姜建國(guó),張西如,宋更申,赫曉軍(河北省食品藥品檢驗(yàn)院,石家莊 050011)
枸櫞酸噴托維林(Pentoxyverine citrate)又名咳必清,為非成癮性鎮(zhèn)咳藥,1956年被合成后由比利時(shí)聯(lián)合化學(xué)公司(Ucb)開(kāi)發(fā),國(guó)內(nèi)于1962年開(kāi)始生產(chǎn)。本品臨床應(yīng)用很廣泛,主要用于治療上呼吸道感染引起的無(wú)痰干咳和百日咳等。
溶出度檢查是評(píng)價(jià)制劑品質(zhì)和工藝水平的一種有效手段,也是評(píng)價(jià)固體制劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效方法,是口服固體制劑再評(píng)價(jià)的關(guān)鍵,因此研究者越來(lái)越關(guān)注藥品的溶出行為[1-3]。枸櫞酸噴托維林片和滴丸被收錄在2010年版《中國(guó)藥典》[4]中,標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)溶出度檢查項(xiàng),因此,按此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)得到的結(jié)果不能完全真實(shí)反映藥品的質(zhì)量。為提高藥品標(biāo)準(zhǔn),嚴(yán)格控制藥品質(zhì)量,筆者對(duì)其溶出度試驗(yàn)的溶出介質(zhì)進(jìn)行了篩選,并確定使用0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì);同時(shí),采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定枸櫞酸噴托維林的含量。結(jié)果表明,所建立的方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確。
本文通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)多廠家多批次樣品進(jìn)行考察,對(duì)市場(chǎng)上流通的枸櫞酸噴托維林片和滴丸的質(zhì)量有了一定的了解,為有關(guān)部門(mén)進(jìn)行監(jiān)管、提高藥品的安全性提供了一定的技術(shù)支持,也為藥品生產(chǎn)企業(yè)改進(jìn)工藝指出了方向。
LC-2010 CHT HPLC儀(日本島津公司);UltiMate3000 HPLC儀(德國(guó)戴安公司);1200 HPLC儀(美國(guó)Agilent公司);D-800 LS智能藥物溶出儀、RCZ-8 B溶出試驗(yàn)儀(天大天發(fā)科技有限公司);D-800 L智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無(wú)線電廠);ZRS-8 G智能藥物溶出儀(天津大學(xué)無(wú)線電廠)。
枸櫞酸噴托維林對(duì)照品(批號(hào):100432-200401,純度:100%)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;枸櫞酸噴托維林制劑(在全國(guó)范圍抽取該樣品,片劑共41個(gè)廠家,218批;滴丸共1個(gè)廠家,2批;規(guī)格均為25 mg);甲醇為色譜純,鹽酸為分析純。
采用2010年版《中國(guó)藥典》(二部)附錄ⅩC溶出度測(cè)定法第一法[4],轉(zhuǎn)速為100 r/min。
(1)溶出介質(zhì)1:水;(2)溶出介質(zhì)2:0.1 mol/L HCl;(3)溶出介質(zhì)3:pH 4.5醋酸鹽緩沖液(取醋酸鈉2.99 g加水適量使溶解,加2mol/L的醋酸溶液14ml,用水稀釋到1000ml,即得);(4)溶出介質(zhì)4:pH 6.8緩沖鹽(取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 ml,與0.2 mol/L氫氧化鈉溶液112 ml混合后,加水稀釋至1000 ml,即得)。
分別選用上述4種不同溶出介質(zhì)對(duì)同一批片劑樣品及同一批滴丸樣品進(jìn)行測(cè)定,并采用各時(shí)間點(diǎn)6片(丸)制劑的平均溶出量為縱坐標(biāo),溶出時(shí)間為橫坐標(biāo),繪制溶出曲線,見(jiàn)圖1 A、B。
圖1 片劑和滴丸在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線比較A.片劑;B.滴丸Fig 1 Comparison of dissolution curves of tablet and dropping pills in different dissolution mediumsA.tablet;B.dropping pills
試驗(yàn)結(jié)果表明,樣品在溶出介質(zhì)2中較在其他3種溶出介質(zhì)中溶出較快,且平臺(tái)區(qū)溶出量較高。故選用溶出介質(zhì)2即0.1 mol/L鹽酸作為本次試驗(yàn)的溶出介質(zhì)。
從41個(gè)片劑生產(chǎn)廠家中,抽取某知名企業(yè)的1批片劑樣品進(jìn)行考察,以0.1 mol/L鹽酸作為溶出介質(zhì),分別于5、10、15、20、30、45、60 min等時(shí)間點(diǎn)測(cè)定6片樣品的溶出量,繪制溶出曲線詳見(jiàn)圖2 A。同時(shí),抽取1批滴丸樣品進(jìn)行溶出考察,分別于相同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定6丸樣品的溶出量,見(jiàn)圖2 B。
