摘要：對(duì)7例疑似為PCV2-PRRSV自然混合感染病豬的組織樣本采用常規(guī)HE染色和免疫組織化學(xué)SABC法染色進(jìn)行了病理學(xué)觀察及組織內(nèi)兩種病毒的檢測(cè)，并利用NIS-Elements高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)記錄觀察結(jié)果。HE染色結(jié)果顯示組織病理變化主要表現(xiàn)為增生性壞死性肺炎、壞死性淋巴結(jié)炎、卡他性腸炎、淋巴結(jié)內(nèi)包涵體形成及肝臟肝竇單核巨噬細(xì)胞增生。免疫組織化學(xué)SABC法染色結(jié)果顯示3例為PCV2-PRRSV抗原陽性，2例為PCV2抗原陽性。在自然感染狀態(tài)下，PCV2-PRRSV混合感染是比較常見的，其組織病理變化與單獨(dú)感染時(shí)區(qū)別不顯著。

關(guān)鍵詞：豬；PCV2；PRRSV；混合感染；HE；IHC

中圖分類號(hào)：S858.28；R446.6 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2012）23-5421-03

Immunohistochemical Diagnosis of the Swine Naturally Coinfected with PCV2 and PRRSV

CAI Shuang-shuang1，WANG Li2，LU Yan-yun2，SHI Lu-lin2，GU Chang-qin2，ZHANG Wan-po2，

CHENG Guo-fu2，HU Xue-ying2

（1. Hubei Three Gorges Polytechnic， Yichang 443000，Hubei，China；

2.College of Veterinary Medicine， Huazhong Agricultural University，Wuhan 430070，China）

Abstract： Pathology observation and two kinds of viruses detection in tissues were carried out on 7 swine tissue samples suspected to be natural PCV2-PRRSV coinfection. The embedded tissue was sliced continuously for HE and immunohistochemical SABC staining. The observation was recorded by using NIS-Elements high-resolution colour graphic analysis system. The histopathological changes mainly were proliferative necrotizing pneumonia， necrotic lymphadenitis， mucoenteritis， body in lymph node， and hepatic sinus mononuclear phagocyte proliferation. PCV2-PRRSV mixed infection（3 cases） and PCV2 infection（2 cases） were shown in the result of immunohistochemical SABC staining. In the natural infection， PCV2-PRRSV coinfection was more common. The histopathological changes of coinfection with separate infection had no significant difference.

Key words： swime； PCV2； PRRSV； coinfection； HE； IHC

豬圓環(huán)病毒病和豬繁殖與呼吸綜合征是嚴(yán)重阻礙養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的傳染病之一，其病原分別為豬2型圓環(huán)病毒（PCV2）和豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）。PCV2和PRRSV對(duì)養(yǎng)豬業(yè)真正的危害并不表現(xiàn)在其單獨(dú)感染時(shí)，而是由于其免疫抑制作用而導(dǎo)致的混合感染或繼發(fā)感染。在自然感染病例中，最為常見的是PCV2-PRRSV混合感染，PCV2-PRRSV混合感染引起的臨床癥狀和病理變化與其他病原體引起的呼吸系統(tǒng)疾病和免疫抑制病極為相似，很難表現(xiàn)出典型的特征[2]。僅僅根據(jù)流行病學(xué)、臨床癥狀和病理變化很難對(duì)PCV2-PRRSV混合感染作出診斷，需要結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷方法作出綜合診斷[1，2]。

該試驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)了PCV2和PRRSV在7例疑似PCV2-PRRSV自然混合感染病豬組織中的分布，并結(jié)合組織的病理變化特征對(duì)混合感染病例作出診斷，了解PCV2和PRRSV混合感染的致病特點(diǎn)，為PCV2-PRRSV自然混合感染的研究提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 組織材料 1份已知未感染PCV2和PRRSV的腸組織石蠟蠟塊，1份人工感染PCV2、1份人工感染PRRSV和1份人工PCV2-PRRSV混合感染的共4份腸組織石蠟蠟塊，以及來自于7頭疑似為PCV2-PRRSV混合感染病豬的組織石蠟蠟塊均為華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室保存。

1.1.2 試劑 抗PCV2單克隆抗體（工作濃度為1∶600）、抗PRRSV單克隆抗體（工作濃度為1∶600）均由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)何啟蓋教授惠贈(zèng)，多聚賴氨酸和即用型SABC試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

將保存的組織蠟塊作連續(xù)切片（厚4 μm），一份備作常規(guī)HE染色，一份備作免疫組化染色（SABC法），染色后光學(xué)顯微鏡觀察，應(yīng)用NIS-Elements高清晰度彩色圖文分析系統(tǒng)采集圖片，進(jìn)行組織病理學(xué)結(jié)果分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 HE染色結(jié)果

肺組織可見間質(zhì)性肺炎，肺泡壁增厚，肺泡上皮細(xì)胞增生，肺泡腔內(nèi)有壞死脫落的細(xì)胞及巨噬細(xì)胞（圖1A，B）。

淋巴結(jié)組織可見多個(gè)壞死灶，皮質(zhì)部淋巴細(xì)胞缺失，局部有成團(tuán)的中性粒細(xì)胞，小梁上有中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。淋巴小結(jié)內(nèi)可見大量的巨噬細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有圓形均質(zhì)堿性的包涵體（圖2A，B）。

