聞淑娟　劉煒　楊順娥

【摘要】 目的 研究HSP60在胃癌中的表達(dá)及臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組化S-P法檢測(cè)60例胃腺癌手術(shù)切除標(biāo)本，其中維吾爾族30例，漢族30例，所有患者術(shù)前未行放療和化療。另選切端正常粘膜組織15例作對(duì)照。以上病例均經(jīng)病理檢查，診斷明確無(wú)誤。觀察HSP60在胃腺癌中的表達(dá)及其與臨床的關(guān)系。結(jié)果 1）60例胃腺癌組織中HSP60的表達(dá)陽(yáng)性檢出率為：35.0%（21/60），其在胃粘膜正常組織中基本未見(jiàn)表達(dá)，HSP60的表達(dá)與分化程度呈負(fù)相關(guān)，在淋巴結(jié)有無(wú)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論 提示HSP60與胃腺癌的惡性程度有相關(guān)性，可能參與了胃癌的發(fā)展與轉(zhuǎn)移，可以作預(yù)后參考指數(shù)。

【關(guān)鍵詞】 胃腺癌；HSP60；轉(zhuǎn)移；HSPs

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2013.08.065 文章編號(hào)：1004-7484（2013）-08-4172-01

胃癌發(fā)病率居消化道惡性腫瘤之首，浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致胃癌患者死亡的最主要原因，也是判定預(yù)后的重要指標(biāo)。熱休克蛋白（heat shock protein，HSP）：熱休克蛋白（heat shock proteins，HSPs）是生物細(xì)胞在受到各種細(xì)胞損傷因素刺激時(shí)產(chǎn)生的一類(lèi)高度保守的蛋白質(zhì)，HSP60家族是細(xì)胞內(nèi)含量最多的HSPs，它在多肽的解離、轉(zhuǎn)運(yùn)和在蛋白復(fù)合物的裝配和分解過(guò)程中起著重要作用[1]。我們應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)HSP60在胃腺癌中的表達(dá)，旨在探討其與胃癌的分級(jí)、轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)的關(guān)系及其意義。

1 方 法

1.1 標(biāo)本 收集選用2011年新疆腫瘤醫(yī)院病理科胃癌手術(shù)切除標(biāo)本60例，所有患者術(shù)前未行放療和化療。另選切端正常黏膜組織15例作對(duì)照。高、中、低分化腺癌例數(shù)分別為11、28、21例。其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移19例，未見(jiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。所有標(biāo)本均經(jīng)病理檢查，診斷明確無(wú)誤。

1.2 切片處理 研究用蠟塊以4-5μm厚度連續(xù)切片5張，貼片后置55℃烤箱中3小時(shí)后取出備用。

1.3 試劑 本研究所用抗體HSP60均為兔抗人單克隆抗體，產(chǎn)品編號(hào)分別為RAB-00976，與實(shí)驗(yàn)中所用其它試劑一起購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法 采取SP法，DAB顯色。石蠟標(biāo)本，4μm連續(xù)3張切片，蘇木精-伊紅染色，核實(shí)診斷。陽(yáng)性對(duì)照玻片由福州邁新生物技術(shù)公司提供，陰性對(duì)照根據(jù)本實(shí)驗(yàn)的情況采用空白對(duì)照，PBS代替一抗進(jìn)行免疫染色并完成全過(guò)程。

1.5 結(jié)果判定 光鏡下觀察HSP60陽(yáng)性反應(yīng)物為細(xì)胞漿內(nèi)的棕黃色顆粒。免疫組織化學(xué)染色評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：將著色強(qiáng)度評(píng)分（0分：無(wú)；1分：弱；2分：中；3分：強(qiáng)）和陽(yáng)性細(xì)胞率評(píng)分（0分：<5%；1分：5%-10%；2分：10%-20%；3分：20%-50%；4分≥50%）之和為該病例評(píng)分值。其中0-2分定為陰性病例，>2分定為陽(yáng)性病例。

1.6 結(jié)果統(tǒng)計(jì) 用PEMS軟件包進(jìn)行X2檢驗(yàn)及校正X2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

HSP60在正常組織中未表達(dá)，在60例腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)例數(shù)為21例，陽(yáng)性表達(dá)率為35%，明顯高于對(duì)照組（P<0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。我們將胃腺癌根據(jù)分化程度不同分為高中低分化3組，HSP60在胃高、中、低分化腺癌陽(yáng)性表達(dá)率分別為18.23%、25.0%、57.1%，χ2值是11.66，P<0.05。統(tǒng)計(jì)學(xué)均有顯著性差異。而HSP60的表達(dá)與早晚期及民族無(wú)關(guān)，見(jiàn)表1。

