張占東

·論著·

P-選擇素和p16基因在乳腺癌中的表達(dá)及意義

張占東

目的探討P-選擇素和p16基因在乳腺癌組織中的蛋白表達(dá)及其與侵襲轉(zhuǎn)移和TNM分期的關(guān)系。方法采用免疫組化方法(S-P法)檢測(cè)52例乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達(dá)。結(jié)果乳腺癌組織P-選擇素蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯增高，而正常乳腺組織中未見陽(yáng)性表達(dá)(P＜0.01);乳腺癌組織p16基因蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常乳腺組織(P＜0.01)。乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達(dá)均與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期有關(guān)(P＜0.05或＜0.01)。乳腺癌組織P-選擇素和p16基因蛋白表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.72，P＜0.01)。結(jié)論P(yáng)-選擇素和p16基因蛋白表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，二者表達(dá)的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)評(píng)估乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度和TNM分期可能有一定價(jià)值。

P-選擇素;p16;乳腺癌

乳腺癌是發(fā)達(dá)國(guó)家女性最常見的惡性腫瘤，國(guó)內(nèi)的發(fā)病率也呈逐年上升趨勢(shì)。傳統(tǒng)的一些預(yù)后因素如腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤大小、臨床分期以及組織學(xué)類型、分級(jí)等在判斷其預(yù)后方而雖有意義，但存在著一定的局限性。P-選擇素是一種黏附分子受體，由Johnmaton等［1］首先在激活的血小板膜上發(fā)現(xiàn)，其可介導(dǎo)癌細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞、血小板的黏附，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起重要作用。多腫瘤抑癌基因p16定位于9p21區(qū)域由三個(gè)外顯子和兩個(gè)內(nèi)含子組成編碼相對(duì)分子量16 000蛋白質(zhì)，即p16蛋白。P16蛋白的表達(dá)不但與多種惡性腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，而且可能與惡性腫瘤晚期的生物學(xué)行為及預(yù)后有關(guān)［2］。聯(lián)合檢測(cè)P-選擇素和p16在乳腺癌中的表達(dá)，國(guó)內(nèi)外罕見報(bào)道。為此我們采用免疫組化方法檢測(cè)二者在乳腺癌中的表達(dá)，并結(jié)合臨床進(jìn)行分析探討。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇于2006年10月至2011年9月在我院行乳腺癌根治術(shù)并經(jīng)病理證實(shí)的乳腺癌標(biāo)本52例，均為女性，年齡32～76歲，平均年齡54歲。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋。此外，選取同期22例正常乳腺組織作為對(duì)照組。

1.2 試劑與方法 P-選擇素和即用型兔抗人p16蛋白抗體均為美國(guó)Santa-Cruz公司產(chǎn)品。S-P試劑盒為美國(guó)Zymed公司產(chǎn)品。操作步驟按說(shuō)明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 2組P-選擇素和p16的陽(yáng)性表達(dá)比較 在乳腺癌組中P-選擇素陽(yáng)性染色率為65.4%(34/52)，對(duì)照組未見陽(yáng)性染色，2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);乳腺癌組織中p16陽(yáng)性表達(dá)率為53.8%(28/52)，對(duì)照組為81.8%(18/22)，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 乳腺癌P-選擇素與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期的關(guān)系 P-選擇素表達(dá)在乳腺癌腫瘤＞5 cm組、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期組均分別明顯高于乳腺癌腫瘤≤5 cm組、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期Ⅰ、Ⅱ期組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

表1 乳腺癌P-選擇素與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期的關(guān)系

2.3 乳腺癌p16表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期的關(guān)系 無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期Ⅰ/Ⅱ期組明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期Ⅲ/Ⅳ期組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表2 乳腺癌p16表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期的關(guān)系

2.4 乳腺癌P-選擇素和p16表達(dá)的相關(guān)性 乳腺癌P-選擇素和p16表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=－0.72，P＜0.01)。

3 討論

P-選擇素是選擇素家族的重要成員，Johnmaton等［1］首次報(bào)道了胰腺癌腫瘤細(xì)胞株有P-選擇素的表達(dá)。其在腫瘤轉(zhuǎn)移中的具有雙重作用。一方面，直接介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。Pottratz等［3］研究表明，內(nèi)皮細(xì)胞P-選擇素的表達(dá)的提高可以增強(qiáng)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞與激活的內(nèi)皮細(xì)胞之間的黏附。另一方面，P-選擇素與整合素協(xié)同介導(dǎo)激活的血小板與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合。Borsig等［4］的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，血小板通過(guò)P-選擇素與某些人的癌細(xì)胞系發(fā)生黏附，在體內(nèi)抑制這種相互作用會(huì)減弱腫瘤的轉(zhuǎn)移。本研究顯示，乳腺癌P-選擇素表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織，提示其在乳腺癌的發(fā)生過(guò)程中可能起重要作用。正常乳腺組織未見P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)，這可能由于在正常條件下內(nèi)皮細(xì)胞未受刺激和激活。還有，P-選擇素表達(dá)在乳腺癌腫瘤＞5 cm組、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組和TNM分期Ⅲ、Ⅳ期組均分別明顯高于其對(duì)應(yīng)組，提示高表達(dá)的P-選擇素通過(guò)介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞、血小板與癌細(xì)胞黏附，參與了乳腺癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程，亦說(shuō)明P-選擇素陽(yáng)性表達(dá)的乳腺癌易于浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移?？傊?，P-選擇素與乳腺癌的原發(fā)腫物大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。