腸道組織可見腸絨毛脫落，腸腺上皮細(xì)胞杯狀細(xì)胞化，黏膜血管擴(kuò)張，黏膜上皮脫落，固有膜內(nèi)有漿細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，淋巴小結(jié)增多，淋巴小結(jié)內(nèi)淋巴細(xì)胞缺失（圖3A，B）。

脾臟組織白髓內(nèi)淋巴細(xì)胞減少，可見吞噬異物的巨噬細(xì)胞。

肝臟組織肝竇明顯增寬，巨噬細(xì)胞明顯增多。

2.2 免疫組化SABC法染色結(jié)果

在7頭疑似PCV2-PRRSV混合感染病豬中，經(jīng)檢測(cè)，3頭豬的組織樣本為PCV2-PRRSV混合感染（42.86%），2頭豬的組織樣本為PCV2單獨(dú)感染（28.57%），2頭豬的組織樣本沒有檢測(cè)到病毒（28.57%），檢測(cè)到陽性信號(hào)的組織器官主要是肺、淋巴結(jié)、腸道、脾臟和肝臟。

肺組織中，PCV2強(qiáng)陽性信號(hào)出現(xiàn)在肺巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)（圖1C），支氣管黏膜上皮也可見陽性信號(hào)，有些核也被著染為黃色；PRRSV陽性信號(hào)出現(xiàn)在Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞和肺巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，可見肺泡腔內(nèi)壞死脫落的肺泡上皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi)強(qiáng)陽性信號(hào)（圖1D）。

淋巴結(jié)中，巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見PCV2強(qiáng)陽性信號(hào)的包涵體（圖2C）；PRRSV強(qiáng)陽性信號(hào)出現(xiàn)于巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)（圖2D），偶見核著染。

腸道組織中，漿細(xì)胞、腸腺杯狀細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)和黏膜上皮內(nèi)PCV2強(qiáng)陽性信號(hào)，淋巴小結(jié)內(nèi)巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)可見陽性信號(hào)（圖3C）；漿細(xì)胞、腸腺潘氏細(xì)胞和黏膜上皮內(nèi)可見PRRSV強(qiáng)陽性信號(hào)，淋巴小結(jié)巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見陽性信號(hào)（圖3D）。

脾臟組織中，脾小體淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見PCV2弱陽性信號(hào)。

肝臟組織中，肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見PCV2強(qiáng)陽性信號(hào)。

3 小結(jié)與討論

該試驗(yàn)中感染病豬的組織病理學(xué)檢查顯示出現(xiàn)了PCV2-PRRSV混合感染的組織病理變化，主要表現(xiàn)為增生性壞死性肺炎、壞死性淋巴結(jié)炎、壞死性腸炎、脾臟脾小體淋巴細(xì)胞缺失和肝臟肝竇增寬、巨噬細(xì)胞增多，并且在淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞內(nèi)有均質(zhì)堿性包涵體，這些病變是PCV2-PRRSV混合感染病例的病理變化特征[3，4]，而且在PCV2-PRRSV抗原檢測(cè)均呈陽性的病豬與PCV2抗原檢測(cè)呈陽性的病豬之間沒有明顯區(qū)別。

免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)到PCV2抗原主要出現(xiàn)在肺、淋巴結(jié)、腸道、脾臟和肝臟，但是并沒有在腎臟組織中檢測(cè)到PCV2抗原；檢測(cè)到PRRSV抗原主要出現(xiàn)在肺、淋巴結(jié)和腸道，但是在脾臟中未檢測(cè)到PRRSV抗原。該試驗(yàn)檢測(cè)到PCV2和PRRSV均在感染細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，主要的感染細(xì)胞是單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，但是不在同一個(gè)細(xì)胞內(nèi)，PCV2在淋巴結(jié)形成包涵體的巨噬細(xì)胞內(nèi)，而PRRSV出現(xiàn)在另一些巨噬細(xì)胞內(nèi)。肺組織內(nèi)，PRRSV陽性信號(hào)主要出現(xiàn)在巨噬細(xì)胞和Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。分析認(rèn)為PCV2和PRRSV侵入豬體，分別進(jìn)入不同的巨噬細(xì)胞內(nèi)定居增殖，由于大量的巨噬細(xì)胞受侵害，致使機(jī)體免疫系統(tǒng)功能下降不能形成有效的保護(hù)機(jī)制，導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制的產(chǎn)生[5-8]。

在腸道內(nèi)檢測(cè)到PCV2和PRRSV的報(bào)道早就出現(xiàn)[4，5]。該試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)PCV2分布在腸腺杯狀細(xì)胞，而PRRSV分布在腸腺潘氏細(xì)胞、上皮細(xì)胞內(nèi)，在淋巴小結(jié)不同的巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)分別檢測(cè)到PCV2和PRRSV，由此可以證實(shí)病毒經(jīng)腸道排毒，除了肺和淋巴結(jié)外，對(duì)腸道組織進(jìn)行IHC檢測(cè)也可作為確診PCV2-PRRSV混合感染的方法之一。

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（責(zé)任編輯 屠 晶）