張宏旭，李穩(wěn)霞，王助新，胡大為△(.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000;.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤外二科)

VEGF和LN在大腸癌中的表達(dá)及與大腸癌預(yù)后的關(guān)系

張宏旭1，李穩(wěn)霞2，王助新2，胡大為2△
(1.承德醫(yī)學(xué)院，河北承德 067000;2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤外二科)

目的:探討大腸癌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、層黏連蛋白(LN)表達(dá)及與大腸癌預(yù)后的關(guān)系。方法:應(yīng)用SP免疫組化法檢測正常大腸黏膜、大腸腺瘤和大腸癌組織VEGF和LN的表達(dá)，并分析二者與大腸癌病理特征和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:大腸癌VEGF和LN的表達(dá)均明顯高于大腸腺瘤和正常大腸黏膜(P＜0.01，P＜0.05)。大腸癌VEGF和LN的表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、Duke’s分期和術(shù)后生存期有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05)。結(jié)論:聯(lián)合檢測VEGF和LN可作為判斷大腸癌浸潤轉(zhuǎn)移和評估預(yù)后的參考指標(biāo)。

VEGF;LN;大腸癌;免疫組化;預(yù)后

腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移是大腸癌患者的主要死亡原因，是多基因相互作用的結(jié)果[1]。腫瘤的血管生成對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展具有重要作用。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)屬血小板源性生長因子超家族，通過VEGF受體介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，促進內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移，阻止內(nèi)皮細(xì)胞凋亡和管腔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)退化，增加血管滲透性，從而在腫瘤血管生成和腫瘤生長中起重要作用[2]。層黏連蛋白(LN)是基底膜的主要組分，LN表達(dá)越低，基底膜的缺損程度越高，因此以LN的表達(dá)水平代表基底膜的缺損程度。LN可介導(dǎo)癌細(xì)胞與基底膜的黏著，在癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移方面起重要作用[3]。本研究旨在觀察大腸癌VEGF、LN的表達(dá)與大腸癌發(fā)生、浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后的關(guān)系，為判斷大腸癌的預(yù)后提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤外二科2007年5月-2010年10月收治的68例大腸癌患者手術(shù)切除的大腸癌組織，所有患者術(shù)前均未經(jīng)過放療、化療及免疫治療。同時選取承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)鏡室留取的26例大腸腺瘤組織，以及距上述大腸癌組織5-10cm的正常大腸黏膜組織18例。所有切片均經(jīng)組織病理學(xué)證實。所有標(biāo)本均用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度4μm。

1.2 S-P免疫組化染色采用S-P免疫組化法觀察VEGF和LN的表達(dá)，即用型鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人LN單克隆抗體、SP試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自美國Sigma公司。實驗按照試劑盒說明進行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核，染色時設(shè)立陰性對照(以PBS液代替一抗)和陽性對照(已知陽性切片)。

1.3 免疫組化染色結(jié)果判定

1.3.1 VEGF:以細(xì)胞漿和細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為VEGF陽性反應(yīng)。在400倍光鏡下隨機選取5個視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，計算陽性細(xì)胞百分率:＜10%為陰性(-)，10%-30%為弱陽性(+)，30%-50%為中等陽性(++)，＞50%為強陽性(+)。

1.3.2 LN:以基底膜染成棕黃色為陽性信號，以基底膜的缺損程度代表LN的表達(dá)程度。LN染色結(jié)果按基底膜缺損程度分為:呈碎片狀或完全缺失為(-)，明顯間斷、區(qū)域缺失為(+)，呈不連續(xù)、不均勻的線狀結(jié)構(gòu)為(++)，基底膜呈連續(xù)線狀結(jié)構(gòu)為(+++)。以(-)和(+)為基底膜明顯缺損，即LN低表達(dá);以(++)和(+++)代表基底膜的非明顯缺損，即LN高表達(dá)。

1.4 臨床隨訪對68例大腸癌術(shù)后患者通過電話、書信及下鄉(xiāng)調(diào)查等方式進行隨訪，隨訪68例，隨訪率100%，生存期＜5年36例、＞5年32例。

1.5 統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，行卡方檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同大腸組織VEGF和LN的表達(dá)情況大腸癌VEGF和LN的陽性表達(dá)率明顯高于正常大腸黏膜和大腸腺瘤(P＜0.01，P＜0.05);大腸腺瘤VEGF和LN的陽性表達(dá)率明顯高于正常大腸黏膜(P＜0.01，P＜0.05)。見表1。

