柴江平劉治中劉仁平葛海生王曉飛

（1中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院，北京100053；2中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所，北京100700；3中國醫(yī)學科學院藥物研究所／北京協(xié)和醫(yī)院，北京100050；4中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所，北京102613）

柴辛鼻敏康膠囊的抗炎免疫作用

柴江平1劉治中2劉仁平3葛海生4王曉飛4

（1中國中醫(yī)科學院廣安門醫(yī)院，北京100053；2中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所，北京100700；3中國醫(yī)學科學院藥物研究所／北京協(xié)和醫(yī)院，北京100050；4中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所，北京102613）

目的觀察柴辛鼻敏康對變應性鼻炎治療的抗炎免疫調節(jié)作用。方法采用小鼠巴豆油致耳腫脹實驗觀察抗急性炎癥，利用腹腔肥大細胞觀察藥物對肥大細胞脫顆粒的抑制作用，利用DNFB致敏的小鼠觀察藥物抗遲發(fā)型變態(tài)反應作用，灌服飽和濃度的藥物觀察藥物的安全性。結果柴辛鼻敏康對小鼠耳巴豆油致腫脹抑制活性為16.4%，對肥大細胞脫顆粒的抑制率為43.1%，顯著降低DNFB誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應所致的耳腫脹，且在飽和濃度11.1g／kg下未見明顯毒副作用。結論柴辛鼻敏康膠囊對過敏性因素引起的速發(fā)型和遲發(fā)型過敏反應均有很好的抑制作用，免疫調節(jié)活性突出。

變應性鼻炎，柴辛鼻敏康膠囊，抗炎，免疫調節(jié)

過敏性鼻炎（Allergicrhinetis，AR），是一種吸入外界變應原而導致鼻黏膜發(fā)生以超敏反應為主的非感染炎癥性疾病。流行病學調查顯示：該病世界范圍內的平均發(fā)病率在10%～20%之間，且能夠間接增加支氣管哮喘、鼻竇炎、中耳炎、變應性皮炎等發(fā)病機會［1］。目前，國內外對本病尚無特效治療藥物，主要采用抗組胺藥、減充血藥、抗膽堿藥、MC穩(wěn)定劑和糖皮質激素等5類藥物單獨或聯(lián)合交替使用。這些藥物雖可在短時間內緩解癥狀，但不能從根本上改善患者的過敏體質及中和變應原，致使病情“反跳”，反復發(fā)作長期遷延不愈。鼻癢、噴嚏、流清涕、鼻塞是AR的主要臨床癥狀，屬中醫(yī)鼻鼽、鼽噴、鼽嚏、鼽水、鼽、嚏等范疇［2］，臨床中醫(yī)治療多以疏風解表通竅的方藥為主，但治療效果并不十分滿意。柴辛鼻敏康膠囊是由柴胡、細辛、川芎等多味中藥加工而成的中藥膠囊制劑，臨床用于過敏性鼻炎，療效顯著［3］。

1 資料與方法

1.1 動物實驗采用KM雄性小鼠（17～20g）60只，SPF級，購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，合格證：SCXK-（軍）2007-004）；ICR雄性小鼠（17～19g）50只，SPF級，購自維通利華實驗動物中心，合格證：SCXK-（京）2006-0009；SD大鼠（220g～250g）5只，SPF級，購自軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心，合格證：SCXK-（軍）2007-004）。

1.2 藥物及試劑柴辛鼻敏康（BMK）為自制藥品，使用時將柴辛鼻敏康逐步加入0.25%CMC（羧甲基纖維素鈉）溶液配成所需濃度。千柏鼻炎片為廣州奇星藥業(yè)產品，地塞米松由四川迪康科技藥業(yè)股份有限公司生產。

1.3 方法

1.3.1 柴辛鼻敏康抗巴豆油致耳腫脹實驗選用KM雄性小鼠（17～19g），隨機分為對照組、BMK組2組、千柏鼻炎片組2組和地塞米松（DEX）組，每組10只，口服灌胃給藥，BMK組劑量為7.5g／kg、10g／kg，陽性對照藥千柏鼻炎片組選用5g／kg、10g／kg兩個劑量，DEX組劑量為0.5mg／kg，對照組僅灌以蒸餾水，連續(xù)給藥5天。末次給藥1小時后，小鼠右耳兩面涂抹2%巴豆油50μl，4小時后處死動物。剪下左右耳廓，用直徑8mm的打孔器取下耳片，稱重，以左右耳片重量之差值指示

