喬曉娟 李昊昌 李云霞 李筱賀

1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院保健中心一病區(qū),內(nèi)蒙古呼和浩特 010050；2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院超聲科，內(nèi)蒙古呼和浩特 010050；3.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院解剖教研室，內(nèi)蒙古呼和浩特 010050

乳腺癌屬于臨床女性最普遍惡性腫瘤，目前國(guó)際上病死率僅比肺癌低，位于致死疾病第二位，且仍然處于逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。乳腺癌的致病標(biāo)志物研究一直屬于臨床研究重要課題，以期能為乳腺癌的治療找到新方向。本研究主要對(duì)2012年5月～2013年5月在本院行手術(shù)治療的乳腺癌患者72例的乳腺癌組織標(biāo)本中BP1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)及其與Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行研究，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本資料隨機(jī)選取2012年5月～2013年5月在本院行手術(shù)治療的乳腺癌患者72例，年齡為31～76歲，平均（46.0±6.7）歲。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

患者的臨床癥狀均與相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中乳腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)相符合，且經(jīng)過(guò)鉬鈀及彩超等相關(guān)檢查方法的確診[1]。

1.3 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：患者均知情并同意相關(guān)病理檢驗(yàn)；所有患者無(wú)手術(shù)和麻醉相關(guān)禁忌證。排除標(biāo)準(zhǔn)：手術(shù)前經(jīng)過(guò)化療、放療者；無(wú)嚴(yán)重的心臟肝腎疾病者。

1.4 方法

將在本院進(jìn)行手術(shù)治療的乳腺癌患者72例的乳腺癌組織標(biāo)本作研究組，將同一乳腺癌患者的乳腺癌旁組織（距離乳腺癌的病灶邊緣大于5cm位置處正常的乳腺組織）標(biāo)本72例作對(duì)照組，對(duì)兩組予以Westem blot和免疫組織的化學(xué)方法進(jìn)行陽(yáng)性檢測(cè)。

1.4.1 試劑和材料選擇 實(shí)驗(yàn)中材料和試劑選擇，BP1蛋白由Novus Bio-logicals生產(chǎn)的兔抗BP1的多克隆抗體，由Santa Cruz生產(chǎn)的Bcl-2的鼠抗單克隆的抗體，β-actin的鼠抗單克隆的抗體等。選擇由Sigma Biotechnology生產(chǎn)的硝酸纖維的過(guò)濾膜；Promega生產(chǎn)的NBT/BCIP的顯影劑，以及北京的中杉金橋生產(chǎn)的免疫組化和DAB的顯示相關(guān)試劑盒等。

1.4.2 Westem blot方法 將從機(jī)體取下并做好的組織均放與-80℃的溫度下保存，從研究組和對(duì)照組兩種細(xì)胞均取下組織100mg放在EP管內(nèi)，剪碎后放入勻漿液冰水中高速勻漿直到組織塊不可見(jiàn)，然后進(jìn)行離心，提取上層清夜。依據(jù)改良后的Lowary等方法，進(jìn)行蛋白測(cè)定以及兩組標(biāo)本中BP1的陽(yáng)性表達(dá)和其與Bcl-2表達(dá)相關(guān)性的測(cè)定。

1.4.3 免疫組化方法 選擇研究組乳腺癌的組織標(biāo)本，連續(xù)切片后，進(jìn)行切片的脫蠟至水，后微波修復(fù)，選擇免疫組化的試劑盒進(jìn)行封閉，放置于溫度4℃下進(jìn)行過(guò)夜等操作，通過(guò)DAN的顯色之后，選擇蘇木精進(jìn)行復(fù)染，乙醇的脫水以及中性樹(shù)膠的封片等操作，檢測(cè)BP1的陽(yáng)性表達(dá)和其與Bcl-2的表達(dá)相關(guān)性等。

1.5 觀察指標(biāo)

觀察并統(tǒng)計(jì)分析兩組組織標(biāo)本中的BP1的臨床表達(dá)，研究組乳腺癌的組織中BP1及Bcr-2的的臨床表達(dá)，以及乳腺癌的組織中BP1和臨床病理相關(guān)性情況。

1.6 療效標(biāo)準(zhǔn)

1.6.1 陽(yáng)性表達(dá)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) BP1陽(yáng)性表達(dá)主要分布于上皮細(xì)胞胞質(zhì)及部分胞核，Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)主要分布上皮細(xì)胞胞質(zhì)，相應(yīng)的部位呈棕黃色的顆粒表示陽(yáng)性。

1.6.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) 計(jì)數(shù)于顯微鏡下進(jìn)行，統(tǒng)一進(jìn)行（×40）放大，由三名專業(yè)操作，獨(dú)立隨機(jī)選擇等距的每張切片5個(gè)視野，分析系統(tǒng)5個(gè)視野陽(yáng)性的細(xì)胞數(shù)量，并取平均數(shù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS19.0軟件包完成統(tǒng)計(jì)分析，一般資料應(yīng)用（±s）完成表示，計(jì)量資料應(yīng)用t完成檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料應(yīng)用x2完成檢驗(yàn)，當(dāng)P＜0.05表示比較差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組的BP1的臨床表達(dá)情況

研究組組織內(nèi)BP1的陽(yáng)性表達(dá)，比對(duì)照組組織內(nèi)BP1陽(yáng)性表達(dá)高，比較差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義（t=2.351，P=0.000，P＜0.05）。如表1。