圖2 片劑和滴丸在0.1mol/L鹽酸中的溶出曲線A.片劑;B.滴丸Fig 2 Dissolution curves of tablet and dropping pills in 0.1 mol/LHClA.tablet;B.dropping pills
2.3.1 測(cè)定時(shí)間點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn)的確定。根據(jù)溶出度測(cè)定要求,在溶出曲線中當(dāng)?shù)?次連續(xù)2點(diǎn)溶出量平均值均在85%以上,且該2點(diǎn)溶出度差值在5%以內(nèi)時(shí),以首先達(dá)到溶出量平均值85%的時(shí)間點(diǎn)為結(jié)束點(diǎn)。根據(jù)圖2 A,可將30 min作為片劑的結(jié)束點(diǎn)。
根據(jù)考察全國(guó)41個(gè)廠家218批片劑樣品的結(jié)果來(lái)看,取樣30 min時(shí)有133批樣品溶出量達(dá)不到80%,涉及生產(chǎn)廠家30家;取樣時(shí)間為45 min時(shí),仍有20個(gè)生產(chǎn)廠家的70批樣品達(dá)不到80%;甚至有4個(gè)生產(chǎn)廠家的樣品在45 min時(shí),樣品平均溶出量不足40%;還有6個(gè)廠家的樣品平均溶出量達(dá)不到60%。
同樣,根據(jù)溶出測(cè)定要求及圖2 B,可將30 min作為滴丸劑樣品考察結(jié)束時(shí)間點(diǎn)。用不同介質(zhì)測(cè)得廠家產(chǎn)品溶出曲線可知:采用4種不同介質(zhì)時(shí),取樣時(shí)間30 min與45 min無(wú)顯著性差異,故確定取樣時(shí)間點(diǎn)為30 min。
2.3.2 計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)。從結(jié)束時(shí)間點(diǎn)向前依次選取5個(gè)時(shí)間點(diǎn),分別列出各時(shí)間點(diǎn)6片樣品的溶出量并計(jì)算其變異系數(shù)。結(jié)果,第一時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)略大于20%,第二時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)略大于10%,其他時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)均未超過(guò)5%,基本達(dá)到溶出測(cè)定要求。
同樣,滴丸樣品所選取的時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)均未超過(guò)10%,達(dá)到溶出測(cè)定要求。
根據(jù)溶出測(cè)定要求,應(yīng)根據(jù)參比樣品溶出曲線測(cè)定的結(jié)果,以第1次連續(xù)2點(diǎn)平均溶出量均在85%以上,且該2點(diǎn)溶出量平均值之間差值在5%以內(nèi)時(shí),取第一時(shí)間點(diǎn)作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的取樣時(shí)間點(diǎn),即“2.3.1”項(xiàng)下片劑的結(jié)束時(shí)間點(diǎn);并將該點(diǎn)的溶出量減去15%作為溶出限度(即Q值),即91%減去15%,Q值應(yīng)為76%。同時(shí),考察全國(guó)各廠家樣品,發(fā)現(xiàn)不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品,溶出行為差異很大。因此,對(duì)各廠家的情況進(jìn)行對(duì)比后,結(jié)合2010年版《中國(guó)藥典》(二部)附錄ⅩC溶出度測(cè)定法的有關(guān)要求,建議片劑的溶出限度為75%。
同樣,由“2.3.1”項(xiàng)下滴丸劑的結(jié)束時(shí)間點(diǎn),該點(diǎn)的溶出量減去15%作為Q值,即97%減去15%,Q值應(yīng)為82%。根據(jù)2批樣品的考察結(jié)果,確定滴丸的溶出限度為80%。
色譜柱:Alltima C18(250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:水(取三乙胺10ml,用水稀釋至1000ml,用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)-甲醇(45∶55),流速:1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm;進(jìn)樣量:20μl。
對(duì)照品溶液的制備:精密稱取枸櫞酸噴托維林對(duì)照品適量,用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含28 μg的溶液,即得。
供試品溶液的制備:取供試品,按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行溶出度試驗(yàn),以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì),30 min時(shí)取溶液適量,濾過(guò),取續(xù)濾液即得。