耳腫脹程度。以對照組均數(shù)作為標準，按公式：（對照組腫脹程度-藥物治療耳腫脹程度）／對照組腫脹程度，計算各藥物組對小鼠耳腫脹的抑制率（百分比計）。

1.3.2 柴辛鼻敏康抑制肥大細胞脫顆粒實驗取體重220～250g的雄性大鼠，斷頭處死后，以冷PBS液沖洗腹腔，離心1500轉10分鐘，收集懸液離心后，以冷PBS液重懸，進行細胞計數(shù)，并配成2×107cell／ml的懸液。在小管中分別加入肥大細胞懸液45μl，同時加入待測藥物或空白溶劑5μl，（BMK設1mg／ml，0.75mg／ml，0.5mg／ml高、中、低3個劑量，千柏鼻炎片終濃度為1mg／ml、0.75mg／ml作為陽性藥），加入化合物48／80 2μl，37℃震蕩溫育3min，取出冰上放置。滴于載有0.25%中性紅乙醇溶液的載玻片上，顯微鏡下觀察計數(shù)100個肥大細胞中脫顆粒的細胞數(shù)，每管計數(shù)2次，取均值。按下列公式計算出脫顆粒肥大細胞百分率及藥物抑制率。正常的肥大細胞邊緣光滑，核不著色，胞內淺棕色顆粒均勻。脫顆粒的肥大細胞顯示腫脹和形態(tài)異常，胞膜破裂，顆粒外排。

脫顆粒肥大細胞（%）=脫顆粒肥大細胞／肥大細胞總數(shù)×100%

藥物抑制率（%）=（對照組脫顆粒率-藥物組脫顆粒率）／對照組脫顆粒率×100%

1.3.3 柴辛鼻敏康抗遲發(fā)型變態(tài)反應實驗選用ICR雄性小鼠（17～19g），小鼠隨機分為對照組、致敏組、BMK組、千柏鼻炎片組和地塞米松（DEX）組，每組10只，小鼠腹部去毛，面積約3×3cm2大小，均勻涂抹1%DNFB溶液50μl致敏，次日強化一次。小鼠自致敏當同起每日口服灌胃給藥一次，BMK劑量為10g／kg，陽性藥選用千柏鼻炎片劑量為10g／kg，地塞米松組劑量為0.5mg／kg，對照組僅灌以蒸餾水，連續(xù)給藥6天。于致敏第5天后，各組小鼠左耳（兩面）均勻涂抹1% 2，4二硝基氟苯（DNFB）溶液10μ1進行攻擊。24小時后處死動物，剪下雙耳，用直徑為8mm的不銹鋼銃子取下左右耳片，分別稱重，以左右耳片重量之差作為腫脹程度。同時取小鼠胸腺及脾臟稱重，分別以小鼠每10g體重的脾重（mg）和胸腺重（mg）作為脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)［4］。

1.3.4 柴辛鼻敏康的最大耐受劑量觀察柴辛鼻敏康1g，逐步加入0.25%CMC（羧甲基纖維素鈉）溶液2、1、0.5、0.5、0.5ml配成最大體積CMC的飽和溶液，最終濃度為0.22g／ml。選用KM雄性小鼠（20±0.1）g，隨機分組，每組10只，于檢疫馴化期結束日測定體重，口服給藥1次，藥物濃度為0.22g／ml，給藥1ml，連續(xù)觀察2周內小鼠的自主活動次數(shù)。給藥當天，在給藥后的30分鐘、60分鐘、90分鐘、2小時進行觀察，如無明顯異常癥狀，當天即停止觀察；如發(fā)現(xiàn)有明顯異常，應繼續(xù)觀察，并在異常癥狀消失后再繼續(xù)觀察30分鐘，但不超過6個小時。并且在給藥后第1～14天的每天同一時刻進行1次觀察。主要進行臨床癥狀觀察和存活率計算。動物死亡后做尸檢，觀察各臟器變化。

2 結果

2.1 柴辛鼻敏康對巴豆油致耳腫脹的影響以7.5g／kg劑量，連續(xù)灌服5次給藥，鼻敏康對小鼠耳巴豆油致腫脹抑制活性為16.4%（與對照組比較P=0.086），雖未達到顯著差異的程度也不及地塞米松的抑制活性，但優(yōu)于陽性藥千柏鼻炎片的抑制活性。

表1 柴辛鼻敏康對巴豆油致耳腫脹的影響（n，%）

2.2 柴辛鼻敏康對腹腔肥大細胞脫顆粒抑制作用在體外1mg／ml柴辛鼻敏康的脫顆粒肥大細胞百分率明顯減少，藥物抑制率為43.1%，明顯高于0.5mg／kg和0.75mg／kg，且也明顯優(yōu)于千柏鼻炎片，具有比較明顯的脫顆粒抑制活性。

表2 柴辛鼻敏康對腹腔肥大細胞脫顆粒抑制率（n，%）

2.3 柴辛鼻敏康抗遲發(fā)型變態(tài)反應實驗連續(xù)口服10g／kg柴辛鼻敏康6次，對小鼠DNFB誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應引起的腫脹程度顯著降低（與致敏組比較P＜0.01），抑制活性為55.8%，且優(yōu)于千柏鼻炎片和地塞米松，但柴辛鼻敏康對DNFB誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的無顯著影響。

