全維明 李含春

牛黃解毒片是由人工牛黃、雄黃、石膏、大黃、黃芩、桔梗、冰片、甘草按《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定工藝加工而成的中藥成方制劑，收載于《中國(guó)藥典》2010版一部。其功能是清熱解毒。用于火熱內(nèi)盛，咽喉腫痛，牙齦腫痛，口舌生瘡，目赤腫痛［1］。在處方中冰片具有開竅醒神，清熱止痛。用于熱病神昏、痙厥，中風(fēng)痰厥，氣郁暴厥，中惡昏迷，目赤，口瘡，咽喉腫痛，耳道流膿。而在《中國(guó)藥典》2010版一部中，對(duì)冰片中樟腦的含量做了限量規(guī)定［1］，所以在牛黃解毒片中測(cè)定樟腦的含量對(duì)評(píng)價(jià)牛黃解毒片的質(zhì)量有一定的意義。在現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道中，沒(méi)有對(duì)牛黃解毒片中樟腦定量分析的報(bào)道，本文采用毛細(xì)管氣相色譜法［2］，對(duì)牛黃解毒片中的樟腦進(jìn)行含量測(cè)定，為牛黃解毒片的質(zhì)量控制提供一種可行方法。

1 儀器與試藥

浙江福立分析儀器有限公司GC9750氣相色譜儀;FID檢測(cè)器;PEG20000石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 m);梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司XS 205DU電子天平;樟腦對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):110747-200507);牛黃解毒片樣品由太極集團(tuán)四川綿陽(yáng)制藥有限公司提供(批號(hào):55110002、55110005、55110009)。陰性對(duì)照藥材由樂(lè)山市龍馬中藥材公司提供，按《中國(guó)藥典》2010版一部檢驗(yàn)均符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定;其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取樟腦對(duì)照品60.00 mg，置100 ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2 供試品溶液和陰性對(duì)照液制備 取牛黃解毒片(批號(hào):55110002)120片，除去糖衣(120片重為:60.2112 g)。研細(xì)，精密稱取細(xì)粉4.5158 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入乙酸乙酯10 ml，精密稱定重量;超聲處理15 min，再精密稱定重量，用醋酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，用0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取處方量藥品(除冰片外)，按標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定工藝制成陰性對(duì)照品制劑，取陰性對(duì)照品制劑適量，研細(xì)，精密稱取陰性對(duì)照品制劑4.5079 g，置于具塞錐形瓶中，精密加入醋酸乙酯10 ml，精密稱定重量;超聲處理15 min，精密稱定重量，再精密稱定重量，用醋酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，用0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為陰性對(duì)照液溶液。

2.3 色譜條件 PEG20000石英毛細(xì)管柱(30 m×0.25 mm×0.25 m)，柱溫:140℃。載氣N2;進(jìn)樣口溫度180℃，流速1.2 ml/min;進(jìn)樣量:1 L，分流比15:1。FID檢測(cè)器溫度:180℃。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置10 ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液，取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液照上述色譜條件分別進(jìn)樣，如圖1。供試品溶液色譜圖中有與對(duì)照品色譜圖中樟腦色譜峰相對(duì)應(yīng)的色譜峰，并且該色譜峰與其他色譜峰的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)為40004;而陰性對(duì)照溶液無(wú)這一色譜峰。

2.5 線性關(guān)系 精密量取樟腦對(duì)照品儲(chǔ)備液1、2.5、4、5.5、7、8.5 ml，分別置10 ml量瓶中，加醋酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液各1 L注入氣相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。以樟腦峰面積(A)與樟腦濃度(μg/ml)作回歸曲線得Y=79.7867X+10.01256，r=0.9999(n=6)。結(jié)果表明，樟腦進(jìn)樣量在60～510ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn) 精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置10 ml量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件吸取上述溶液各1 L注入氣相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定。連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果樟腦的平均峰面積為23936，RSD為1.33%。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 精密稱取2.2項(xiàng)下細(xì)粉散適量(約9片量)，共6份，分置6個(gè)置于具塞錐形瓶中，精加醋酸乙酯10 ml，精密稱量;超聲處理15 min，再精密稱定重量，用醋酸乙酯補(bǔ)足減失的重量，用0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，用0.45 m微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。分別吸取上述溶液各1 L注入氣相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果樟腦平均峰面積(折算為稱量為9片細(xì)粉重量的峰面積)為1070，RSD為1.33%。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液于0，2，4，6，8，12 h測(cè)定，結(jié)果表明樟腦峰面積RSD為1.83%，表明樣品溶液在室溫條件下12 h內(nèi)穩(wěn)定，能滿足含量測(cè)定要求。

2.9 加樣回收試驗(yàn) 取牛黃解毒片(批號(hào):55110002每片含樟腦0.149 mg)除去糖衣(120片重為:60.2112 g)，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉(約2 g)9份，分別置于10 ml量瓶中，精密加入樟腦對(duì)照品儲(chǔ)備液0.60、0.75、0.90 ml，加乙酸乙酯適量，超聲處理30 min，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照上述色譜條件測(cè)定，樟腦加樣回收結(jié)果見表Ⅰ。從表Ⅰ可以看出，在選定的分析條件下，樣品加樣回收率在97.2% ～99.5%之間，平均回收率為98.4%，RSD為0.8%，方法的準(zhǔn)確度可以滿足樣品的測(cè)定要求。

表1 樟腦回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

圖1 氣相色譜圖

2.10 樣品測(cè)定 分別取牛黃解毒片(批號(hào):55110002、55110005、55110009)各20片，除去糖衣后，稱定重量，研細(xì)，稱取細(xì)粉約3 g，加醋酸乙酯適量，超聲處理30 min，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。照上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 小結(jié)

本文建立了牛黃解毒片中樟腦的含量分析方法，實(shí)驗(yàn)表明該方法快速，準(zhǔn)確，被測(cè)溶液穩(wěn)定，適合于牛黃解毒片中樟腦的定量分析，可以作為牛黃解毒片中樟腦限量檢查的方法，對(duì)牛黃解毒片的質(zhì)量進(jìn)行控制。

［1］ChP(中國(guó)藥典).2010.VolⅠ(一部):566

［2］劉亞梅，蒲旭峰，張良.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定青蒿及青蒿油中石竹烯和樟腦的含量.華西藥學(xué)雜志，2007，22(2):218.