摘要：建立了高效液相色譜法測(cè)定飼料中吡啶甲酸鉻的方法，采用C18 反相柱，以乙腈和磷酸二氫鈉水溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉調(diào)至pH 8.5）（10∶90，V/V）為流動(dòng)相，263 nm處檢測(cè)。吡啶甲酸鉻在2.5～0.8 μg范圍內(nèi)色譜峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 7；加標(biāo)回收率為98.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.69%。該方法具有較高的分離率、準(zhǔn)確度、精密度和靈敏度，能對(duì)飼料中的吡啶甲酸鉻進(jìn)行準(zhǔn)確的測(cè)定，適合飼料生產(chǎn)企業(yè)使用。

關(guān)鍵詞：吡啶甲酸鉻；高效液相色譜；飼料

中圖分類號(hào)：O657.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2012）23-5467-02

Determination of Chromium Picolinate in Feed by HPLC

YANG Jie1，HUANG Jian-xiong2，YAN Fu2

（1. Institute of Agricultural Quality Standards and Testing Technology Research， Hubei Academy of Agricultural Sciences， Wuhan 430064， China； 2. Hubei Shenzhou Chemical Co.， Ltd.， Yingcheng 432405， Hubei， China）

Abstract： Analysis of chromium picolinate in feed by high efficiency liquid chromatography（HPLC） was established. Chromium picolinate was separated in C18 reversed-phase column with the mobile phase of acetonitrile and sodium dihydrogen phosphate water solution （10∶90， V/V）（pH 8.5 adjusted by 0.1 mol/L NaOH）， and detected at 263 nm. The results showed a good performance was at linear relation of chromatographic peak area and sample size when chromium picolinate was at range of 2.5～0.8 μg， correlation coefficient R2 was 0.999 7， recovery rate reached 98.3% and RSD was 0.69%. It showed a good result in separating effect， accuracy， precision and sensitivity， and provided quantitative determination of chromium picolinate in feed. The method is suitable for corporations which produce feed.

Key words： chromium picolinate； high efficiency liquid chromatography（HPLC）； feed

鉻是人和動(dòng)物必需的微量元素，鉻分為無(wú)機(jī)鉻和有機(jī)鉻。無(wú)機(jī)鉻（如硫酸鉻、三氯化鉻等）生物活性非常低，生物利用率只有0.4%～3.0%，而有機(jī)鉻的生物利用率達(dá)到10%～25%[1]。目前市場(chǎng)上有機(jī)鉻主要有吡啶甲酸鉻、酵母鉻、煙酸鉻。吡啶甲酸鉻又稱吡啶羧酸鉻，是吡啶甲酸與鉻化合物的絡(luò)合物，分子式為Cr（C6H4NO2）3，分子量為418.33，系紫紅色結(jié)晶性細(xì)小粉末，流動(dòng)性良好，常溫下穩(wěn)定，微溶于水，不溶于乙醇。其中鉻為三價(jià)鉻，可順利通過(guò)細(xì)胞膜直接作用于組織，能增強(qiáng)胰島素活性，改善人體糖代謝；促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)合成、性腺發(fā)育，提高排卵質(zhì)量、繁殖性能等效果，并且毒性甚微，使用安全，目前被認(rèn)為是人類最好的補(bǔ)鉻制劑和畜禽補(bǔ)鉻的理想添加劑，同時(shí)還是有機(jī)鉻中惟一得到美國(guó)國(guó)家安全認(rèn)可的鉻化合物[2]，主要應(yīng)用于醫(yī)藥、保健食品和飼料添加劑[3]。目前對(duì)吡啶甲酸鉻含量測(cè)定多見(jiàn)于保健食品中[4-6]，對(duì)飼料中吡啶甲酸鉻的含量測(cè)定方法則鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究對(duì)飼料中吡啶甲酸鉻用高效液相色譜法進(jìn)行研究，方法簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高，適用于飼料生產(chǎn)企業(yè)中吡啶甲酸鉻的質(zhì)量控制。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Waters高效液相色譜儀，配置1525二元高壓泵、2707自動(dòng)進(jìn)樣器、2489紫外檢測(cè)器、Breeze2色譜工作站。

吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)品為美國(guó)USP公司產(chǎn)品，純度99.9%；甲醇、乙腈均為色譜純，磷酸二氫鈉為優(yōu)級(jí)純，其余試劑均為分析純。樣品系湖北神舟化工有限公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Xbridge TM C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），檢測(cè)波長(zhǎng)263 nm，流動(dòng)相，乙腈∶0.1 mol/L磷酸二氫鈉水溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)至pH=8.5）=10∶90（V/V），流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量10 μL，分析時(shí)間20 min。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 稱取吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)品25.0 mg置于25 mL量瓶中，加甲醇充分溶解后，用pH 8.5的水溶液（用濃度為0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)）定容，搖勻，吸取該溶液3 mL移入25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

