的選擇 準(zhǔn)確稱取沙塘木粗粉5g，加入20倍量的50%乙醇溶液，水浴回流提取1次，提取時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、3.0h。濾過，用少量提取溶液洗滌，濾液濃縮，干燥得到浸膏。按“2.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算沙塘木總生物堿提取率（μmol／g）。結(jié)果見圖3。

結(jié)果顯示，提取時(shí)間為1.0h，沙塘木總生物堿提取率最高，但是隨著回流時(shí)間的延長(zhǎng)，總生物堿含量并不升高，甚至有所下降，可能是長(zhǎng)時(shí)間加熱引起藥材中不穩(wěn)定生物堿的分解、破壞，故選擇1.0 h作為最佳提取時(shí)間。

2.3.4 提取次數(shù)的選擇 準(zhǔn)確稱取沙塘木粗粉5g，加入20倍量的50%乙醇溶液，水浴回流提取分別為1、2、3次，每次提取1.0h。濾過，用少量提取溶液洗滌，濾液濃縮，干燥得到浸膏。按“2.1.4”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算沙塘木總生物堿提取率（μmol／g）。結(jié)果見圖4。最終選擇提取次數(shù)為三次。

2.4 正交優(yōu)化試驗(yàn)考察 綜合單因素考察結(jié)果，選擇乙醇濃度、固液比、提取時(shí)間和提取次數(shù)為影響因素，各因素設(shè)定3個(gè)水平，按L9（34）表安排實(shí)驗(yàn)，計(jì)算總生物堿提取率，正交試驗(yàn)安排及結(jié)果見表1，方差分析結(jié)果見表2。

以總生物堿提取率為考察指標(biāo)，直觀分析觀察，各因素對(duì)沙塘木總生物堿提取影響的順序依次為A＞D＞B＞C。方差分析結(jié)果表明乙醇濃度、提取次數(shù)對(duì)總生物堿提取影響具有顯著性差異（P＜0.05）。最終確定最佳提取工藝為A2B3C3D3，即沙塘木粗粉加120倍量50%的乙醇，提取1.25h，提取4次。

表1 L9（34）因素水平及正交試驗(yàn)結(jié)果表

表2 沙塘木總生物堿提取工藝方差分析表

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 稱取沙塘木粗粉2g，共6份。按上述最佳提取提取工藝：即沙塘木粗粉加120倍量50%的乙醇，水浴回流提取1.25h／次，提取4次。表3顯示在此條件下沙塘木總生物堿的平均提取率為59.88μmol／g，平均浸膏得率為8.17%。按此優(yōu)化條件進(jìn)行提取時(shí)，沙塘木總生物堿含量穩(wěn)定，提取條件合理可行。

3 討論

通過正交試驗(yàn)優(yōu)選沙塘木總生物堿的最佳提取工藝，確立了最佳提取方案，沙塘木總生物堿提取率最高。該提取方法合理、簡(jiǎn)單、可行，沙塘木提取物的生物堿鑒別反應(yīng)結(jié)果，說明該藥材含有生物堿類成分。在預(yù)試驗(yàn)中，沙塘木提取物的鹽酸－鎂粉化學(xué)鑒別反應(yīng)、醋酐－硫酸化學(xué)鑒別反應(yīng)均為陰性結(jié)果，提示沙塘木藥材中不含或幾乎沒有黃酮類和皂苷類成分。

表3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

滴定步驟是本次試驗(yàn)的關(guān)鍵，對(duì)0.02mol／L NaOH溶液進(jìn)行濃度校正，要確保每次滴定終點(diǎn)的顏色一致，以保證結(jié)果的真實(shí)性和準(zhǔn)確性。在水浴揮發(fā)氯仿的步驟中，一定要等到錐形瓶中的液體沒有刺鼻味才能取下來(lái)等其冷卻，再進(jìn)行下面的操作。

沙塘木作為白沙糖漿制劑中的君藥，沙糖木生物堿在其中起到怎樣的重要藥理作用，值得我們繼續(xù)深入的研究。

［1］貴州省藥品監(jiān)督局編.貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［M］.貴州：科技出版社.2003：203.

［2］朱桂花.改進(jìn)酸堿滴定法測(cè)定苦豆子總生物堿含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23（1）：81－83.

R284.2

A

1007－8517（2013）16－0014－03

2013.06.22）

貴州省科學(xué)技術(shù)基金項(xiàng)目（No.黔科合J字［2013］2052號(hào)）。