馬 娜

（云南省普洱市動物疫病預防控制中心，普洱 665000）

疫病監(jiān)測的樣品采集及處理技術(shù)

馬 娜

（云南省普洱市動物疫病預防控制中心，普洱 665000）

動物傳染病的發(fā)生以混合感染和非典型感染居多，增加了臨床診斷難度，因此實驗室診斷至關重要，而整個動物的送檢又存在諸多不便，采集合適的血樣或病料既可滿足診斷需要，又便于運輸和防止疫情擴散。當懷疑動物發(fā)生傳染病時，除根據(jù)臨床表現(xiàn)和病理剖檢進行確診外，有些傳染病還需及時采集血樣或病料送獸醫(yī)化驗室進行細菌學化驗，以便了解和掌握動物疫病的動態(tài)，為防范動物疫病的發(fā)生提供強有力的措施。筆者通過多年來對獸醫(yī)實驗室工作的認識了解，深深體會到采集動物樣品進行獸醫(yī)臨床診斷是動物免疫抗體監(jiān)測和疫病監(jiān)測工作中的重要內(nèi)容。本文介紹了樣品采集、處理、送檢等技術(shù)。

1 采樣準備

在采血前應備好保溫箱或保溫瓶、平皿、指形管、自封袋、膠布、封口膜、封條、冰袋、鑷子、剪刀、酒精（75%）、酒精棉球、干棉球、口罩、乳膠手套、防護服、防護帽、一次性注射器（采血針）和注射器、保定棍、繩子若干、記號筆、采樣記錄單及相關表格等，還要準備采集后的用具等消毒、清洗用的消毒液及容器等用品。

2 動物血樣采集方法

根據(jù)動物種類、所需血樣或血清的數(shù)量確定采血部位、器械及采血量。禽類采翅靜脈、豬采前腔靜脈或耳靜脈、牛采頸靜脈或耳靜脈、羊采頸靜脈；禽類用5 ml，一次性醫(yī)用注射器，豬、牛、羊用10～20 ml，一次性醫(yī)用注射器；禽類采血量不得少于2 ml，豬、牛、羊不得少于5 ml。

2.1 動物耳靜脈采血法

2.1.1 耳靜脈采血條件 豬與兔常采用耳靜脈采血。一般在早上或午后進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25℃～28℃，冬季l5℃～20℃為宜。豬血液以無菌采取10 ml血液置于滅菌試管，析出血清供血清學檢查。供血常規(guī)檢查的血液加入3.8%檸檬酸鈉1 ml置于滅菌試管輕搖混合。

2.1.2 操作步驟 將豬、兔站立或橫臥保定，或用保定器具保定；耳靜脈局部常規(guī)消毒處理，助手用力在耳根捏壓靜脈近心端或用膠帶在耳根部結(jié)扎，或用酒精反復涂擦耳靜脈，使血管怒張。術(shù)者左手平拉豬耳并使部位稍高，右手持連續(xù)針頭的采血器，沿靜脈管使針頭與皮膚呈30°～45°角沿血管刺入，隨即輕抽針芯，如見回血即為已刺入血管，進而壓低采血器，再順血管向內(nèi)送入1 cm，然后去除捏壓血管的手指或膠帶，左手將采血器與耳一起固定，右手緩緩地將血液抽出。采血完畢，以酒精棉球按壓針部并拔出針頭。黑色皮膚豬耳靜脈看不清，可用手電筒在耳、腹面照射利于采血。

2.2 動物頸靜脈采血法

2.2.1 頸靜脈采血 常用于牛、羊、馬、驢等大家畜，采血最好是空腹，在早上（放牧前進行）。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25℃～28℃，冬季15℃～20℃為宜。

2.2.2 保定 使動物頭部稍前伸并稍偏向?qū)?cè)，對頸靜脈局部進行剪毛、消毒，看清頸靜脈后，采血者用左手拇指（或食指與中指）在采血部位稍下方（近心端）壓迫靜脈血管，使之充盈、怒張，右手持采血針頭，沿頸靜脈溝與皮膚呈45°角，迅速刺入皮膚及血管內(nèi)，如見回血，即證明已刺入，使針頭后端靠近皮膚，以減小其間的角度，近似平行地將針頭再伸入血管內(nèi)1～2 cm。放開壓迫脈管的左手，收集血液。采完后，以干棉球壓迫局部并拔出針頭，再以5%碘酊進行局部消毒。采血完畢，做好止血工作，即用獸醫(yī)脫脂棉球壓迫采血部位止血，防止血流過多。

2.3 動物心臟采血法

心臟采血常用于家兔、禽類等個體比較小的動物，采血時間最好是喂料前（早上或下午）進行。采血場所有充足的光線；室溫夏季最好在25℃～28℃，冬季15℃～20℃為宜。

2.3.1 家兔 確定心臟的生理部位。家兔的心臟部位約在胸前由下向上數(shù)第3與第4肋骨間。選擇用手觸摸心臟搏動最強的部位，去毛消毒。將稍微后拉栓塞的注射器針頭由劍狀軟骨左側(cè)呈30℃～45°刺入心臟，當家兔略有顫動時，表明針頭已穿入心臟，然后輕輕地抽取，如有回血，表明已插入心腔內(nèi)，即可抽血；如無回血，可將針頭退回一些，重新插入心腔內(nèi)，若有回血，則順心臟壓力緩慢抽取所需血量。

