蔡微微 馮維良

●檢測(cè)診斷

關(guān)于《消毒技術(shù)規(guī)范》使用中消毒液染菌量測(cè)定法檢出率的研究

蔡微微 馮維良

隨著細(xì)菌耐藥性的不斷增強(qiáng)，醫(yī)院感染管理形勢(shì)越來(lái)越嚴(yán)峻，1999年某地就曾出現(xiàn)過(guò)因?yàn)槲於┫疽号渲棋e(cuò)誤而引起龜分枝桿菌暴發(fā)性流行的案例[1]，因而消毒液染菌量測(cè)定成為醫(yī)院控制院內(nèi)感染的重要措施。國(guó)家衛(wèi)生部制定的《消毒技術(shù)規(guī)范》2012版要求使用中的滅菌消毒液必須無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，其染菌量測(cè)定方法為：1ml的被檢消毒液和9ml的中和試劑混合后，從按一定比例稀釋的中和后混合液中取lml進(jìn)行傾注培養(yǎng)，48h后菌落計(jì)數(shù)[2]。但是當(dāng)中和后混合液中細(xì)菌量很少時(shí)，受接種量只有1ml的限制，易出現(xiàn)漏檢，這也可能成為發(fā)生醫(yī)院感染（尤其是免疫力低下的患者）的一大潛在危險(xiǎn)因素。針對(duì)這種可能性，筆者設(shè)計(jì)了相應(yīng)實(shí)驗(yàn)，對(duì)5類消毒劑加入（10±2）CFU/ml的細(xì)菌，然后按照《消毒技術(shù)規(guī)范》2012版消毒液染菌量測(cè)定法檢測(cè)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 材料 大腸埃希菌ATCC25922，由中國(guó)菌種保藏管理中心提供；Densichek比濁儀，由法國(guó)生物梅里埃有限公司生產(chǎn)；營(yíng)養(yǎng)瓊脂，由杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)；消毒劑對(duì)應(yīng)中和試劑，5類常用消毒劑：含有效氯消毒液、0.1%～0.5%碘消毒劑、2%戊二醛溶液、75%乙醇溶液、0.1%～0.5%季銨鹽類消毒液。

1.2 方法

1.2.1 菌液配置 取標(biāo)準(zhǔn)菌株接種于血平板培養(yǎng)18～24h，配成0.5麥?zhǔn)蠁挝唬ㄏ喈?dāng)于108CFU/ml）的菌懸液，經(jīng)系列梯度稀釋得到（1 000±200）CFU/ml的菌懸液10ml。

1.2.2 樣品制備 取1ml被檢消毒液加入到9ml含有相應(yīng)中和試劑的稀釋液試管中，每種消毒液制備100管；每管中加入（1 000±200）CFU/ml的菌懸液10μl，充分混勻，制得含菌量接近1CFU/ml的中和混合液，中和試劑的濃度和種類參照《臨床檢驗(yàn)管理與技術(shù)規(guī)程》[2]。

1.2.3 傾注培養(yǎng) 從每管上述10ml的混合液中取1ml傾注培養(yǎng)，每種消毒液100次，5種消毒液共500次，48h后菌落計(jì)數(shù)，分別記錄每種消毒液有細(xì)菌生長(zhǎng)的次數(shù)，得出細(xì)菌的檢出率。同時(shí)從被檢消毒液和含相應(yīng)中和試劑的10ml混合液中取1ml傾注培養(yǎng)作為陰性對(duì)照，5類消毒液共做5個(gè)平板；將濃度為（1 000± 200）CFU/ml的菌懸液用無(wú)菌0.9%氯化鈉溶液稀釋10倍后取1ml傾注培養(yǎng)作為陽(yáng)性對(duì)照，共做3個(gè)平板。1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)5類消毒液的細(xì)菌檢出率采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