3 討 論

HSP60作為分子伴侶參與腫瘤細(xì)胞周期調(diào)控和表型改變，阻止細(xì)胞終末分化后凋亡，甚至可以保護(hù)腫瘤細(xì)胞免受抗癌藥物、射線照射等因素誘發(fā)的凋亡，HSP60還可通過(guò)與原癌基因和抑癌基因及其蛋白產(chǎn)物的相互作用調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的增殖。目前已有報(bào)道證實(shí)許多惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)常常高表達(dá)HSP60，而且在體內(nèi)外許多不利于腫瘤生長(zhǎng)的環(huán)境中具有腫瘤細(xì)胞保護(hù)作用[2]，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞耐藥，化療失敗。

陳志芬[3]等研究結(jié)腸癌組織中HSP60表達(dá)明顯高于正常組織，分化程度越差，表達(dá)越高，提示HSP60增高與結(jié)腸癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。在本實(shí)驗(yàn)研究中，我們發(fā)現(xiàn)，與正常胃組織對(duì)照，HSP60在胃癌組織中呈高表達(dá)，且不同分化程度胃癌組織中HSP60陽(yáng)性表達(dá)率分別為18.23%、25.0%、57.1%，χ2值是5.66，P<0.05。表明不同分化程度的胃腺癌HSP60表達(dá)有差異，低分化腺癌高表達(dá)，證實(shí)了HSP60與胃腺癌的惡性程度有相關(guān)性，可以作為分化程度的一個(gè)指標(biāo)。這與目前有報(bào)道證實(shí)許多惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)常常高表達(dá)HSP60的結(jié)果相一致[4]。由此，可推測(cè)HSP60作為一種重要的基因參與了惡性腫瘤細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程。而本研究發(fā)現(xiàn)HSP60在胃癌中較正常胃黏膜存在過(guò)表達(dá)。這初步說(shuō)明其過(guò)表達(dá)與胃癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。因此，胃癌HSP60的過(guò)度表達(dá)，也許正是通過(guò)參與腫瘤細(xì)胞增殖的轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程而產(chǎn)生的后果。在本研究中，胃腺癌淋巴結(jié)有癌轉(zhuǎn)移及無(wú)癌轉(zhuǎn)移的HSP60陽(yáng)性表達(dá)率分別為47.4%、29.3%，χ2值是1.87，P>0.05。統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著性差異。說(shuō)明HSP60表達(dá)與胃腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)密切相關(guān)。在本研究中，胃腺癌臨床分期為T(mén)0-2及T3-4HSP60的表達(dá)陽(yáng)性率分別為18.9%、60.9%，χ2值是10.97，P<0.05。早期與進(jìn)展期的胃腺癌HSP60的表達(dá)有顯著性差異，晚期高表達(dá)提示是在胃腺癌的進(jìn)展期發(fā)揮作用。結(jié)果與楊曉春在膀胱癌中研究結(jié)論一致。因此，提示檢測(cè)HSP60可作為判斷胃癌惡性程度的一個(gè)指標(biāo)。其原因還需進(jìn)一步探索，也可能是由于本實(shí)驗(yàn)例數(shù)較少所致。

綜上所述，HSP60與胃癌的發(fā)生發(fā)展、病期有關(guān)。HSP60可以作為評(píng)估胃癌分化程度、預(yù)后不良的指標(biāo)。我們希望今后對(duì)其更深入的研究來(lái)揭開(kāi)其中的秘密。

參考文獻(xiàn)

[1] 周林靜，劉炳亞，朱正綱，等.表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)·轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].上海醫(yī)學(xué)，2000，23（4）：213.

[2] Cappello F，David S，Rappa F，et al.The expression of HSP60and HSP10 in large bowel carcinomas with lymph node metastase[J].BMC Cancer，2005.

[3] 陳志芬，鄧長(zhǎng)生，夏冰，等.HSP60和CD44V6在胃腺癌中的表達(dá)及其意義[J].世界華人消化雜志，2001，9（9）：988-991.

[4] Santarosa M，F(xiàn)avaro D，Quala M.Expression and release of HSP60 in renel-cancer patients[J].Int J Cancer，1995，62：271.