2.2 研究組中BP1及Bcr-2的的臨床表達(dá)情況

研究組的乳腺癌的組織Bcl-2的蛋白陽(yáng)性表達(dá)和BP1陽(yáng)性表達(dá)具有正相關(guān)性（r=0.7854，P＜0.05）。如表2。

表1 兩組的BP1的臨床表達(dá)情況（±s）

表1 兩組的BP1的臨床表達(dá)情況（±s）

組別 n Westem blot（+） 免疫組化（+）研究組 72 0.95±0.58 302.80±153.76對(duì)照組 72 0.09±0.06 103.92±58.12

表2 研究組中BP1及Bcl-2的的臨床表達(dá)情況（±s）

表2 研究組中BP1及Bcl-2的的臨床表達(dá)情況（±s）

方法 n BP1表達(dá) Bcr-2表達(dá)Westem blot（+） 72 0.95±0.58 0.62±0.39免疫組化（+） 72 302.80±153.76 212.37±127.45

2.3 研究組中BP1和臨床病理相關(guān)性情況

研究組標(biāo)本中，BP1的陽(yáng)性表達(dá)和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具有相關(guān)性（r=0.684，r=0.812，r=0.668，P＜0.05）。如表3。BP1的陽(yáng)性表達(dá)和患者絕經(jīng)、年齡、腫瘤大小、病理類型、臨床分期以及Ki-67等相關(guān)因素不相關(guān)（P＞0.05）。

3 討論

機(jī)體組織內(nèi)的BP1蛋白發(fā)現(xiàn)于行β珠的蛋白表達(dá)相關(guān)調(diào)控時(shí)，克隆出的BP1的cDNA長(zhǎng)度是1254bp，由240個(gè)氨基酸進(jìn)行編碼，結(jié)構(gòu)域呈現(xiàn)為螺旋狀同源異性。同時(shí)BP1蛋白同家族是DLX，BP1也可稱DLX9。

BP1蛋白是新近發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子與人類乳腺癌發(fā)生密切相關(guān)，有研究表明BP1的高表達(dá)與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。有研究在急性白血病中BP1的表達(dá)高于正常人，其主要機(jī)制為BP1在腫瘤的形成中發(fā)揮上游因子的作用。依據(jù)相關(guān)臨床研究實(shí)踐表明，BP1可能屬于乳腺癌的腫瘤形成重要上調(diào)因子，可能促進(jìn)機(jī)體腫瘤的形成和發(fā)展，且機(jī)體乳腺癌組織內(nèi)的BP1陽(yáng)性表達(dá)，明顯比癌旁的正常組織內(nèi)高[2]。機(jī)體PR、ER和C-erbB-2乳腺癌的內(nèi)分泌相關(guān)敏感性判斷重要病理指標(biāo)，BP1蛋白的表達(dá)可與其指標(biāo)具有正相關(guān)性。依據(jù)相關(guān)研究表明，Bcl-2蛋白參與很多腫瘤發(fā)生和發(fā)展，Bcl-2蛋白具有細(xì)胞凋亡抑制以及細(xì)胞生存期延長(zhǎng)作用，當(dāng)乳腺癌細(xì)胞處于凋亡期期，Bcl-2蛋白具有直接影響[3-9]。依據(jù)相關(guān)研究表明，BP1蛋白的表達(dá)對(duì)于機(jī)體Bcl-2的上升表達(dá)具有促進(jìn)效果[10-11]。

表3 研究組中BP1和臨床病理相關(guān)性情況（±s，n=72）

表3 研究組中BP1和臨床病理相關(guān)性情況（±s，n=72）

ER（%） PR（%） C-erb-B-2（%）0～50 51～100 0～50 51～100 0～50 51～100 Westem blot（+） 1.2±0.5 0.7±0.6 1.1±0.5 0.7±0.6 0.5±0.4 1.0±0.5免疫組化（+） 348.5±130.3 251.8±131.1 352.2±106.5 245.4±180.6 123.8±123.4 342.1±130.5方法

本研究表明，研究組組織內(nèi)BP1的陽(yáng)性表達(dá)，比對(duì)照組組織內(nèi)BP1陽(yáng)性表達(dá)高，比較差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義，說(shuō)明在本組研究中BP1可以作為乳腺癌診斷標(biāo)志物；研究組的乳腺癌的組織Bcl-2的蛋白陽(yáng)性表達(dá)和BP1陽(yáng)性表達(dá)具正相關(guān)性，由此可以推斷，BP1可能通過(guò)雌二醇的調(diào)節(jié)作用而升高，發(fā)揮其誘導(dǎo)癌變。研究組標(biāo)本中BP1的陽(yáng)性表達(dá)和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具相關(guān)性；BP1的陽(yáng)性表達(dá)和患者絕經(jīng)、年齡、腫瘤大小、病理類型、臨床分期以及Ki-67等相關(guān)因素不相關(guān)，表明BP1不能應(yīng)用到對(duì)乳腺癌治療的療效監(jiān)控。研究表明乳腺癌組織內(nèi)BP1的陽(yáng)性表達(dá)和乳腺癌的發(fā)生以及組織內(nèi)Bcl-2的蛋白陽(yáng)性表達(dá)具有相關(guān)性。

綜上所述，乳腺癌患者的乳腺癌組織內(nèi)BP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)，可同乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展具有相關(guān)性，且可與Bcl-2的上升表達(dá)的促進(jìn)具有相關(guān)性，從而產(chǎn)生乳腺癌的細(xì)胞凋亡抑制作用，具有一定臨床研究和應(yīng)用價(jià)值。

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