陰性對(duì)照無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)，陽(yáng)性對(duì)照細(xì)菌生長(zhǎng)良好；中和后混合液實(shí)際加入細(xì)菌濃度=500個(gè)平板上總細(xì)菌個(gè)數(shù)/500=0.98CFU/ml。當(dāng)消毒液細(xì)菌量為10CFU/ml時(shí)，細(xì)菌平均檢出率為62.4%，5類消毒液之間細(xì)菌檢出率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.926，P=0.749），說(shuō)明用該方法檢測(cè)消毒液染菌量與消毒液種類無(wú)關(guān)，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 細(xì)菌含量在（10±2）CFU/ml時(shí)不同種類消毒劑細(xì)菌檢出率的比較

3 討論

評(píng)估消毒劑滅菌效果時(shí)，監(jiān)測(cè)消毒滅菌的過(guò)程優(yōu)于自消毒滅菌后的物品中分離微生物，其原因在于自消毒滅菌物品分離一個(gè)或幾個(gè)微生物是困難的[3]。消毒劑的消毒效果評(píng)價(jià)主要還是在于微生物的分離，因此，使用中消毒液染菌量的測(cè)定就顯得尤為重要?，F(xiàn)有關(guān)于消毒劑消毒效果監(jiān)測(cè)的文獻(xiàn)主要集中于消毒劑的合格率方面，而對(duì)于消毒技術(shù)規(guī)范中染菌量測(cè)定方法自身方面的研究很少。本研究結(jié)果顯示，消毒劑染菌量設(shè)計(jì)在10CFU/ml時(shí)，使用規(guī)范中的方法出現(xiàn)了漏檢情況，與鄧通洋等[4]通過(guò)泊松分布的公式推導(dǎo)出使用中消毒劑染菌量測(cè)定法在95%檢出率時(shí)的檢出限是30CFU/ml相吻合，并用公式P（0）=e-λ（其中λ=0.98）計(jì)算，63.0%的理論檢出率與本研究62.4%的檢出率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），進(jìn)一步為上述理論提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

《消毒技術(shù)規(guī)范》2012版規(guī)定，使用中滅菌消毒液必須無(wú)菌生長(zhǎng)。根據(jù)本研究結(jié)果，當(dāng)消毒液中細(xì)菌量很少時(shí)，用該方法檢測(cè)滅菌消毒劑的染菌量將出現(xiàn)漏檢，且與消毒劑的種類無(wú)關(guān)；當(dāng)使用中消毒液染菌量規(guī)定≤100CFU/ml時(shí)，規(guī)范中的檢測(cè)方法能符合要求。目前醫(yī)院實(shí)際使用的滅菌劑是戊二醛消毒液，在使用過(guò)程中除了監(jiān)測(cè)戊二醛的濃度外，還要監(jiān)測(cè)其微生物濃度，但監(jiān)測(cè)過(guò)程相對(duì)復(fù)雜、監(jiān)測(cè)頻率較高導(dǎo)致檢測(cè)成本也比較高，所以在條件允許的情況下，很多醫(yī)院對(duì)于醫(yī)療器械的消毒滅菌還是首選物理方法，不主張化學(xué)方法?；谖於┦褂弥邢疽合拘Ч麢z測(cè)相對(duì)困難，建議盡量減少采用戊二醛消毒液作為滅菌消毒液來(lái)對(duì)醫(yī)療器械進(jìn)行滅菌，或者對(duì)《消毒技術(shù)規(guī)范》的使用中滅菌消毒液染菌量檢測(cè)方法進(jìn)行改進(jìn)。

[1]李立明,詹思延．流行病學(xué)研究實(shí)例[M]．第4卷北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:94-103．

[2]衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司．消毒技術(shù)規(guī)范[M]．北京:中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部,20012:18-19．

[3]倪語(yǔ)星,尚紅,張卓然,等．臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:517-518．

[4]鄧通洋,程琮,馮維良,等．泊松分布在消毒與滅菌效果監(jiān)測(cè)法檢出限中的應(yīng)用[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2013,23(4):867-869．

2013-01-07）

（本文編輯：沈叔洪）

溫州市衛(wèi)生局科技項(xiàng)目（2012A009）

325200 瑞安市婦幼保健院感染管理科（蔡微微），檢驗(yàn)科（馮維良）