2.3.2 家禽 分為雛雞和成年禽的心臟采血。①雛雞心臟采血法，左手抓雞，右手手持采血針，平行頸椎從胸腔前口插入，回抽見有血回血時，即把針芯向外拉使血液流入采血針。②成年家禽心臟采血法，成年家禽采血可側(cè)臥或仰臥保定：a.側(cè)臥保定采血，助手抓住禽兩翅及兩腿，右側(cè)臥保定，在觸及心搏動明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處消毒，垂直或稍向前方刺入2～3 cm，回抽見有回血時，即把針芯向外拉使血液流入采血針。b.仰臥保定采血，胸骨朝上，用手指壓離嗉囊，露出胸前口，用裝有長針頭的注射器，將針頭沿其鎖骨俯角刺入，順著體中線方向水平穿行，直到刺入心臟。但必須注意切忌將針頭刺入肺臟和抽血過快。

2.4 翅內(nèi)靜脈采血法

在采集家禽少量血液時可采用翅內(nèi)靜脈采血法，術(shù)者左手撥開左側(cè)翅內(nèi)側(cè)靜脈上的羽毛使靜脈暴露，消毒后右手持采血針與皮膚呈45°角方向進針，持針時手要穩(wěn)，進針不宜過深，如刺穿血管，則很快引起皮下血腫，導致采血失敗。一旦刺入皮膚，即可回抽活塞，使管內(nèi)形成負壓，這樣能夠準確判定是否進入血管，采血完畢后壓迫止血30s后放回雞舍。采血完畢及時壓迫采血處止血，避免形成淤血塊。

采血完畢，做好血液樣品的編號和填寫好采樣表。

2.5 血清分離與保存

2.5.1 分離血清 ①采集的血液樣品可保存于1次性5 ml真空管中，在常溫下靜置1～2 h可自然析出血清。也可將裝入血液的真空管置于37℃溫箱中1 h，待其析出血清。分離好的血清加蓋編號，造冊登記。②利用離心機分離血清，首先將采集的血液樣品置室溫30 min，待血液凝固后2 000～3 000 r／min離心5～10 min，試管上層清液即為血清，如離心后有輕微的溶血，用牙簽將血凝塊挑出，將混有紅細胞碎片的血清再次離心，用干凈吸管收集于干燥的指型管中，貼上標簽備用，如血清溶血嚴重，應剔出樣品。

2.5.2 保存血清 合格的血清應無溶血、渾濁、變質(zhì)等現(xiàn)象。所采集分離出的血清若不能及時送檢，應冷凍或冷藏保存在2℃～8℃的冰箱中血清可保存15 d，-15℃以下血清可保存2年。

2.6 運送血清

如果血清能在24 h內(nèi)送往實驗室的，運送時把血清放在裝有冰塊且保存于4℃的保溫瓶內(nèi)送檢；如果24 h內(nèi)不能抵達或送往外地實驗室時，血清必須冷凍處理，并在低溫下運送。運送途中防止血清泄漏，密閉封裝并加冰袋運送，也不能劇烈震蕩。

3 病料采集

3.1 采集方法

3.1.1 內(nèi)臟 淋巴結(jié)、肺、肝、脾、腎等部位的采集，以1～2 cm3大小的組織塊合適，置滅菌容器中。采集動物的內(nèi)臟，如死亡動物應盡快采集，夏季不應超過2 h，冬季不超過6 h（還要視具體溫度）。采集豬的病料必須新鮮，盡可能減少污染。用于微生物學檢驗的內(nèi)臟組織塊不必太大，有1～2 cm大小即可（如有少量污染或不能保證無污染，組織塊取大些，切割后用），存放在消毒過的容器內(nèi)，若用于病理組織學檢查，則要采集病灶及臨近正常組織，并存放于10%福爾馬林溶液中（如做冷凍切片用，應將組織放在冷藏容器中，并盡快送實驗室檢測）。

3.1.2 呼吸道 用滅菌的棉拭子采集鼻腔、咽喉內(nèi)的分泌物，蘸后立即放入特定的保存液中（如滅菌肉湯、磷酸相加緩沖液等）每支拭子需加保存液5 ml。

3.1.3 皮膚 直接采集病變部位組織，如病變部位的水泡液、水泡皮。水泡性疾病要采取水泡皮并將水泡液放入50%甘油緩沖鹽水中。

3.1.4 腸內(nèi)容物 選病變明顯腸道的內(nèi)容物，用吸管吸取內(nèi)容物，放入30%甘油鹽水緩沖液保存送檢，或?qū)⒁欢斡袃?nèi)容物的腸管兩端扎緊，剪下送檢。

3.1.5 尿 用導尿管無菌取20～30 ml或在豬排尿時，用一次性塑料杯接取。

3.1.6 糞 用棉式子從直腸采集。

3.1.7 膿汁 用滅菌棉簽取樣或用注射器吸取放入滅菌試管中。

3.1.8 膽汁 燒烙膽囊表面，用滅菌注射器吸取膽汁，放入滅菌試管中。

3.2 病料送檢

3.2.1 病料容器 必須是結(jié)實嚴密，不可因容器破損污染環(huán)境。最好使用雙重容器，將盛有病料的器皿封口后置內(nèi)容器中，內(nèi)容器中襯墊廢紙。當氣候溫暖時，需加冰塊，但避免病料標本直接與冰塊接觸，以免凍結(jié)。將內(nèi)容器置外容器中，外容器內(nèi)應以廢紙等襯墊，外容器密封好。

3.2.2 病料附加說明 送檢尸體剖檢記錄、流行病學、臨床癥狀、發(fā)病后治療措施等，注明送檢目的要求，病料名稱數(shù)量。

3.2.3 速度要求 越快越好，避免病料接觸高溫和陽光，以免病料腐敗或病原體死亡。

3.3 送檢樣品記錄

送檢樣品記錄至少要有一份備案，一份隨樣品送往化驗室。記錄含有所采病料的畜禽品種、用途、年齡、發(fā)病情況、流行病學特點、采集時間、采集地點、畜主、送檢目的、病料名稱、保存液等詳細資料。