姜建國(guó)，張西如，宋更申，赫曉軍（河北省食品藥品檢驗(yàn)院，石家莊 050011）

枸櫞酸噴托維林（Pentoxyverine citrate）又名咳必清，為非成癮性鎮(zhèn)咳藥，1956年被合成后由比利時(shí)聯(lián)合化學(xué)公司（Ucb）開(kāi)發(fā)，國(guó)內(nèi)于1962年開(kāi)始生產(chǎn)。本品臨床應(yīng)用很廣泛，主要用于治療上呼吸道感染引起的無(wú)痰干咳和百日咳等。

溶出度檢查是評(píng)價(jià)制劑品質(zhì)和工藝水平的一種有效手段，也是評(píng)價(jià)固體制劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效方法，是口服固體制劑再評(píng)價(jià)的關(guān)鍵，因此研究者越來(lái)越關(guān)注藥品的溶出行為[1-3]。枸櫞酸噴托維林片和滴丸被收錄在2010年版《中國(guó)藥典》[4]中，標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)溶出度檢查項(xiàng)，因此，按此標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)得到的結(jié)果不能完全真實(shí)反映藥品的質(zhì)量。為提高藥品標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格控制藥品質(zhì)量，筆者對(duì)其溶出度試驗(yàn)的溶出介質(zhì)進(jìn)行了篩選，并確定使用0.1 mol/L鹽酸為溶出介質(zhì)；同時(shí)，采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定枸櫞酸噴托維林的含量。結(jié)果表明，所建立的方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確。

本文通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)多廠家多批次樣品進(jìn)行考察，對(duì)市場(chǎng)上流通的枸櫞酸噴托維林片和滴丸的質(zhì)量有了一定的了解，為有關(guān)部門(mén)進(jìn)行監(jiān)管、提高藥品的安全性提供了一定的技術(shù)支持，也為藥品生產(chǎn)企業(yè)改進(jìn)工藝指出了方向。

1 材料

LC-2010 CHT HPLC儀（日本島津公司）；UltiMate3000 HPLC儀（德國(guó)戴安公司）；1200 HPLC儀（美國(guó)Agilent公司）；D-800 LS智能藥物溶出儀、RCZ-8 B溶出試驗(yàn)儀（天大天發(fā)科技有限公司）；D-800 L智能藥物溶出儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）；ZRS-8 G智能藥物溶出儀（天津大學(xué)無(wú)線電廠）。

枸櫞酸噴托維林對(duì)照品（批號(hào):100432-200401，純度:100%）購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；枸櫞酸噴托維林制劑（在全國(guó)范圍抽取該樣品，片劑共41個(gè)廠家，218批；滴丸共1個(gè)廠家，2批；規(guī)格均為25 mg）；甲醇為色譜純，鹽酸為分析純。

2 溶出條件的確定

2.1 方法及轉(zhuǎn)速

采用2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅩC溶出度測(cè)定法第一法[4]，轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.2 溶出介質(zhì)的確定

（1）溶出介質(zhì)1:水；（2）溶出介質(zhì)2:0.1 mol/L HCl；（3）溶出介質(zhì)3:pH 4.5醋酸鹽緩沖液（取醋酸鈉2.99 g加水適量使溶解，加2mol/L的醋酸溶液14ml，用水稀釋到1000ml，即得）；（4）溶出介質(zhì)4:pH 6.8緩沖鹽（取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 ml，與0.2 mol/L氫氧化鈉溶液112 ml混合后，加水稀釋至1000 ml，即得）。

分別選用上述4種不同溶出介質(zhì)對(duì)同一批片劑樣品及同一批滴丸樣品進(jìn)行測(cè)定，并采用各時(shí)間點(diǎn)6片（丸）制劑的平均溶出量為縱坐標(biāo)，溶出時(shí)間為橫坐標(biāo)，繪制溶出曲線，見(jiàn)圖1 A、B。

圖1 片劑和滴丸在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線比較A.片劑；B.滴丸Fig 1 Comparison of dissolution curves of tablet and dropping pills in different dissolution mediumsA.tablet；B.dropping pills

試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品在溶出介質(zhì)2中較在其他3種溶出介質(zhì)中溶出較快，且平臺(tái)區(qū)溶出量較高。故選用溶出介質(zhì)2即0.1 mol/L鹽酸作為本次試驗(yàn)的溶出介質(zhì)。