表3 柴辛鼻敏康對DNFB誘導小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應的影響（n，%）

2.4 柴辛鼻敏康的最大耐受劑量柴辛鼻敏康在藥物最大劑量為11.1g／kg的濃度下各組給藥小鼠未見明顯毒副作用。動物處死后，肉眼觀察各臟器無明顯異常。

3 討論

肥大細胞脫顆粒是機體的一種防御反應，也是速發(fā)型變態(tài)反應（Ⅰ型超敏反應）和炎癥等病理反應的基礎。

肥大細胞受到抗原攻擊、脫顆粒，通過釋放組胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細胞趨化因子等炎性介質，導致血管通透性增強、炎性細胞浸潤，引起鼻黏膜充血、炎性細胞浸潤、呼吸道平滑肌收縮等過敏性免疫病理反應。肥大細胞脫顆粒產生的多種炎性介質和膜磷脂代謝過程中產生的代謝產物是過敏性鼻炎病理生理反應過程和鼻黏膜病理改變的中心環(huán)節(jié)，因此細胞脫顆粒的百分率反映了肥大細胞過敏反應的程度［5］。柴辛鼻敏康膠囊可明顯抑制腹腔肥大細胞的脫顆粒反應，控制炎癥的發(fā)展。小鼠巴豆油耳炎是經典的急性炎癥模型，致炎小鼠耳部充血、血管通透性增加、滲出增多、前列腺素分泌增加，現(xiàn)已被廣泛地應用于抗炎藥物篩選。柴辛鼻敏康可明顯抑制巴豆結合其對巴豆油所致的耳腫脹，說明該藥對急性過敏性炎癥有很好的抑制作用。

遲發(fā)型變態(tài)反應的組織損傷機制是由特異性致敏T細胞所介導，后者與特異性抗原結合而被激活，分裂并釋放出多種淋巴因子，導致反應局部組織發(fā)生以單個核細胞浸潤為主的炎癥反應和組織壞死。DNFB所致遲發(fā)型變態(tài)反應是反映藥物對T細胞免疫功能影響的標志之一，通過小鼠致敏反應的產生，以耳腫脹程度、脾指數(shù)、胸腺指數(shù)來反映對細胞免疫功能的影響［4］。柴辛鼻敏康膠囊對DNFB所致的小鼠DTH反應的耳腫脹抑制作用突出，使耳腫脹顯著減輕，表明其具有明顯抗遲發(fā)型過敏反應的作用。

以上表明，柴辛鼻敏康膠囊對過敏性因素引起的速發(fā)型和遲發(fā)型過敏反應均有很好的抑制作用，免疫調節(jié)活性突出，對于過敏性鼻炎的治療具有一定的開發(fā)及研究意義，其作用機理值得進一步深入研究。

［1］周羽，崔英，彭順林.變應性鼻炎的中西醫(yī)結合治療進展［J］．北方藥學，2011，8（2）：59-61．

［2］楊清華，黃建軍．鼻鼽的古代文獻研究［J］．中醫(yī)藥信息，2005，22（1）：4．

［3］柴江平，王曉飛，葛海生，等．柴辛鼻敏康膠囊質量標準的研究［J］．中國中醫(yī)基礎醫(yī)學雜志，2011，17（6）：676-677．

［4］李儀奎．中藥藥理實驗方法上海［M］．上海：上海科學技術出版社，1994：300-304．

［5］陳吉力，賴新生，唐純志，等．穴位敷貼對過敏性鼻炎小鼠腹腔肥大細胞脫顆粒影響的實驗研究［J］．針灸雜志，2007，26（12）：42-45．

Anti-inflammatory and Immune Actions of Chaixinbiminkang Capsule

Chai Jiangping Liu Zhizhong Liu Renping GE Haisheng Wang Xiaofei

（1.Institute for D rug Control of People's Armed Police Forces，Beijing 102613，China；2.Institute of Materia Medica，Chinese Academy of Medical Sciences&Peking Union Medical College，Beijing，100050，China；3.Guang'anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

ObjectiveTo observe the anti-inflmmatory and immune effects of Chaixinbiminkang capsule．MethodsSwelling earflaps ofmice induced by croton oil was used to identify anti-inflammatory effect，themast cell degranulation and delayed type hypersensitivity induced by DNFB-inmice were used to observe immune regulation，fed saturated concentration of Chaixinbiminkang capsule observe the safety of the drug．ResultsChaixinbiminkang capsule had 16.4%inhibitory activity on swelling earflaps ofmice induced by croton oil，inhibition rate ofmast cell degranulation was 43.1%，significantly reduce the ear swelling by DNFB-induced delayed type hypersensitivity inmice，and no side effects was observed in the saturated concentration of 11.1g／kg.Conclusion Chaixinbiminkang capsule has significant inhibitory activity on immediate and delayed-type hypersensitivity caused by allergic factors，and prominent immunomodulatory activity．

Allergicrhinetis；Chaixinbiminkang capsule；Anti-inflammatory；Immune regulation

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.11.096

1672-2779（2013）-11-0145-03

??張文娟

2013-05-27）