胡 江，費(fèi)建梅，吳林根

人體體表、腸腔內(nèi)存在大量微生物群，攜帶有1014的細(xì)菌，總重量約為1 271 g。腸道內(nèi)更是寄居著種類繁多的微生物，這些微生物被統(tǒng)稱為腸道菌群。腸道菌群的種類和數(shù)量只是相對穩(wěn)定的，它們受飲食、生活習(xí)慣、地理環(huán)境、年齡及衛(wèi)生條件的影響而變化。正常情況下，腸道菌群、宿主和外部環(huán)境建立起一個(gè)動態(tài)的生態(tài)平衡，對人體的健康起著重要作用。臨床上使用口服黃連素對2型糖尿病患者進(jìn)行降糖治療取得較好療效，但在治療過程中，偶見個(gè)別患者發(fā)生一過性腹瀉癥狀。為探討黃連素對2型糖尿病患者腸道菌群的影響，對口服黃連素的2型糖尿病患者，與未服藥的2型糖尿病患者的大便進(jìn)行外觀性狀及涂片鏡檢結(jié)果進(jìn)行比較，以利臨床合理使用黃連素對糖尿病的治療。

1 對象與方法

1.1 對象 為本院代謝綜合癥專科門診2011年5月～2011年12月接受黃連素伍用谷維素降糖治療的已確診Ⅱ型糖尿病患者，其中男11例，女59例。均正常飲食、無胃腸道疾病、未服用其他對腸道功能有影響藥物、排便正常。收集口服黃連素前糞便標(biāo)本47份，男8例，女39例，平均年齡(56.9± 12.3)歲;口服黃連素伍用谷維素后糞便標(biāo)本23份，男3例，女20例，平均年齡(56.9±11.1)歲。DM診斷標(biāo)準(zhǔn)按WHO 1990年標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。服藥劑量為黃連素服法為0.5 g每日3次，谷維素60 mg 1日3次［1］，分別在服藥前，服藥后2周～2月留取新鮮糞便標(biāo)本于無菌盒內(nèi)，30 min內(nèi)送檢。

1.2 方法 (1)糞便外觀性狀和臨床表現(xiàn)。(2)采用稀釋糞便直接涂片法:①涂片，取一試管加無菌生理鹽水10滴(50 μl/滴)，加入水滴樣大小糞便標(biāo)本，攪拌混勻后取1滴混勻液滴于玻片上，涂成直徑2 cm大小標(biāo)本膜，晾干，待染;②涂片固定后進(jìn)行革蘭氏染色，晾干，待鏡檢;③剪一圓形紙片，大小同顯微鏡目鏡，中間剪出一圓形孔，直徑為目鏡直徑的1/2，放置目鏡中;在油鏡下觀察4個(gè)視野，分別記錄細(xì)菌總數(shù)、革蘭陰性球菌、革蘭陰性桿菌、革蘭陽性球菌、革蘭陽性桿菌，以及其他細(xì)菌的數(shù)量;④計(jì)算:依據(jù)記錄的數(shù)據(jù)分別計(jì)算每一油鏡視野的細(xì)菌總數(shù)，每500個(gè)細(xì)菌中桿菌、球菌數(shù)以及桿球比。

2 結(jié)果

大便的物理性狀兩者亦無明顯差異，均為黃軟便，偶有未消化食物。臨床觀察服用黃連素組偶見一過性大便次數(shù)增多、腹脹病例，未見發(fā)熱，且未作處理自愈。

2型糖尿病患者服用黃連素伍用谷維素后每個(gè)油鏡視野下腸道菌群總數(shù)較服藥前有所增加，但差異無顯著性;桿球比服藥前后差異也無顯著性。見表1。

3 討論

人類腸道菌群數(shù)量龐大，構(gòu)成極為復(fù)雜。已知大腸內(nèi)寄居著50多個(gè)屬、500多種細(xì)菌。每克腸內(nèi)容物的細(xì)菌量約為1012個(gè)集落形成單位(colony forming units，CFU)，其中雙歧桿菌屬、類桿菌屬、消化鏈球菌屬等專性厭氧菌約占腸道總菌量的99%，腸桿菌科、腸球菌屬等兼性厭氧菌約占總菌量的1%［2］。有關(guān)腸道菌群的數(shù)據(jù)主要來自對糞便菌群的研究［3］。研究的代表菌通常為類桿菌、雙岐桿菌、消化鏈球菌、乳桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、韋榮球菌、腸桿菌科細(xì)菌、腸球菌、酵母菌。

表1 服藥前后Ⅱ型糖尿病患者腸道菌群的比較(±s)

表1 服藥前后Ⅱ型糖尿病患者腸道菌群的比較(±s)

注:服藥前與服藥后均有個(gè)別標(biāo)本中偶見酵母樣真菌孢子，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，未列入。

球桿比服藥前組別 例數(shù) 菌數(shù)/FV G+b/500個(gè) G-b/500個(gè) G+c/500個(gè) G-c/500個(gè)47 59560±855 26±8 252±23 66±7 155±17 1.03±0.4服藥后 23 60490±919 21±9 267±28 64±6 156±16 1.04±0.5 t值＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05 -0.246 0.169 -0.204 0.108 -0.032 -0.066 P值

本研究采用糞便涂片染色方法。腸道菌群的研究常常采用公認(rèn)的定性定量培養(yǎng)法——光岡法［4］。培養(yǎng)法過程繁瑣、難度大、費(fèi)用高，糞便直接涂片法則簡便、快速、且價(jià)廉。張秀榮等經(jīng)500例實(shí)驗(yàn)，王曉明等［5-6］通過134例實(shí)驗(yàn)比較得出糞便涂片染色所見的菌群分布與培養(yǎng)結(jié)果基本相符。

