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        金水保肝靈顆粒的提取工藝研究

        2013-03-02 07:27:29嚴(yán)金柱
        關(guān)鍵詞:金水保肝芍藥

        嚴(yán)金柱

        (廣東省英德市人民醫(yī)院,英德513000)

        金水保肝靈顆粒的提取工藝研究

        嚴(yán)金柱

        (廣東省英德市人民醫(yī)院,英德513000)

        目的優(yōu)選金水保肝靈顆粒的最佳提取工藝。方法采用單因素試驗和正交試驗設(shè)計,以芍藥苷的含量和總固物為指標(biāo),考察提取次數(shù)、提取時間、浸泡時間和料液比的影響,優(yōu)選最佳提取工藝。結(jié)果金水保肝靈顆粒最佳提取工藝為藥材提取2次,第一次加12倍量水,煎煮1.5小時,第二次加水10倍量,煎煮1.0小時。結(jié)論優(yōu)選的提取工藝方法可行、工藝穩(wěn)定、重復(fù)性好。

        金水保肝靈顆粒;提取工藝;正交試驗;芍藥苷

        金水保肝靈顆粒為我院開發(fā)的保肝益肝中藥新品種,由白芍、金銀花、水牛角等藥味組成,具有清熱涼血,祛濕解毒,行氣舒肝的功效,用于治療慢性肝炎和脂肪肝。本方原為湯劑,但是湯劑由于煎煮和攜帶不便,故將此方開發(fā)成顆粒劑。為了提高有效成分的提取率,保證藥效,本試驗采用單因素和正交試驗考察影響藥材有效成分提取率的因素,優(yōu)選金水保肝靈顆粒的最佳提取工藝。

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器Agilent 1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司);Sartorius BD211D十萬分之一電子天平(德國塞多利斯);密理博超純水器(Milli-Q advantage);KQ5200B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。

        1.2 試藥芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號為110736-201203);白芍、金銀花、水牛角等藥材均購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠;甲醇、乙腈為色譜純,其他試劑均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 芍藥苷含量測定[1-2]

        2.1.1 色譜條件色譜柱:Zorbax Eclipse XDB-C18柱(4.6×150mm,10μm);流動相:乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(15:85);檢測波長:230nm;流速:1mL/min;柱溫:35℃。

        2.1.2 對照品溶液的制備精密稱取以五氧化二磷為干燥劑減壓干燥24h的芍藥苷對照品10mg置50mL容量瓶中,加水使溶解并稀釋至刻度,精密吸取5mL,置25mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得(每1mL含芍藥苷28μg)。

        2.1.3 供試品溶液的制備精密吸取樣品溶液10mL,加于聚酰胺柱(30~60目,3g)上,用水洗脫,準(zhǔn)確收集洗脫液50mL,搖勻,精密吸取5mL,置50mL量瓶中,加水至刻度,搖勻,即得。

        2.1.5 陰性樣品溶液的制備稱取除白芍外的藥材加10倍量水,煎煮2次,1.5h/次,藥液過濾,合并濾液,濃縮并定容至500mL,取10mL濃縮液,自供試品溶液的制備項下“取樣品溶液10mL”起同法操作,制得陰性樣品溶液。

        2.1.5 測定法吸取上述對照品、供試品及陰性對照溶液各10μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖,結(jié)果顯示,芍藥苷在此色譜條件下能與其他組分達(dá)到很好的基線分離,陰性樣品在芍藥苷峰處無假性峰,陰性無干擾。

        2.1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密量取芍藥苷對照品溶液(28μg/m L)2,4,8,12,16,20μL進(jìn)樣,記錄色譜圖,測定其峰面積,并以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸,得回歸方程:Y=1863.1X+14.6387,r=0.9998。結(jié)果表明:在0.056~0.560μg范圍內(nèi),芍藥苷峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。

        2.1.7 樣品含量測定精密吸取各正交實驗供試品溶液各10μL進(jìn)樣,記錄色譜圖,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中芍藥苷的含量。

        2.2總固體物的測定精密吸取各樣品濃縮液10mL,至己恒重的蒸發(fā)皿中,水浴蒸干,照干燥失重法測定,計算干膏得率,公式如下:

        干膏得率(%)=W×V×100% W為10mL濃縮液中干浸膏重量,V為定容體積,Wt為藥材重量。

        2.3 提取次數(shù)的考察稱取1/5處方量的藥材3份,分別考察加熱回流提取1次,2次,3次,每次加水10倍量,提取1.0h,濾過,合并濾液,濃縮定容至500mL,測定干膏得率和芍藥苷提取率,結(jié)果見表1。

        表1 提取次數(shù)的考察(%)