2.3 溶出曲線的測(cè)定

從41個(gè)片劑生產(chǎn)廠家中，抽取某知名企業(yè)的1批片劑樣品進(jìn)行考察，以0.1 mol/L鹽酸作為溶出介質(zhì)，分別于5、10、15、20、30、45、60 min等時(shí)間點(diǎn)測(cè)定6片樣品的溶出量，繪制溶出曲線詳見(jiàn)圖2 A。同時(shí)，抽取1批滴丸樣品進(jìn)行溶出考察，分別于相同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定6丸樣品的溶出量，見(jiàn)圖2 B。

圖2 片劑和滴丸在0.1mol/L鹽酸中的溶出曲線A.片劑；B.滴丸Fig 2 Dissolution curves of tablet and dropping pills in 0.1 mol/LHClA.tablet；B.dropping pills

2.3.1 測(cè)定時(shí)間點(diǎn)和結(jié)束點(diǎn)的確定。根據(jù)溶出度測(cè)定要求，在溶出曲線中當(dāng)?shù)?次連續(xù)2點(diǎn)溶出量平均值均在85%以上，且該2點(diǎn)溶出度差值在5%以內(nèi)時(shí)，以首先達(dá)到溶出量平均值85%的時(shí)間點(diǎn)為結(jié)束點(diǎn)。根據(jù)圖2 A，可將30 min作為片劑的結(jié)束點(diǎn)。

根據(jù)考察全國(guó)41個(gè)廠家218批片劑樣品的結(jié)果來(lái)看，取樣30 min時(shí)有133批樣品溶出量達(dá)不到80%，涉及生產(chǎn)廠家30家；取樣時(shí)間為45 min時(shí)，仍有20個(gè)生產(chǎn)廠家的70批樣品達(dá)不到80%；甚至有4個(gè)生產(chǎn)廠家的樣品在45 min時(shí)，樣品平均溶出量不足40%；還有6個(gè)廠家的樣品平均溶出量達(dá)不到60%。

同樣，根據(jù)溶出測(cè)定要求及圖2 B，可將30 min作為滴丸劑樣品考察結(jié)束時(shí)間點(diǎn)。用不同介質(zhì)測(cè)得廠家產(chǎn)品溶出曲線可知:采用4種不同介質(zhì)時(shí)，取樣時(shí)間30 min與45 min無(wú)顯著性差異，故確定取樣時(shí)間點(diǎn)為30 min。

2.3.2 計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)。從結(jié)束時(shí)間點(diǎn)向前依次選取5個(gè)時(shí)間點(diǎn)，分別列出各時(shí)間點(diǎn)6片樣品的溶出量并計(jì)算其變異系數(shù)。結(jié)果，第一時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)略大于20%，第二時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)略大于10%，其他時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)均未超過(guò)5%，基本達(dá)到溶出測(cè)定要求。

同樣，滴丸樣品所選取的時(shí)間點(diǎn)溶出結(jié)果的變異系數(shù)均未超過(guò)10%，達(dá)到溶出測(cè)定要求。

2.4 限度的確定

根據(jù)溶出測(cè)定要求，應(yīng)根據(jù)參比樣品溶出曲線測(cè)定的結(jié)果，以第1次連續(xù)2點(diǎn)平均溶出量均在85%以上，且該2點(diǎn)溶出量平均值之間差值在5%以內(nèi)時(shí)，取第一時(shí)間點(diǎn)作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的取樣時(shí)間點(diǎn)，即“2.3.1”項(xiàng)下片劑的結(jié)束時(shí)間點(diǎn)；并將該點(diǎn)的溶出量減去15%作為溶出限度（即Q值），即91%減去15%，Q值應(yīng)為76%。同時(shí)，考察全國(guó)各廠家樣品，發(fā)現(xiàn)不同生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品，溶出行為差異很大。因此，對(duì)各廠家的情況進(jìn)行對(duì)比后，結(jié)合2010年版《中國(guó)藥典》（二部）附錄ⅩC溶出度測(cè)定法的有關(guān)要求，建議片劑的溶出限度為75%。

同樣，由“2.3.1”項(xiàng)下滴丸劑的結(jié)束時(shí)間點(diǎn)，該點(diǎn)的溶出量減去15%作為Q值，即97%減去15%，Q值應(yīng)為82%。根據(jù)2批樣品的考察結(jié)果，確定滴丸的溶出限度為80%。

