張高翔，金濤，王利

(1.西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，西藏 拉薩 850000；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院 農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，西藏 拉薩 850000)

·中藥農(nóng)業(yè)·

西藏加查縣瀕危藥材桃兒七真葉分化研究

張高翔1*，金濤2，王利1

(1.西藏職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)學(xué)院，西藏 拉薩 850000；2.西藏自治區(qū)農(nóng)牧科學(xué)院 農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所，西藏 拉薩 850000)

目的探索一種促進(jìn)野生桃兒七真葉分化的一種方法。方法以采自西藏加查縣經(jīng)過自然休眠的野生桃兒七種子為試材，首先分別用0、25、50、100、150、200 mg·L-1的GA進(jìn)行處理，篩選出最適合真葉分化濃度；用0、25、50、100、150、200 mg·L-1的6-BA進(jìn)行處理，篩選出最適合真葉分化的濃度；再用 100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比對桃兒七真葉分化的影響。結(jié)果100 mg·L-1質(zhì)量濃度GA處理下真葉的分化率最高，分別為84.1%；同時(shí)真葉畸形率僅為3.3%，是比較理想的處理濃度。結(jié)論在桃兒七種子萌發(fā)過程中添加適量的GA、6-BA，及二者的配比，能夠有效的提高桃兒七真葉的分化率，但過高的激素含量會(huì)造成較高的真葉畸形率，畸形苗不能夠存活。

西藏加查；桃兒七；真葉；分化

桃兒七 Sinopodophullumhexandrum為小蘗科植物，多年生草本，稀有種。殘存于東亞，呈零星分布，是東亞和北美植物區(qū)系中的一個(gè)洲際間斷分布的物種，對研究東亞、北美植物區(qū)系有一定的科學(xué)價(jià)值。通常生于高海拔地帶的平坦山谷及透光度好的林下、林緣或草灌叢中，海拔下限 2700 m，海拔上限4300 m。桃兒七的根莖與果實(shí)均有較高的藥用價(jià)值 。在西藏主要分布在昌都、察隅、波密、林芝米林、亞東、定結(jié)、隆子、吉隆和加查等地[1]。

筆者在開展桃兒七的人工栽培研究過程中發(fā)現(xiàn)桃兒七的種子具有較強(qiáng)的休眠性，帶帽出土現(xiàn)象嚴(yán)重，并且具有真葉分化困難等特性。桃兒七為雙子葉植物，在種子萌發(fā)時(shí)由胚中的子葉提供營養(yǎng)物質(zhì)，眾所周知子葉是種子在形成時(shí)胚就具有的一部分，而之后的生長依賴于分化形成的真葉進(jìn)行光合作用提供營養(yǎng)，因而真葉的分化對其存活和生長至關(guān)重要。針對桃兒七在人工栽培過程中真葉不分化的問題，筆者以西藏加查縣桃兒七為對象，進(jìn)行了認(rèn)為干擾促進(jìn)真葉分化的研究，以為大規(guī)模人工栽培奠定基礎(chǔ)，并合理保護(hù)桃兒七野生資源。

1 材料與方法

1.1 材料選擇

選用2015年8～9月在西藏加查縣崔久溝采集的野生桃兒七種子。該實(shí)驗(yàn)選擇棕紅色，呈卵狀三角形，飽滿緊實(shí)、無病蟲害的種子。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)經(jīng)過6個(gè)月的自然休眠，于2016年4月中旬進(jìn)行播種。經(jīng)過發(fā)芽實(shí)驗(yàn)證實(shí)，通過自然休眠期的桃兒七種子，其發(fā)芽率可達(dá)95%以上。

本實(shí)驗(yàn)的營養(yǎng)土選用蛭石、草炭、珍珠巖，按照1∶1∶1等比例進(jìn)行配制，并對配制好的營養(yǎng)土進(jìn)行121 ℃高溫滅菌20 min。