1.2.3 樣品溶液的制備 稱取樣品1.250 0 g用甲醇充分溶解后，用pH 8.6的水溶液定容到25 mL容量瓶中，超聲波提取5 min，用針頭過(guò)濾器過(guò)濾，吸取該溶液1 mL至25 mL容量瓶中，用pH 8.5的水溶液定容，搖勻，備用。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

稱取吡啶甲酸鉻標(biāo)樣適量，按“1.2.2” 項(xiàng)下配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，于200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，在263 nm處有最大吸收，故選263 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)，在該波長(zhǎng)處檢測(cè)靈敏度較高。

2.2 流動(dòng)相的選擇

對(duì)吡啶甲酸鉻進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，如采用甲醇-水流動(dòng)相體系，保留時(shí)間為2.72 min[7]，分離效果明顯不如使用乙腈-磷酸鹽緩沖溶液體系，選擇了乙腈-磷酸鹽緩沖溶液作為流動(dòng)相，在試驗(yàn)中觀察到吡啶甲酸鉻在中性條件下有離解的現(xiàn)象發(fā)生（圖1），吡啶甲酸鉻在有水的環(huán)境中可轉(zhuǎn)化為吡啶甲酸和吡啶酸鉻二聚體，考慮到很多金屬離子的絡(luò)合物需在堿性條件下才能穩(wěn)定，經(jīng)試驗(yàn)在高pH條件下樣品不再發(fā)生變化（圖2），故選定乙腈-磷酸二氫鈉水溶液（0.1 mol/L用氫氧化鈉調(diào)至pH 8.5）（10∶90，V/V）為流動(dòng)相。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

按“1.2.2”項(xiàng)配制濃度為0.08、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/mL吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液，在給定的儀器條件下進(jìn)行液相色譜分析，測(cè)得各吡啶甲酸鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液的相關(guān)峰面積。回歸方程為y=78.3x-38 300.0；相關(guān)系數(shù)（R2）為0.999 7，結(jié)果表明吡啶甲酸鉻在2.5～0.8 μg范圍內(nèi)色譜峰面積與進(jìn)樣量呈良好的線性關(guān)系。標(biāo)樣圖譜見(jiàn)圖2。保留時(shí)間為6.072 min。

2.4 精密度試驗(yàn)結(jié)果

在“1.2.1” 項(xiàng)色譜條件下，取濃度為0.1 mg/mL吡啶甲酸鉻的標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)5次進(jìn)樣，進(jìn)樣量均為10 μL，峰面積的RSD為0.69%。

2.5 加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果

將樣品分成5份，分別加入不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度做3個(gè)平行樣，平均回收率為98.3%，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 其他成分對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

取不含吡啶甲酸鉻的空白飼料樣品，按照“1.2.3”項(xiàng)處理后進(jìn)樣，結(jié)果表明飼料中其他成分對(duì)吡啶甲酸鉻的含量測(cè)定均沒(méi)有干擾（見(jiàn)圖3）。測(cè)定3批吡啶甲酸鉻飼料中吡啶甲酸鉻的含量分別為9.85%、10.03%、10.26%。

3 小結(jié)

綜上所述，用HPLC法測(cè)定飼料中吡啶甲酸鉻的含量，方法回收率高，線性關(guān)系良好，準(zhǔn)確度、精密度良好。該方法結(jié)合具體生產(chǎn)產(chǎn)品及企業(yè)儀器狀況制定而成，適用于飼料生產(chǎn)企業(yè)中吡啶甲酸鉻的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)：

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[2] 郭 亮，張敏紅.吡啶甲酸鉻的毒理學(xué)安全性研究進(jìn)展[J].飼料博覽（技術(shù)版），2008（5）：22-24.

[3] 李致寶，韋少平，夏中生，等.吡啶甲酸鉻的研究概述及其應(yīng)用進(jìn)展[J].化工技術(shù)與開(kāi)發(fā)， 2011，40（7）：11-14.

[4] 王美菡，李 敏，孫海燕，等.高效液相色譜法測(cè)定保健食品中吡啶甲酸鉻含量[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2003，13（5）：617-618.

[5] 龍軍標(biāo)，梁旭霞.高效液相色譜法測(cè)定保健食品中的吡啶甲酸鉻[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2005，31（4）：46-47.

[6] 廖一民.保健食品中吡啶甲酸鉻的高效液相色譜測(cè)定法[J].預(yù)防醫(yī)學(xué)情報(bào)，2005，21（6）：751-753.

[7] NY/T 916-2004，飼料添加劑 吡啶甲酸鉻[S].

（責(zé)任編輯 胡西洲）