權(quán)玉玲，胡曉寧，張 璟，申艷琴，蘭 光

（甘肅省疾病預(yù)防控制中心，甘肅 蘭州 730000）

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們的飲食逐漸呈現(xiàn)多樣化，食用海鮮食品的數(shù)量逐年增加。甘肅省位于西北地區(qū)，近年來(lái)隨著市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，海鮮市場(chǎng)日益繁榮，海鮮品種繁多，但市售海產(chǎn)品衛(wèi)生狀況無(wú)任何監(jiān)測(cè)資料。為了解甘肅省海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的污染現(xiàn)狀，為預(yù)防由創(chuàng)傷弧菌引起的感染及食物中毒提供基礎(chǔ)資料，我們采集了230份海產(chǎn)品進(jìn)行創(chuàng)傷弧菌的監(jiān)測(cè)，現(xiàn)將監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料和方法

1.1 樣品來(lái)源及數(shù)量

樣品采自甘肅省各地區(qū)大型超市及農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)，按照無(wú)菌采樣原則采集鮮凍海產(chǎn)品230份，包括貝類45份，蝦75份和魚類110份。將樣品置4℃條件下保存，4小時(shí)內(nèi)檢驗(yàn)。

1.2 培養(yǎng)基及試劑

創(chuàng)傷弧菌增菌液、多粘菌素E瓊脂（mCPC）分離培養(yǎng)基、弧菌微量生化鑒定管均購(gòu)自北京陸橋生物技術(shù)有限責(zé)任公司，VITEK革蘭氏陰性菌鑒定卡購(gòu)自法國(guó)梅里埃生物技術(shù)有限公司。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)菌株

創(chuàng)傷弧菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC27562由中國(guó)疾病預(yù)防控制中心下發(fā)，經(jīng)VITEK革蘭氏陰性菌鑒定卡鑒定符合該菌的生化特征。

表2 創(chuàng)傷弧菌陽(yáng)性菌株VITEK鑒定試驗(yàn)結(jié)果

1.4 檢測(cè)方法

依據(jù)《國(guó)家食源性致病菌監(jiān)測(cè)工作手冊(cè)》中創(chuàng)傷弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行檢測(cè)。具體操作：無(wú)菌操作稱取檢樣25 g，加入3%氯化鈉堿性蛋白胨水225 ml，拍擊式均質(zhì)器拍擊2分鐘，36℃培養(yǎng)8～18小時(shí)，劃線分離于改良纖維二糖多粘菌素B、mCPC，36℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，挑取3個(gè)以上典型的黃色可疑菌落，接種于3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂上進(jìn)行純培養(yǎng)；36℃培養(yǎng)18～24小時(shí)后做革蘭氏染色、氧化酶試驗(yàn)、3%氯化鈉三糖鐵初篩；36℃培養(yǎng)18～24小時(shí)，氧化酶陽(yáng)性、革蘭氏陰性多形性短桿菌的可疑菌做嗜鹽性試驗(yàn)，嗜鹽性試驗(yàn)符合者用VITEK 2 Systems革蘭氏陰性菌鑒定卡鑒定確認(rèn)。

2 結(jié)果

2.1 創(chuàng)傷弧菌檢測(cè)結(jié)果

230份海產(chǎn)品檢出創(chuàng)傷弧菌11株，總檢出率為4.78%（見(jiàn)表 1）。

表1 230份海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌檢測(cè)結(jié)果

2.2 創(chuàng)傷弧菌陽(yáng)性菌株VITEK生化鑒定試驗(yàn)結(jié)果（見(jiàn)表2）

經(jīng)VITEK革蘭氏陰性菌鑒定卡鑒定為創(chuàng)傷弧菌，可信性為99%，為非常好的鑒定結(jié)果。

3 討論

創(chuàng)傷弧菌是一種嗜溫、嗜鹽、嗜堿型的海洋致病菌，與副溶血性弧菌、霍亂弧菌、腸炎弧菌同屬致病性弧菌。1970年Roland首次報(bào)告感染創(chuàng)傷弧菌的病例；1976年Hollis等首次從感染者血液中培養(yǎng)分離出該菌，完成了創(chuàng)傷弧菌的分離與鑒定；1979年FarmEr將其命名為創(chuàng)傷弧菌；2006年 8月《E－merging Infectious Diseases》雜志將創(chuàng)傷弧菌列入最危險(xiǎn)的細(xì)菌之列[1]。創(chuàng)傷弧菌能引起人類急性胃腸炎、壞疽性傷口感染及敗血癥，致死、致殘率很高。人類感染通常因食用生的或烹調(diào)時(shí)間不夠的受創(chuàng)傷弧菌污染的海產(chǎn)品，或皮膚傷口接觸帶菌的海水和海生動(dòng)物而造成感染。慢性肝炎病人或免疫力低下者感染此菌后，病死率高達(dá)50%以上[2]。