2 方法

2.1 不同濃度GA對真葉分化的影響

選取0、50、100、150、200 mg·L-1的GA溶液，在播種后用噴壺每天清晨噴灑一次(每個(gè)處理約20 mL)，直至分化出真葉。其中每個(gè)處理用直徑23 cm的花盆播種10粒種子，覆土深度約1 cm，并重復(fù)3次，30～50 d后統(tǒng)計(jì)真葉分化情況：

2.2 不同濃度6-BA對真葉分化的影響

選取0、25、50、100、150、200 mg·L-1的6-BA溶液，在播種后用噴壺每天清晨均勻噴灑一次(每個(gè)處理約20 mL)，直至真葉分化出。其中每個(gè)處理用直徑23 cm的花盆，播種10粒種子，覆土深度約1 cm，并重復(fù)3次，30 d后統(tǒng)計(jì)真葉分化情況：

2.3 100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比對桃兒七真葉分化的影響

選取100 mg·L-1GA并與0、25、50、100、150 mg·L-1的6-BA溶液相配合，在播種后用噴壺每天清晨噴灑一次(每個(gè)處理約20 mL)，直至真葉分化出。其中每個(gè)處理用直徑23 cm的花盆，播種10粒種子，覆土深度約1 cm并重復(fù)3次，30 d后統(tǒng)計(jì)真葉分化情況：

3 結(jié)果與分析

3.1 不同濃度GA對真葉分化的影響

由表1可知，在空白對照(CK)，三個(gè)處理未能觀察到明顯的真葉分化，但出苗率高達(dá)97.1%；在100、150 mg·L-1兩個(gè)質(zhì)量濃度GA處理下真葉的分化率最高，分別為84.1%、83.5%；隨著GA質(zhì)量濃度的升高，真葉分化率反而有所下降，并且真葉的畸形率也有所上升。

在100、150 mg·L-1兩個(gè)質(zhì)量濃度GA處理下真葉的分化率比較高，但150 mg·L-1質(zhì)量濃度處理下，雖得到了較高的真葉分化率，但畸形率也較高。

表1 不同濃度GA對真葉分化的影響

3.2 不同濃度6-BA對真葉分化的影響

由表2可知，五個(gè)質(zhì)量濃度的6-BA對桃兒七進(jìn)行處理，50、100 mg·L-1處理的情況近似，分別為80.6%、78.9%；低質(zhì)量濃度下(25 mg·L-1)真葉分化率較低，為19.3%；同時(shí)畸形率也比較低，為6.7%；而隨著質(zhì)量濃度的升高(150 mg·L-1)真葉分化率有所下降，為72.0%，同時(shí)畸形率也比較高，為34.8%。

表2 不同濃度6-BA對真葉分化的影響

3.3 100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比對桃兒七真葉分化的影響

由表3可知，100 mg·L-1GA與50 mg·L-16-BA配比時(shí)真葉的分化率較高，為82.5%，但此濃度配比下的真葉畸形率也比較高，為達(dá)為54.3%；而在其他配比濃度時(shí)此基礎(chǔ)上不管是濃度升高還是減低，真葉分化率都有所降低；100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比，真葉的畸形率都較高，都占到該配比濃度真葉分化率的一半以上。

表3 100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比對桃兒七真葉分化的影響

圖1 桃兒七種子

圖2 桃兒七經(jīng)過100 mg·L-1 GA處理后的真葉分化情況

圖3 瀕臨死亡的畸形真葉

圖4 養(yǎng)分殆盡的桃兒七子葉

4 討論

本實(shí)驗(yàn)通過對不同濃度GA對真葉分化的影響、不同濃度6-BA對真葉分化的影響、100 mg·L-1GA與不同質(zhì)量濃度6-BA配比對桃兒七真葉分化的影響的研究，可以看出在100 mg·L-1質(zhì)量濃度GA處理下真葉的分化率最高，分別分別為84.1%；同時(shí)真葉畸形率僅為3.3%，是比較理想的處理濃度。