表1 不同大腸組織VEGF和LN的表達(dá)情況

2.2 VEGF和LN與大腸癌病理特征的關(guān)系大腸癌VEGF和LN的表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、Duke’s分期和術(shù)后生存期有關(guān)(P＜0.01，P＜0.05)。見表2。

表2 VEGF和LN表達(dá)與大腸癌病理特征的關(guān)系

3 討論

VEGF屬血小板源性生長因子超家族，是腫瘤血管生成的重要因子。腫瘤血管的生成與大腸癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。LN是一種糖蛋白，是基底膜的主要成分，基底膜是腫瘤發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的天然屏障[4]。LN首先介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與基底膜黏附，然后腫瘤細(xì)胞釋放一系列蛋白水解酶，破壞基底膜的完整性，從而實現(xiàn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[5]。本研究發(fā)現(xiàn)，大腸癌組織VEGF、LN的表達(dá)明顯高于大腸腺瘤和正常大腸黏膜，并且與大腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、Duke’s分期有關(guān)，這與胡大為等的報道一致[6]。本研究結(jié)果顯示，LN低表達(dá)的大腸癌患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且其分化程度較LN高表達(dá)的患者低、Duke’s分期較LN高表達(dá)的患者高，原因可能是低分化的大腸癌細(xì)胞更易破壞基底膜，從而使腫瘤細(xì)胞更易通過腫瘤天然屏障—基底膜轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)以及增加局部浸潤的深度，進而導(dǎo)致Duke’s分期升高。因此認(rèn)為，VEGF和LN可作為反映大腸癌生物學(xué)行為的重要指標(biāo)。

大腸癌的主要死因是術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。本研究通過隨訪發(fā)現(xiàn)，生存期＜5年的大腸癌患者VEGF、LN陽性表達(dá)率均明顯高于生存期≤5年的患者，說明VEGF及LN高表達(dá)患者更易發(fā)生術(shù)后轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。因此，聯(lián)合檢測VEGF和LN可作為評估大腸癌患者預(yù)后的指標(biāo)。

[1]張汝一，甄運寰，霍新凱，等.hTERT CD44v6在大腸癌中的表達(dá)及意義[J].中國腫瘤臨床，2009，37(12):681-684.

[2]Rmali KA, Puntis MC, Jiang WG. Tumour-associated angiogenesis in human colorectal cancer[J].Colorectal Cis, 2007, 9(1):3-14.

[3]李穩(wěn)霞，胡大為，敖亞洲，等.LN、CD44v6在大腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2009，26(2):125-127.

[4]Engbring JA, Kleinman KH.The basement membrane matrix in malignancy[J].Pathol, 2003, 200(4): 465-470.

[5]Wu XZ, Chen D, Xie GR. Extracellular matrix remodeling in epatocellular carcinoma: Effects of soil on seed? [J]. Medical Hypotheses, 2006, 66(6): 1115-1120.

[6]胡大為，李穩(wěn)霞，王助新，等.VEGF、MVD和LN與大腸癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].腫瘤防治研究，2012，39(4):432-434.

VEGF AND LN EXPRESSION IN COLORECTAL CANCER AND THEIR RELATIONSHIPS WITH COLORECTAL CANCER PROGNOSIS

ZHANG Hong-xu, LI Wen-xia, WANG Zhu-xin, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the vascular endothelial growth factor (VEGF) and laminin (LN) expression in colorectal cancer and their relationships with colorectal cancer prognosis.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of VEGF and LN in normal colorectal mucosa, colorectal adenoma and colorectal cancer.Results:The expression of VEGF and LN in colorectal cancer was all obviously higher than normal colorectal mucosa and colorectal adenoma (P＜0.01, P＜0.05). The expression of VEGF and LN in colorectal cancer all was associated with lymphatic metastasis, differentiated degree and Duke’s stage (P＜0.01, P＜0.05).Conclusions:Joint detection of VEGF and LN can be acted as reference index for judging colorectal cancer metastasis and evaluating prognosis.

Vascular endothelial growth factor; Laminin; Colorectal cancer; Prognosis

R735.3

A

1004-6879(2013)04-0281-03

2012-12-05)

△ 通訊作者