范愛麗　黃志鵬等

摘要：以芥藍（Brassica oleracea）真葉和子葉段為外植體，研究了TDZ濃度、基因型及苗齡等因素對芥藍不定芽再生的影響。結果表明，真葉和子葉段的最佳不定芽誘導培養(yǎng)基分別為MS+0.50～1.00 mg/L TDZ和MS+0.50 mg/L TDZ，真葉和子葉段再生頻率分別達到82.56%和89.06%。最佳生根培養(yǎng)基為1/2 MS+0.10 mg/L NAA，其生根率達到100.00%，再生植株移栽成活率為96.00%。

關鍵詞：芥藍（Brassica oleracea）；TDZ；真葉；子葉段；離體再生

中圖分類號：S635.9 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）09-2171-03

芥藍（Brassica oleracea）是起源于中國南方的一種特產蔬菜[1]，性喜冷涼，秋播冬收，主要食用花薹或嫩株，質脆可口，營養(yǎng)豐富且具有抗癌保健功效[2]。近年來全球氣候變暖，高溫脅迫導致芥藍品質劣化、商品率降低。隨著現代育種技術手段不斷發(fā)展，通過離體誘變或基因工程方法可快速選育出芥藍耐熱種質或品種，提高芥藍品質與產量。芥藍組織培養(yǎng)是離體誘變和轉基因的基礎，芥藍離體再生的外植體有莖段[3-5]、腋芽[6]、下胚軸[7-11]、子葉[12]和帶柄子葉[13]。唐君等[11]將下胚軸經苯基噻二唑脲（TDZ）[14]浸泡預處理，而在培養(yǎng)基中添加高效誘芽激素TDZ對芥藍真葉離體再生的影響尚未報道。

本研究探討了TDZ濃度、基因型及苗齡等因素對芥藍不定芽再生的影響，進一步優(yōu)化芥藍離體再生體系，旨在建立對芥藍具有較廣泛適應性的離體再生體系，為芥藍無性系離體誘變和轉基因進行育種工作提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

以黃花大筍芥藍（J1）、正源大筍黃花芥藍（J2）及自主雜交的F1芥藍（J3）種子為試驗材料。

1.2 方法

1.2.1 無菌苗的培養(yǎng) 挑選子粒飽滿的芥藍種子，在超凈工作臺上先用體積分數70%的乙醇表面殺菌約1 min，再用10% NaClO溶液滅菌20～25 min，然后用無菌水反復沖洗4～5次，最后將種子平放于MS固體培養(yǎng)基表面（MS培養(yǎng)基均添加0.7%瓊脂，3%蔗糖，pH 5.8，121 ℃滅菌20 min）。每瓶約10～15粒，放置于光照培養(yǎng)箱，培養(yǎng)溫度（25±1） ℃，光照時間16 h/d，光照強度2 000 μmol/（m2·s），獲得的無菌苗供切割外植體用。

1.2.3 不同基因型及苗齡對芥藍外植體不定芽再生的影響 在最佳誘導培養(yǎng)基中，觀察比較不同基因型芥藍外植體J1、J2、J3不定芽的再生頻率和再生系數，培養(yǎng)方法同上；在最佳誘導培養(yǎng)基中分別接種最優(yōu)基因型芥藍的不同苗齡（4、5、6、7、8、9、10、11、12、13 d）外植體，培養(yǎng)方法同上。

1.2.4 不同濃度NAA對芥藍外植體不定芽生根的影響 不定芽長到2～3 cm時，轉入含有不同濃度NAA（0.00、0.10、0.30和0.50 mg/L）的1/2 MS生根培養(yǎng)基中，20 d后對生根效果進行觀察對比，篩選出最適濃度。待基部形成大量的毛根后，打開三角瓶口，煉苗6～7 d后取出小苗，洗凈根部培養(yǎng)基后移栽到自配基質中，30 d后統(tǒng)計成活率，再定植于大田。

2 結果與分析

2.1 不同濃度TDZ對芥藍外植體不定芽再生的影響結果

2.2 不同基因型對芥藍外植體不定芽再生的影響結果

在含0.50 mg/L TDZ的培養(yǎng)基中，不同基因型外植體不定芽的再生頻率和再生系數見表2。由表2可見，J1子葉段的再生頻率最低（73.49%），J2子葉段的再生頻率最高（89.06%）；子葉段再生系數最高的是J3（3.63）。J2和J3真葉的再生頻率間無顯著差異，但兩者與J1均有顯著差異（P<0.05）；J2真葉再生系數最高（2.91），與J1有顯著差異（P<0.05）。綜合比較3種基因型外植體的再生頻率和再生系數，J2（正源大筍黃花芥藍）為不定芽誘導的最優(yōu)基因型。

2.3 不同苗齡對芥藍外植體不定芽再生的影響結果

2.4 不同濃度NAA對芥藍外植體不定芽生根的影響結果

3 小結與討論

本研究結果表明，TDZ既可以促進生根、又可促進形成愈傷組織，也可以直接再生不定芽，且濃度在0.05～1.00 mg/L范圍內真葉有較好的再生效果。當TDZ濃度為0.50 mg/L，J2子葉段和真葉最高再生頻率分別為89.06%和82.56%，與唐君等[11]下胚軸經0.50 mg/L TDZ浸泡30 min，放置于6-BA和NAA的激素組合的最高再生頻率為98.50%，相差不到10.00%，滿足后續(xù)試驗的要求。本研究采用單一激素TDZ誘導芥藍不定芽，試驗適宜濃度范圍廣且易于操作，相對于前人研究方法簡單，再生頻率較高，再生芽數多，為芥藍無性系離體誘變和轉基因進行育種工作提供了一定的參考。

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