[摘要] 目的 檢測(cè)肺炎支原體肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）患兒細(xì)胞免疫和體液免疫功能，研究其變化規(guī)律，探討疾病發(fā)生機(jī)制。方法 收集支原體肺炎患兒急性期全血和血清以及健康兒童對(duì)照標(biāo)本，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞表面標(biāo)記CD3+、CD4+、CD8+、CD19+和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4+CD25+表達(dá)比例，檢測(cè)血清標(biāo)本IgG、IgA、IgM。結(jié)果 與正常對(duì)照組比較，支原體肺炎患兒組急性期外周血CD4+、CD4+/CD8+和CD4+CD25+細(xì)胞比例明顯下降，B淋巴細(xì)胞（CD19+細(xì)胞）比例則顯著升高，血清中IgM含量升高。結(jié)論 支原體肺炎患兒急性期處于免疫失衡狀態(tài)，T淋巴細(xì)胞增殖受到抑制，B淋巴細(xì)胞刺激增殖，體液免疫功能仍存在一定失調(diào)。

[關(guān)鍵詞] 肺炎支原體；流式細(xì)胞儀；細(xì)胞免疫；體液免疫

[中圖分類號(hào)] R725.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2013）01（c）-0077-03

MPP是小兒肺炎的常見類型之一，是由肺炎支原體（Mycoplasma pneumoniae，MP）引起的間質(zhì)性肺炎。MPP 主要見于5歲以上兒童，近年來發(fā)病年齡有低齡化趨勢(shì)，且1～3歲嬰幼兒發(fā)病也逐漸增多，總發(fā)病率也有所增加。MPP臨床表現(xiàn)以持續(xù)發(fā)熱（熱程>3 d）及劇烈咳嗽（常為刺激性干咳）為主，嬰幼兒可有氣喘及呼吸困難，本病同時(shí)還常伴有廣泛多器官、多系統(tǒng)的肺外并發(fā)癥，而且病程遷延，并且和支氣管哮喘的發(fā)作關(guān)系密切。以往的研究認(rèn)為[1]主要是MP在肺組織局部生長(zhǎng)繁殖引起的感染性炎癥。近年來研究[2]認(rèn)為MP感染與體液免疫、細(xì)胞免疫均有關(guān)。但MP感染的發(fā)病機(jī)理仍不十分清楚。為進(jìn)一步了解MPP的免疫功能變化，探討疾病發(fā)生機(jī)制，該研究選取了該院2010年6月—2012年6月收治的兒科急性期肺炎支原體肺炎（ Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）患兒40例及健康兒童20例，檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；血清免疫球蛋白IgG、IgA、IgM。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

患兒組選取該院兒科的急性期肺炎支原體肺炎患兒40例，其中男孩23例，女孩17例，年齡14個(gè)月～12歲，平均年齡5.5歲。所有病例均有肺炎的臨床表現(xiàn)及影像學(xué)改變，符合《實(shí)用兒科學(xué)》MPP診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]即：①臨床癥狀具體表現(xiàn)為發(fā)熱，咳嗽劇烈；②肺部體征常不明顯；③胸片可表現(xiàn)為肺炎改變或肺門淋巴結(jié)腫大；④采用凝集法檢測(cè)血MP-IgM，MP-IgM≥1：160為陽(yáng)性。所選患兒未合并其他感染，無哮喘及其他免疫缺陷病，無免疫調(diào)節(jié)藥物使用史。

對(duì)照組為隨機(jī)選取20例健康兒童，其中男孩11例，女孩9例，年齡12個(gè)月～13歲，平均年齡5歲。兩組兒童性別、年齡相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

MPP患兒在急性期（入院第2天）晨起空腹采集靜脈血4 mL，肝素抗凝，低溫保存；健康對(duì)照組同樣方法采血1次。

淋巴細(xì)胞CD4+CD25+、CD3+、CD4+、CD8+、CD19+表達(dá)的檢測(cè)使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)并記錄淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD8+、CD19+及CD4+CD25+表達(dá)陽(yáng)性率。取上述肝素抗凝血100μL，分別加入藻紅蛋白-花青5（CD3-PC5）、異硫氰酸熒光素（CD4-FITC）、藻紅蛋白（CD8-PE）及藻紅蛋白-德州紅-X（CD3-ECD）、CD4-PE、CD25-FITC鼠抗人熒光單克隆抗體各20 μL，混勻，室溫暗處放置20 min，再加入紅細(xì)胞裂解液混勻后待檢。

IgA、IgG及IgM檢測(cè)全自動(dòng)生化分析儀（Olympus AU400）采用透射比濁法測(cè)定IgA、IgG及IgM水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，均數(shù)間的比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 支原體肺炎患兒急性期外周血淋巴細(xì)胞亞群及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá)檢測(cè)結(jié)果

MPP組患兒外周血淋巴細(xì)胞CD4+、CD4+/CD8+均低于健康對(duì)照組（P<0.05），CD19+高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?；純航M調(diào)節(jié)性T細(xì)胞CD4+CD25+的表達(dá)也明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)果見表1。

2.2 支原體肺炎患兒體液免疫功能變化

MPP組患兒血清免疫球蛋白與對(duì)照組比較，IgM水平含量明顯高于健康對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），IgA、IgG差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)果見表2。