本研究顯示個(gè)體間腸道菌群數(shù)量種類有差異(見表1)。文獻(xiàn)記載［7］正常菌群的種類、數(shù)量和分布并非固定不變的，是受多種因素影響，諸如宿主、微生物及微生物之間的互相作用，又與飲食密切相關(guān)。腸道菌群數(shù)量、種類隨年齡變化而有所不同，健康乳兒中，雙歧桿菌約占腸道菌群的98%，主要為嬰兒雙歧桿菌;成年后不僅雙歧桿菌數(shù)量減少，菌種也不同，主要為青春雙歧桿菌;進(jìn)入老年后有些人檢測不出雙歧桿菌，即使檢出數(shù)量也很少，而產(chǎn)生硫化氫和吲哚的芽孢桿菌類增多，腸道腐敗過程較快，有害物質(zhì)產(chǎn)生也較多，這些物質(zhì)被吸收后又加快老化過程［8］。許冬等研究也表明老年人腸道菌群中雙歧桿菌數(shù)量明顯減少，腸桿菌、腸球菌數(shù)量增加［9］。

糖尿病患者腸道菌群的研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者在空腹血糖和糖化血紅蛋白升高的同時(shí)則出現(xiàn)有害的腸桿菌科細(xì)菌升高，而雙歧桿菌、類桿菌數(shù)量下降［10］。

老年DM患者雙歧桿菌、乳桿菌減少，大腸桿菌增加。雙歧桿菌的減少與血糖控制不佳有關(guān)［11］。個(gè)體間腸道菌群數(shù)量種類的變異與本研究相符。據(jù)劉勇報(bào)道［12］，臨床對腸道菌群狀況分析以球菌與桿菌比例的方式報(bào)告，稱球菌桿菌比，參考值為1:3(成人)。如結(jié)果在參考范圍內(nèi)，則表明菌群正常，如果球菌桿菌比大于1:3，表明菌群失調(diào)，比值越大，失調(diào)越嚴(yán)重。雖然球菌桿菌比大于1:3，但對象均為2型糖尿病患者，且多為中老年人，因此，腸道菌群與普通人群相比可存在一定差異性，與國內(nèi)研究結(jié)果相符［9-11］。

黃連素又稱小檗堿(berberine)，是從黃連、黃柏等中藥中提取的生物堿。黃連素能抑制動物高血糖。研究證明，黃連素在40 mg/kg時(shí)已有明顯降血糖作用，有效時(shí)間達(dá)6 h，對多種動物模型包括正常小鼠及四氧嘧啶性、腎上腺素性、葡萄糖性高血糖小鼠等均有顯著降血糖效果［13］。因其溶解度低，不易被人體吸收，與谷維素伍用，可以促進(jìn)其吸收，增強(qiáng)其療效［13-14］。2組糞便標(biāo)本外觀顯示多為成形軟便，未見水樣便。臨床觀察所有患者未見發(fā)熱和續(xù)持腹瀉癥狀。一過性大便次數(shù)增多、腹脹病例未做任何處理自行恢復(fù)正常，可以認(rèn)為黃連素并未產(chǎn)生腸道菌群紊亂的臨床表現(xiàn)。鏡檢對菌群數(shù)量和比例研究顯示，每個(gè)油鏡視野下的細(xì)菌總數(shù)及球菌與桿菌的比值，服藥前后均無明顯性差異(P＞0.05)。從本結(jié)果可以看出，黃連素對Ⅱ型糖尿病患者腸道菌群未產(chǎn)生明顯影響。

本組發(fā)生短暫腹脹等胃腸道反應(yīng)，咎其原因可能是因?yàn)辄S連素可使胃泌素分泌減少，因而起到抑制胃酸分泌作用［14］，黃連素對消化性潰瘍的促進(jìn)愈合作用已有文獻(xiàn)報(bào)告的佐證［15-16］?？赡苡捎谖杆岬南鄬p少這一胃腸道內(nèi)環(huán)境的突然改變導(dǎo)致胃腸道內(nèi)細(xì)菌有所增加(表1顯示本組患者服用黃連素后每個(gè)油鏡視野下腸道菌群總數(shù)較服藥前有所增加)，導(dǎo)致結(jié)合膽酸分解為游離膽酸增加，影響脂肪的吸收造成脂肪瀉;又由于細(xì)菌代謝產(chǎn)出短鏈脂肪酸、H2、CO2增加，造成腹脹、腹痛。隨著個(gè)體腸道菌群對內(nèi)環(huán)境改變的適應(yīng)，隨著胃泌素恢復(fù)正常，這些癥狀也逐漸消失［14］。

迄今，尚未見關(guān)于黃連素對人體腸道菌群影響的研究。我們僅做了黃連素對糖尿病患者腸道菌群影響的初步探討。近年來，腸道菌群對人體健康的影響日益引起國際上的重視，越來越多的研究顯示兩者密切相關(guān)，他們以小鼠為模型，用系統(tǒng)生物學(xué)(atop-down sys tems biology)的方法揭示了宿主代謝譜與其腸道菌群結(jié)構(gòu)有著顯著的相關(guān)性［17］。以研究腸道菌群的結(jié)構(gòu)變化作為切入點(diǎn)來探討糖尿病等代謝性疾病發(fā)生的關(guān)系，已經(jīng)成為最近國際上的一個(gè)研究熱點(diǎn)。黃連素作為一種老藥新用有效治療Ⅱ型糖尿病的藥物，從其對糖尿病轉(zhuǎn)歸影響的角度，對腸道菌群譜起到正調(diào)節(jié)抑或負(fù)調(diào)節(jié)作用還有待進(jìn)一步研究。

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