        由結(jié)果可知,隨著提取次數(shù)的增加,芍藥苷的提取率和干膏得率都呈增加態(tài)勢,提取2次和提取1次相比,芍藥苷的提取率和干膏得率都呈顯著性增加,而提取3次和提取2次相比,增加并不明顯,考慮到節(jié)約工時和效益最大化,確定以提取2次為宜。

        2.4 正交試驗煎煮時間、浸泡時間和溶媒用量為3項影響提取的重要因素,各取3水平,進(jìn)行L9(34)正交試驗,篩選最佳工藝條件。芍藥苷為方中水溶性成分之一,該成分的浸出效果代表了方中水溶性成分的浸出情況,且其含量測定有成熟方法,故選其為評價指標(biāo),權(quán)重系數(shù)定為0.6。同時總固體物的浸出多少可以作為大類。

        成分間接控制的一個指標(biāo),所以選擇其作為評價指標(biāo)之一,權(quán)重系數(shù)定為0.4。

        表2 因素水平表

        表3 正交試驗結(jié)果表(%)

        綜合評分=(60/最大芍藥苷提取率)×芍藥苷提取率+(40/最大得膏率)×得膏率

        通過對正交試驗所得結(jié)果作直觀分析和方差分析,以判斷各因素對提取效果的影響程度,篩選出在該試驗條件下最優(yōu)的提取條件。方差分析結(jié)果見表4。

        表4 方差分析結(jié)果表

        由直觀分析可知,影響提取效果的因素順序為:加水量>提取時間>浸潤時間,由此得出的最佳工藝組合為A2B1C2。經(jīng)過方差分析,發(fā)現(xiàn)因素浸泡時間項下的離均差平方和比空白項的離均差平方和還要小,可以認(rèn)為該列的離均差平方和主要是由試驗誤差引起的。為了提高分析精度,把它和空白項合并在誤差離均差平方和中一起作為試驗誤差,重新進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,加水量對提取結(jié)果具有顯著性影響,提取時間對實驗結(jié)果無顯著性影響。綜合考慮到各方面因素,最后確立的提取工藝為A2B1C2,即藥材提取2次,第一次加12倍量水,煎煮1.5小時,第二次加水10倍量,煎煮1.0小時。

        2.5 驗證實驗為確定該工藝的優(yōu)劣和穩(wěn)定性,據(jù)所篩選的最佳條件,驗證3批,結(jié)果見表5。由表可知,驗證試驗結(jié)果與正交試驗優(yōu)選結(jié)果吻合,說明正交試驗選出的工藝條件合理,工藝條件穩(wěn)定可行。

        表5 工藝驗證實驗 (%)

        3 討論

        金水保肝靈顆粒是臨床驗方,原處方在臨床應(yīng)用上以湯劑內(nèi)服,臨床療效較好,并且方中各味中藥的主要有效成分為水溶性故確定以水為溶劑進(jìn)行提取。為保證實驗結(jié)果的重復(fù)性,考慮目前生產(chǎn)中大多采用多功能提取罐,確定以水為溶媒回流進(jìn)行提取。

        本試驗采用單因素試驗和正交試驗法,以君藥的有效成分芍藥苷的轉(zhuǎn)移率為評價指標(biāo),考察了金水保肝靈顆粒提取工藝中各因素的影響,確定了金水保肝靈顆粒的最佳提取工藝。所確定的提取工藝合理可行、工藝穩(wěn)定、重復(fù)性好,可有效提取金水保肝靈顆粒的有效成分。

        [1]余之煥,周全.高效液相色譜法測定四金通合劑中芍藥苷和黃芩苷的含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2010,(8):710-711.

        [2]任江劍,陳斌龍,俞旭平,等.不同白芍藥材中芍藥苷含量比較研究[J].中國現(xiàn)代中藥,2010,(7):495-496.

        Optimum Extraction of Jinshui Baoganling Granul

        Yan Jinzhu

        (People's Hospital of Yingde City,Guangdong province,Yingde 513000,China)

        ObjectiveTo optimize the extraction process of Jinshui Baoganlinggranule.MethodsUsing the single factor experiment and orthogonal experiment,with the content of paeoniflorin and total solids as indicators of extracting,we observed factors such as extraction times,extraction time,soaking time and solid-liquid ratio,that effect the extraction,optimize the extraction technology.ResultsThe optimum extraction technology for Jinshui Baoganlinggranul was:the extraction times of the herbs was 2,and first with 12 times amount of water,boiling 1.5 hours,second time with 10 times amount of water,boiling 1 hour.ConclusionThe optimum extraction technology was feasible,stable andgood repeatability.

        Jinshui Baoganlinggranul;Extraction process;Orthogonal experiment;Paeoniflorin

        10.3969/j.issn.1672-2779.2013.11.098

        1672-2779(2013)-11-0149-02

        ??張文娟

        2013-05-15)

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