P16作為一種多種腫瘤抑制基因是1992年Traris在研究黑色素瘤的細(xì)胞周期依賴激酶(CDKs)和相應(yīng)周期蛋白結(jié)合的蛋白時(shí)發(fā)現(xiàn)的p16蛋白可直接與細(xì)胞周期素D(cyclinD)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合細(xì)胞周期素依賴激酶CDK4和CDK6的結(jié)合，阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，抑制細(xì)胞無(wú)限增殖，防止癌變［5－7］。因此，當(dāng)p16基因缺失、突變而失活時(shí)使p16蛋白表達(dá)缺失時(shí)抑制腫瘤增生的能力降低，導(dǎo)致細(xì)胞異常生長(zhǎng)。其表達(dá)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移潛能密切負(fù)相關(guān)，突變后其抑制腫瘤的能力喪失。本研究發(fā)現(xiàn)其乳腺癌組織表達(dá)陽(yáng)性率明顯低于正常乳腺組織，提示p16抑制基因的喪失或突變使其抑制腫瘤的能力喪失，可引起細(xì)胞癌變的發(fā)生。本研究還發(fā)現(xiàn)p16表達(dá)陽(yáng)性率在乳腺癌有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和TNM分期III、IV期組均分別明顯低于其對(duì)應(yīng)組，表明抑癌基因p16與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)。

通過(guò)本研究還顯示乳腺癌P-選擇素和p16表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(r=－0.72，P＜0.01)，我們認(rèn)為P-選擇素可能影響乳腺癌組織中抑癌基因p16的表達(dá)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，而抑癌基因p16也可能通過(guò)影響乳腺癌組織中P-選擇素的表達(dá)抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，P-選擇素高表達(dá)和抑癌基因p16低表達(dá)共同提示乳腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的可能性，二者的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)評(píng)估乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移程度和TNM分期可能有一定價(jià)值。

1 Johnmaton GI，Cook RG，McEver PR，et al.Cloning of GMP-140，a granulemembrane protein of platelets and endothelium sequence of similamity to proteins involved in cell adhesion an infammation.Cdll，1989，56: 1033-1044.

2 Mc Carty QJ，Mousa SA，Bray PF，et al.Immobilized platelets support human colon carcinoma cell tethering，rolling and firm adhesion under dynamic flow conditions.Blood，2000，96:1789-1797.

3 Pottratz ST，Hall TD，Scribbner WM，et al.P-selectin mediated attachment of small cell lung carcinoma to endothelium cells.Am J Physiol，1996，217:1918-1923.

4 Borsig L，Wong R，F(xiàn)eramisco J，et al.Heparin and cancer revisited:mechanistic connections involving platelets，P-selectin，carcinoma mucins and tumor metastasis.Proc Natl Acad Sci USA，2001，98:3352-3357.

5 郭洪斌，張培，王斌，等.p16蛋白、CerbB 2在乳腺癌中表達(dá)的意義.中國(guó)老年學(xué)雜志，2005，25:718-719.

6 曾谷清，周秀田，程愛蘭，等.p16蛋白和VEGF在乳腺癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性研究.腫瘤防治研究，2004，31:257-260.

7 衛(wèi)生部醫(yī)政司.中國(guó)常見惡性腫瘤診治規(guī)范(乳腺癌).北京:北京醫(yī)科大學(xué)與中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版，1991.53-56.

R 737.9

A

1002－7386(2012)17－2582－02

10.3969/j.issn.1002－7386.2012.17.008

063000 河北省唐山市婦幼保健院普外科

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn) P-選擇素表達(dá)以整張切片中陽(yáng)性(棕黃色)染色血管≥5條為陽(yáng)性。p16以腫瘤細(xì)胞漿或細(xì)胞膜呈棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。根據(jù)腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性數(shù)進(jìn)行判斷，采用高倍視野隨機(jī)記數(shù)500個(gè)腫瘤細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞所占比例，分為4級(jí)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰(－);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占6%～25%為輕度陽(yáng)性(+);陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占26%～50%為中度陽(yáng)性(++);≥51%以上為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2012－04－17)