由于創(chuàng)傷弧菌廣泛存在于近海和海灣的海水及海底沉積物、牡蠣、魚、蝦等海產(chǎn)品中，是海產(chǎn)養(yǎng)殖中最常見(jiàn)、流行性最廣、危害最嚴(yán)重的細(xì)菌性病原菌之一，加之創(chuàng)傷弧菌所致敗血癥起病急，病情進(jìn)展快，死亡率高，是一種致命性的重要疾病，因此創(chuàng)傷弧菌引發(fā)的食物中毒或傷口感染備受關(guān)注，目前許多國(guó)家已將該菌列為海產(chǎn)食品中衛(wèi)生檢驗(yàn)的重要項(xiàng)目之一。近年來(lái)我國(guó)也發(fā)現(xiàn)了由創(chuàng)傷弧菌導(dǎo)致的散發(fā)病例[3]。由于不同于一般細(xì)菌性食源性疾病，加之對(duì)該菌的認(rèn)識(shí)還有差距，因而創(chuàng)傷弧菌引發(fā)的食源性疾病在我國(guó)尚未引起人們的足夠重視。為預(yù)防創(chuàng)傷弧菌引起的感染，我國(guó)2010年在食源性致病菌檢測(cè)工作中將創(chuàng)傷弧菌列為海產(chǎn)品的必檢項(xiàng)目，全國(guó)沿海城市率先開(kāi)展了海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的監(jiān)測(cè)，旨在調(diào)查我國(guó)海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的污染狀況，以防止創(chuàng)傷弧菌引起食物中毒的發(fā)生。

3.1 甘肅省海產(chǎn)品存在創(chuàng)傷弧菌污染

檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，甘肅省230份海產(chǎn)品檢出創(chuàng)傷弧菌11株，總檢出率為4.78%，貝、魚、蝦類均有檢出，貝類檢出率最高，其次為蝦類、魚類。陳艷等[4]對(duì)東南沿海地區(qū)零售海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，我國(guó)東南沿海地區(qū)零售海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的帶菌率為20.00%；Yano等的研究顯示，中國(guó)零售海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌總帶菌率為33.00%；黃彥等[5]研究發(fā)現(xiàn)，蝦樣品中創(chuàng)傷弧菌陽(yáng)性率為85.00%。由此看出，甘肅省海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌檢出率明顯低于沿海地區(qū)，原因可能是甘肅省為內(nèi)陸高原地區(qū)，海產(chǎn)品多由沿海地區(qū)轉(zhuǎn)運(yùn)而來(lái)，數(shù)量品種不如沿海地區(qū)豐富，此次檢測(cè)樣品數(shù)量及品種有限。雖然此次創(chuàng)傷弧菌檢出率明顯低于沿海地區(qū)，但仍說(shuō)明甘肅省海產(chǎn)品存在一定程度的創(chuàng)傷弧菌污染，因而存在創(chuàng)傷弧菌引起食物中毒及感染的潛在風(fēng)險(xiǎn)。食品衛(wèi)生監(jiān)督部門對(duì)海產(chǎn)品衛(wèi)生狀況應(yīng)高度重視，繼續(xù)加大主動(dòng)監(jiān)測(cè)甘肅省海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的力度，為海產(chǎn)品的食品衛(wèi)生監(jiān)督提供翔實(shí)的依據(jù)，保障消費(fèi)者的食用安全。

3.2 甘肅省海產(chǎn)品微生物污染菌相復(fù)雜

此次海產(chǎn)品除檢出創(chuàng)傷弧菌外，還檢出副溶血性弧菌、單核細(xì)胞增生李斯特氏菌，說(shuō)明甘肅省海產(chǎn)品污染菌相復(fù)雜，污染較為嚴(yán)重。甘肅省海產(chǎn)品多由沿海地區(qū)轉(zhuǎn)運(yùn)而來(lái)，在運(yùn)輸及銷售過(guò)程中主要采取加冰塊降溫或者人工配制海水養(yǎng)殖海鮮，且不同品種混合存放，加之夏秋季節(jié)氣溫高，極易造成海產(chǎn)品之間微生物的交叉污染及繁殖。朱海明等[2]對(duì)廣東省部分海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的污染監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，溫度較高的夏秋季節(jié)海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的污染率相對(duì)增高，因此夏秋季節(jié)食用海產(chǎn)品要更加注意，防止食物中毒發(fā)生。建議衛(wèi)生監(jiān)督部門加強(qiáng)對(duì)海產(chǎn)品市場(chǎng)的衛(wèi)生監(jiān)督，從采購(gòu)、運(yùn)輸、儲(chǔ)存、銷售等環(huán)節(jié)上最大程度地減少微生物對(duì)海產(chǎn)品的污染，預(yù)防創(chuàng)傷弧菌引發(fā)感染事件的發(fā)生。

4 對(duì)策

4.1 加強(qiáng)海產(chǎn)品加工環(huán)節(jié)的衛(wèi)生監(jiān)督監(jiān)測(cè)