取上述2種溶液進(jìn)樣,記錄色譜圖,見(jiàn)圖3 A、B。
圖3 高效液相色譜圖A.對(duì)照品;B.供試品;1.枸櫞酸噴托維林Fig 3 HPLC chromatogramsA.substance control;B.test sample;1.pentoxyverine citrate
精密稱定枸櫞酸噴托維林對(duì)照品14.02mg,置于100ml量瓶中,加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取1.0、3.0、5.0、7.5、10.0ml,分別置于25ml量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。分別精密量取20μl進(jìn)樣,記錄色譜圖,以溶液的質(zhì)量濃度(c)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸。得線性方程為:A=1.4300×104c-4.2323×10-2(r=0.9999),表明枸櫞酸噴托維林檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為5.608~56.08μg/ml。
取對(duì)照品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,峰面積RSD為0.10%,表明方法精密度良好。
精密稱取枸櫞酸噴托維林對(duì)照品適量,按處方比例加入輔料,用溶出介質(zhì)配制成相當(dāng)于測(cè)定濃度50%、80%、100%的溶液,按“3.2”項(xiàng)下方法處理樣品,在選定的色譜條件下測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.32%~101.29%,RSD<0.76%(n=3),表明該方法的準(zhǔn)確度較高,能滿足制劑分析的要求,詳見(jiàn)表1。
表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=3)Tab 1 Results of recovery test(n=3)
取輔料按制劑的處方(缺枸櫞酸噴托維林)比例配制成相應(yīng)的溶液,在選定的色譜條件下測(cè)定。結(jié)果顯示,輔料在主峰保留時(shí)間處均無(wú)吸收,對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。
將同一樣品制成的供試品溶液在8 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次,考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示,樣品溶液在室溫(25℃)放置8 h枸櫞酸噴托維林的含量無(wú)變化,RSD為0.5%。
對(duì)全國(guó)41個(gè)廠家的218批片劑樣品和1個(gè)廠家的2批滴丸樣品,按擬定的溶出度測(cè)定方法測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)圖4(每批樣品分別為6粒制劑的平均溶出度數(shù)據(jù))。
圖4 不同廠家枸櫞酸噴托維林片劑和滴丸的溶出曲線A、B、C.片劑;D.滴丸Fig 4 Dissolution curves of Pentoxyverine citrate tablets and dropping pills from different factoriesA,B,C.tablets;D.dropping pills
根據(jù)對(duì)41個(gè)生產(chǎn)廠家的218批片劑樣品檢測(cè)結(jié)果,按照擬定的溶出度測(cè)定方法和限度(30 min,限度75%),顯示有28家生產(chǎn)企業(yè)的121批(55.5%)樣品低于規(guī)定限度。說(shuō)明目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的枸櫞酸噴托維林片在質(zhì)量上存在較大差異。因此,在2010年版《中國(guó)藥典》(二部)收載的枸櫞酸噴托維林片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加溶出度控制檢查項(xiàng)目非常必要。
片劑樣品試驗(yàn)結(jié)果還表明,同一生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的不同批次樣品,溶出行為也存在明顯差異。如30 min時(shí),部分批次的樣品溶出量高達(dá)80%以上,有的樣品只有30%左右。說(shuō)明生產(chǎn)企業(yè)的處方或生產(chǎn)工藝還存在不科學(xué)或不穩(wěn)定的因素。為保證用藥安全有效,建議有關(guān)企業(yè)盡快完善處方和改進(jìn)生產(chǎn)工藝。
從國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站查知,目前國(guó)內(nèi)僅有3家枸櫞酸噴托維林滴丸生產(chǎn)企業(yè)。本次樣品僅得到1家企業(yè)的2批樣品,2批樣品30 min時(shí)的溶出量均達(dá)到了90%以上,檢驗(yàn)結(jié)果雖然代表性差,但試驗(yàn)結(jié)果明顯好于片劑樣品。在一定程度上也反映了滴丸劑樣品優(yōu)于片劑樣品的質(zhì)量。
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