3 討論

肺炎支原體是一種介于病毒和細(xì)菌之間的最小原核生物，無細(xì)胞壁，能自行繁殖，主要經(jīng)呼吸道傳染，是引起兒童肺炎的常見病原體，近年來發(fā)病率有所增加。MP感染宿主后可經(jīng)血行播散至全身任何器官組織，通過黏附因子P1蛋白黏附于上皮細(xì)胞表面受體，吸取宿主細(xì)胞養(yǎng)料并生長(zhǎng)繁殖，釋放有毒代謝產(chǎn)物直接造成宿主細(xì)胞損傷，另外，MP抗原還與人體某些組織存在部分共同抗原，而刺激B細(xì)胞，形成免疫復(fù)合物，導(dǎo)致機(jī)體免疫損傷，從而引起機(jī)體免疫功能改變[4-5]。

機(jī)體正常免疫應(yīng)答過程中依靠各種免疫細(xì)胞間的相互協(xié)調(diào)和制約，形成適度的免疫應(yīng)答。該研究提示MPP患兒外周血CD4+細(xì)胞在急性期降低，而致CD4+/CD8+比值下降，反之，B淋巴細(xì)胞（CD19+細(xì)胞）比例則顯著升高，且兩者變化呈負(fù)相關(guān)，提示患兒體內(nèi)T細(xì)胞被抑制、B細(xì)胞受到刺激開始增殖活化，導(dǎo)致機(jī)體有效免疫應(yīng)答下降，故細(xì)胞免疫失衡在MPP發(fā)病機(jī)制中起了一定作用。

CD4+CD25+Treg細(xì)胞一般占人外周血CD4+T細(xì)胞的1%～10%，是一類具有獨(dú)特免疫調(diào)節(jié)功能的T淋巴細(xì)胞亞群[6]。Treg細(xì)胞的免疫學(xué)性質(zhì)表現(xiàn)為以下兩點(diǎn)：一是對(duì)免疫的無應(yīng)答，當(dāng)受抗原或抗CD3單抗刺激時(shí)，該細(xì)胞不發(fā)生增殖，也不分泌IL-2或IFN-γ；二是免疫抑制性，Treg細(xì)胞有抑制效應(yīng)T淋巴細(xì)胞的活化、增殖及功能的作用[6-8]。作為一種調(diào)節(jié)性T細(xì)胞，CD4CD25Treg細(xì)胞在機(jī)體免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著重要的免疫保護(hù)功能，起著維持機(jī)體免疫功能穩(wěn)定的重要的作用，是近幾年免疫學(xué)研究的一個(gè)新途徑[9]。該研究顯示支原體肺炎患兒急性期體內(nèi)CD4+CD25+細(xì)胞比例明顯降低，對(duì)機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)作用減弱，提示支原體感染在病原體直接造成細(xì)胞損傷的基礎(chǔ)上打破了機(jī)體免疫平衡，導(dǎo)致細(xì)胞免疫功能紊亂，使病情進(jìn)一步加重和發(fā)展。

目前自身免疫學(xué)說認(rèn)為MP感染后淋巴細(xì)胞產(chǎn)生自身抗體，抗原抗體形成的免疫復(fù)合物導(dǎo)致機(jī)體的炎性損傷。該研究發(fā)現(xiàn)患兒組急性期血清IgM含量較正常兒童明顯升高，而IgM是人體體液免疫中出現(xiàn)最早的抗體，提示MPP急性期時(shí)血清體液免疫即已出現(xiàn)失衡，在免疫損傷中起了一定的作用。

該研究結(jié)果提示支原體肺炎患兒急性期免疫功能改變，細(xì)胞免疫與體液免疫均存在著一定程度的失衡，這在支原體肺炎的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的影響。因此可以通過監(jiān)測(cè)細(xì)胞因子、抗體等相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)來了解病情，指導(dǎo)治療，為以后的免疫治療提供理論依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Sinaniotis CA，Sinaniotis AC.Community -acquired neumonia in children[J].Curr Opin Pulm Med，2005，11（3）：218-225.

[2] Waites KB，Talkington DF.Mycoplasma pneumoniae and its roleas a human pathogen [J].Clin Microbiol Rev，2004，17（4）：697-728.

[3] 胡亞美，江載芳，陸華，等.實(shí)用兒科學(xué)[M].7版.北京：人民衛(wèi)生出版社， 2002：1204.

[4] 候安存，盧炎，沙莉，等.支原體肺炎患兒輔助性T細(xì)胞亞群Th1、Th2細(xì)胞狀況[J].中華兒科雜志， 2003， 41（9）： 652-656.

[5] 袁壯，董宗祈，胡儀吉，等.患兒肺炎支原體肺炎診斷治療中的幾個(gè)問題[J].中國(guó)實(shí)用兒科雜志， 2002， 17（8）： 449-457.

[6] Piccirillo CA.Regulatory T cells in health and disease[J]. Cytokine，2008， 43（3）： 395-401.

[7] W ingate PJ，McAulayKA，Anthony IC，et al.Regulatory T cell activity in primary and persistentEpstein-Barr virus infection[J].JMed Virol， 2009， 81（5）： 870-877.

[8] W ilczynki JR， Radwan M， Kalinka J. The characterization and role of regulatoryT cells in immune reactions[J].Front Biosci， 2008， 113：2266-2274.

[9] MougiakakosD， ChoudhuryA， LladserA，et al. RegulatoryT cells in cancer[J]. Adv CancerRes，2010，107： 57-117.

（收稿日期：2012-09-04）