海產(chǎn)品是致病性弧菌食源性感染的主要食物媒介，國(guó)外研究資料表明，創(chuàng)傷弧菌腸炎主要由海產(chǎn)品及其加工產(chǎn)品或與海產(chǎn)品交叉污染的食品引起，尤其是進(jìn)食生的或未熟透的牡蠣等海產(chǎn)品。近年來(lái)，生食海產(chǎn)品日漸成為內(nèi)地城市的消費(fèi)時(shí)尚，市場(chǎng)生食海鮮品種逐漸增多，生食海鮮的人群隨之增加，如果生食海產(chǎn)品加工人員衛(wèi)生意識(shí)差，加工環(huán)境衛(wèi)生狀況不良，生熟不分，極易導(dǎo)致產(chǎn)品之間交叉污染，增加生食海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌食物中毒的危險(xiǎn)。因此，生食海產(chǎn)品的安全性應(yīng)引起衛(wèi)生監(jiān)督部門的高度重視，加強(qiáng)生食海產(chǎn)品的衛(wèi)生監(jiān)督監(jiān)測(cè)，嚴(yán)格個(gè)人衛(wèi)生制度，采用專用工具加工，炊具必須嚴(yán)格清洗消毒，生、熟用具分開(kāi)，防止操作時(shí)交叉污染，以防創(chuàng)傷弧菌引起集體食物中毒事件的發(fā)生。

4.2 加強(qiáng)食品衛(wèi)生知識(shí)的宣傳力度

為預(yù)防個(gè)體消費(fèi)者創(chuàng)傷弧菌感染及食物中毒，應(yīng)加強(qiáng)食品衛(wèi)生知識(shí)的宣傳力度，提高公眾對(duì)海產(chǎn)品食用衛(wèi)生知識(shí)及對(duì)創(chuàng)傷弧菌的認(rèn)識(shí)，指導(dǎo)消費(fèi)者在接觸海產(chǎn)品時(shí)最好戴上手套，以免被海產(chǎn)品刺傷，防止身體感染創(chuàng)傷弧菌；食用魚、蝦、蟹、貝類等海產(chǎn)品時(shí)一定要清洗干凈，煮熟蒸透，確保殺死病原微生物，對(duì)加工好的海產(chǎn)食品低溫儲(chǔ)藏，防止微生物繁殖，確保食用的安全性。

5 小結(jié)

1992—2001年國(guó)家食源性疾病監(jiān)測(cè)網(wǎng)數(shù)據(jù)顯示，由副溶血性弧菌引起的食源性疾病居微生物性食源性疾病暴發(fā)之首[6]；潘軍航等[7]對(duì)腹瀉樣本中創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè)分析報(bào)告指出，創(chuàng)傷弧菌可能與副溶血性弧菌一起通過(guò)牡蠣等海產(chǎn)品復(fù)合感染生食者，而且顯示為具有較強(qiáng)毒力的基因型。本次監(jiān)測(cè)時(shí)我們同時(shí)主動(dòng)監(jiān)測(cè)了海產(chǎn)品中副溶血性弧菌的污染情況，結(jié)果顯示，甘肅省副溶血性弧菌在海產(chǎn)品中檢出率達(dá)到12.50%，說(shuō)明我省海產(chǎn)品存在副溶血性弧菌和創(chuàng)傷弧菌的雙重污染，期望食品衛(wèi)生監(jiān)督部門高度重視甘肅省海產(chǎn)品的衛(wèi)生監(jiān)督，有必要對(duì)甘肅省海產(chǎn)品中副溶血性弧菌和創(chuàng)傷弧菌污染狀況進(jìn)行深入調(diào)查，并且依托國(guó)家“傳染病監(jiān)測(cè)技術(shù)平臺(tái)”對(duì)全省腹瀉樣本進(jìn)行創(chuàng)傷弧菌和副溶血性弧菌的監(jiān)測(cè)，以便對(duì)海產(chǎn)品進(jìn)行全面的安全性風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，預(yù)防、控制海產(chǎn)品引起的食源性疾病。

[1]邢麗萍.創(chuàng)傷弧菌生物學(xué)研究進(jìn)展[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（7）：1833-1834.

[2]朱海明，嚴(yán)紀(jì)文，宋曼丹，等.廣東省部分海產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的污染監(jiān)測(cè)[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，37（4）：78-80.

[3]朱鳳，李克.深圳市售海產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌檢測(cè)分析[J].醫(yī)學(xué)動(dòng)物防制，2011，27（4）：387-388.

[4]陳艷，梅玲玲.東南沿海地區(qū)零售海產(chǎn)品中創(chuàng)傷弧菌的監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2009（4）：344-347.

[5]黃彥，李秀桂，王紅，等.海產(chǎn)品對(duì)蝦中創(chuàng)傷弧菌污染狀況調(diào)查[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（7）：1780-1781.

[6]鄧志愛(ài)，陳佳旋，李孝權(quán)，等.廣州地區(qū)海產(chǎn)品和珠江水中致病性弧菌污染狀況監(jiān)測(cè)[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2011，21（5）：1237-1239.

[7]潘軍航，葉菊蓮，朱敏，等.腹瀉樣本中創(chuàng)傷弧菌的檢測(cè)分析[J].疾病監(jiān)測(cè)，2012，27（1）：59-61.