眾所周知子葉是種子在形成時(shí)胚就具有的一部分，一般在種子萌發(fā)時(shí)提供營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)消耗殆盡便自然脫落；真葉才是植物真正意義上的葉子，為植物生長發(fā)育提供物質(zhì)基礎(chǔ)。在野生條件下桃兒七的真葉能夠正常分化，但在人工栽培過程中，桃兒七真葉不分化或分化率低的是一個(gè)大問題。具體原理原因目前尚不沒有比較明確的結(jié)論，可能是野生環(huán)境和人工栽培環(huán)境在溫度、濕度、光照上的不同所造成的。

在實(shí)驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)有些試材經(jīng)過處理后分化出了真葉，但真葉為畸形(特別是在前期進(jìn)行浸種處理的預(yù)實(shí)驗(yàn))，該部分植株也不能夠長時(shí)間存活，在栽培過程中多枯萎死亡，有些高濃度的處理，如100 mg·L-1GA與50 mg·L-16-BA配比，雖然可以獲得82.5%的真葉分化率，但真葉畸形率同時(shí)也高達(dá)54.3%，后期死苗率較高，也不適用。

本實(shí)驗(yàn)通過對西藏加查縣桃兒七真葉分化的研究，找到了適于桃兒七真葉分化的濃度，為桃兒七人工栽培奠定了基礎(chǔ)，對更好的保護(hù)和開發(fā)西藏桃兒七資源具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

[1] 澤仁旺姆，于順利，尼珍，郭尚磊.獨(dú)一味等 13 個(gè)藏藥植物種在西藏的分布和資源量調(diào)查[J].北京農(nóng)業(yè)，2010：56-59.

[2] 虞泓.桃兒七[J].植物雜志，1999(3)：6-7.

[3] 劉海軍，徐艷，蘇國慶，等.桃兒七的研究進(jìn)展[J].中草藥，2004，35(1)：98- 100.

[4] 陳毓亨.我國鬼臼類植物資源的研究[J].藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，14(2)：101-107.

[5] 馬紹賓，徐正堯，胡志浩.桃兒七繁殖生物學(xué)研究[J].西北植物學(xué)報(bào)，17(1)：49-55.

[6] 鮑隆友，楊曉梅，劉玉軍.西藏野生藏藥材馴化技術(shù)研究[J].中國林副特產(chǎn)，2008，2(1)：22-25.

StudyonLeafDifferentiationofEndangeredMedicinalMaterials-Sinopodophyllumhexandrum

ZHANG Gaoxiang1*，JIN Tao2，WANG Li1

(1.TibetVocationalTechnicalCollege，CollegeofAgriculturalScienceandTechnology，Lhasa850000，China； 2.TibetAcademyofAgricultureandAnimalHusbandryScience，AgriculturalResourceandEnvironmentResearchInstitute，Lhasa850000，China)

Objective：The study is aimed to find a method for leaf differentiation ofSinopodophyllumhexandrum.MethodsThe natural dormant seeds of wildS.hexandrumharvested in Jiacha of Tibet were collected.GA was added to screen the optimal concentration，then 6-BA was used to screen the optimal concentration for study of leaf differentiation ofS.hexandrum.ResultsThe leaf differentiation ofS.hexandrumwas 84.1% under 100 mg·L-1of GA，and the malformation rate was 3.3%.ConclusionGA and 6-BA could promote leaf differentiation ofS.hexandrum，however high concentration of plant hormones may result in the malformation of the leaf.

Tibet Jiacha；Sinopodophyllumhexandrum；leaf；differentiation

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.9.012

2016年度西藏自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目(2016ZR-ZX-05)

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張高翔，講師，研究方向：瀕危藏藥人工繁殖及栽培；E-mail：365069645@qq.com

2017-03-06)