3 測(cè)定方法與結(jié)果

3.1 色譜條件

色譜柱:Alltima C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相:水（取三乙胺10ml，用水稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0）-甲醇（45∶55），流速:1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng):215 nm；進(jìn)樣量:20μl。

3.2 溶液的制備

對(duì)照品溶液的制備:精密稱取枸櫞酸噴托維林對(duì)照品適量，用0.1 mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1 ml中約含28 μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備:取供試品，按“2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行溶出度試驗(yàn)，以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì)，30 min時(shí)取溶液適量，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

取上述2種溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，見(jiàn)圖3 A、B。

3.3 線性范圍

圖3 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；1.枸櫞酸噴托維林Fig 3 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；1.pentoxyverine citrate

精密稱定枸櫞酸噴托維林對(duì)照品14.02mg，置于100ml量瓶中，加流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0、3.0、5.0、7.5、10.0ml，分別置于25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取20μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以溶液的質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得線性方程為:A＝1.4300×104c－4.2323×10－2（r＝0.9999），表明枸櫞酸噴托維林檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為5.608～56.08μg/ml。

3.4 精密度試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，峰面積RSD為0.10%，表明方法精密度良好。

3.5 回收率試驗(yàn)

精密稱取枸櫞酸噴托維林對(duì)照品適量，按處方比例加入輔料，用溶出介質(zhì)配制成相當(dāng)于測(cè)定濃度50%、80%、100%的溶液，按“3.2”項(xiàng)下方法處理樣品，在選定的色譜條件下測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為100.32%～101.29%，RSD＜0.76%（n＝3），表明該方法的準(zhǔn)確度較高，能滿足制劑分析的要求，詳見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

3.6 輔料的干擾試驗(yàn)

取輔料按制劑的處方（缺枸櫞酸噴托維林）比例配制成相應(yīng)的溶液，在選定的色譜條件下測(cè)定。結(jié)果顯示，輔料在主峰保留時(shí)間處均無(wú)吸收，對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將同一樣品制成的供試品溶液在8 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣1次，考察溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，樣品溶液在室溫（25℃）放置8 h枸櫞酸噴托維林的含量無(wú)變化，RSD為0.5%。

3.8 測(cè)定結(jié)果

對(duì)全國(guó)41個(gè)廠家的218批片劑樣品和1個(gè)廠家的2批滴丸樣品，按擬定的溶出度測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖4（每批樣品分別為6粒制劑的平均溶出度數(shù)據(jù)）。

圖4 不同廠家枸櫞酸噴托維林片劑和滴丸的溶出曲線A、B、C.片劑；D.滴丸Fig 4 Dissolution curves of Pentoxyverine citrate tablets and dropping pills from different factoriesA，B，C.tablets；D.dropping pills

4 討論

根據(jù)對(duì)41個(gè)生產(chǎn)廠家的218批片劑樣品檢測(cè)結(jié)果，按照擬定的溶出度測(cè)定方法和限度（30 min，限度75%），顯示有28家生產(chǎn)企業(yè)的121批（55.5%）樣品低于規(guī)定限度。說(shuō)明目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)的枸櫞酸噴托維林片在質(zhì)量上存在較大差異。因此，在2010年版《中國(guó)藥典》（二部）收載的枸櫞酸噴托維林片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中增加溶出度控制檢查項(xiàng)目非常必要。

片劑樣品試驗(yàn)結(jié)果還表明，同一生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的不同批次樣品，溶出行為也存在明顯差異。如30 min時(shí)，部分批次的樣品溶出量高達(dá)80%以上，有的樣品只有30%左右。說(shuō)明生產(chǎn)企業(yè)的處方或生產(chǎn)工藝還存在不科學(xué)或不穩(wěn)定的因素。為保證用藥安全有效，建議有關(guān)企業(yè)盡快完善處方和改進(jìn)生產(chǎn)工藝。

從國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站查知，目前國(guó)內(nèi)僅有3家枸櫞酸噴托維林滴丸生產(chǎn)企業(yè)。本次樣品僅得到1家企業(yè)的2批樣品，2批樣品30 min時(shí)的溶出量均達(dá)到了90%以上，檢驗(yàn)結(jié)果雖然代表性差，但試驗(yàn)結(jié)果明顯好于片劑樣品。在一定程度上也反映了滴丸劑樣品優(yōu)于片劑樣品的質(zhì)量。

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