張艷 張曄 周酈楠

卵巢早衰(POF)是卵巢功能提前減退，是指女性在40歲以前出現(xiàn)閉經(jīng)，以閉經(jīng)，不育，雌激素缺乏以及促性腺激素水平升高為特征的一種疾?。?，2］。在人群中發(fā)病率為1% ～3%，在繼發(fā)性閉經(jīng)中占2% ～10%，診斷以至少半年或半年以上閉經(jīng)多次發(fā)生，排除其他原因?yàn)榛A(chǔ)，卵巢早衰是婦科分泌領(lǐng)域的常見?。?］。卵巢早衰(POF)病因多種多樣，具體發(fā)病機(jī)制尚不清楚，而且沒有有效的治療方法。本實(shí)驗(yàn)選擇誘導(dǎo)卵巢早衰的藥物為雷公藤多苷片，有多個(gè)研究表明，雷公藤可誘導(dǎo)卵巢早衰的發(fā)生與發(fā)展［4］。雷公藤的生理活性強(qiáng)，具有顯著的抗炎、抗腫瘤、抑制生育及免疫調(diào)節(jié)等作用，目前已被廣泛應(yīng)用于腎炎、腫瘤、皮膚病、哮喘、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、子宮內(nèi)膜異位癥等多種疾病的治療，特別是在治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面有顯著的療效。因此，為了尋找病因和有效的治療方法，本文對雷公藤誘導(dǎo)的卵巢早衰大鼠模型的腎上腺球狀帶結(jié)構(gòu)的變化作一觀察研究。并觀察了醛固酮的變化。

1 資料與方法

1.1 材料與方法

1.1.1 藥物 雷公藤多苷片(生產(chǎn)廠家:上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，片劑，0.5 mg/片)，實(shí)驗(yàn)時(shí)用生理鹽水配成2 mg/ml濃度的溶液。醛固酮放射免疫試劑盒(購于北京北方免疫試劑研究所)。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物及方法 體重230～300 g的雌性SD大鼠30只，正常飼養(yǎng)兩周，隨機(jī)分為A與B兩組，每組15只，A組為對照組，胃飼相同劑量生理鹽水9 d，1次/d。B組為模型組，按照0.6 mg/100 mg(體重)的劑量給藥9 d，胃飼1次/d。給藥完畢后24 h以內(nèi)各組動物用1%戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔麻醉后開胸，經(jīng)左心室插管至升主動脈，剪開右心耳，用含1%肝素鈉生理鹽水500 ml快速沖洗后，繼用0.1 m磷酸鹽緩沖液(PBS，pH=7.4)配置的固定液(含4%多聚甲醛)灌流固定，取出實(shí)驗(yàn)動物腎上腺和卵巢，置于上述固定液中后固定2 h，移入20%蔗糖磷酸鹽緩沖液，4℃過夜，組織塊沉底，經(jīng)水包埋，恒冷箱切片，片厚20 μm。

1.1.3 HE染色步驟 ①蘇木素染液6 min，流水沖洗30 s。②1%鹽酸乙醇3 s反藍(lán)，流水沖洗30 s。③依紅染液3 min，流水沖洗30 s。④梯度酒精脫水，二甲苯透明。⑤封片保存。

1.2 觀察指標(biāo) 雌二醇(E2)含量的變化。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行檢驗(yàn)。血清醛固酮含量的變化。嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行檢驗(yàn)。卵巢HE染色，觀察卵巢形態(tài)的變化。腎上腺HE染色，觀察球狀帶的變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本文采用SPSS 10.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用t檢驗(yàn)方法。

2 結(jié)果

2.1 卵巢HE染色結(jié)果 可見模型組與對照組相比，大鼠卵巢萎縮，卵泡數(shù)目減少，卵泡閉鎖增多，間質(zhì)增生明顯，卵巢間質(zhì)纖維化，卵巢功能明顯受損，表明造模成功。

2.2 腎上腺HE染色結(jié)果 經(jīng)過冰凍切片，HE染色觀察，腎上的球狀帶細(xì)胞發(fā)生明顯的變化，可見腎上腺皮質(zhì)球狀帶明顯代償性增厚，細(xì)胞變大跡象。

2.3 對血清雌二醇及醛固酮含量變化的影響，見表1。

表1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較(±s)

表1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較(±s)

注:雌二醇模型組與對照組差異:*P＜0.05;醛固酮模型組與對照組比較差異:＊＊P＜0.01.

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由數(shù)據(jù)可知，模型組與對照組比較，雌二醇有顯著的下降，說明造模成功。

與對照組比較，模型組醛固酮的含量明顯上升，并且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 各組大鼠血清中雌二醇、醛固酮含量的比較

3 討論

醛固酮是由腎上腺皮質(zhì)球狀帶細(xì)胞合成和分泌的一種鹽皮質(zhì)素。主要作用于腎臟遠(yuǎn)曲小管和腎皮質(zhì)集合管，增加對鈉離子的重吸收和促進(jìn)鉀離子的排泄，從而保留水分的作用。它與下丘腦分泌的抗利尿激素相互協(xié)調(diào)，共同維持體內(nèi)水和電解質(zhì)的平衡。醛固酮的分泌，是通過腎素-血管緊張素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)細(xì)胞外液容量下降時(shí)，刺激腎小球旁細(xì)胞分泌腎素，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)、醛固酮分泌增加，使腎臟重吸收鈉增加，進(jìn)而引起水重吸收增加。本實(shí)驗(yàn)表明，雷公藤誘導(dǎo)的卵巢早衰大鼠模型血清中的醛固酮有明顯升高的跡象，并且分泌醛固酮的腎上腺球狀帶代償性增厚。卵巢早衰的病因有很多種，其病理表現(xiàn)復(fù)雜，病因和發(fā)病機(jī)制尚不清楚，表明早衰的發(fā)生與發(fā)展可能與血清中醛固酮的升高存在一定的關(guān)系，具體的機(jī)制尚不清楚，有待于進(jìn)一步探討研究。有研究表明雷公藤可促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)區(qū)的功能，可促進(jìn)束裝帶的增生［5］，但是沒有報(bào)道說明對于球狀帶的影響，本人認(rèn)為醛固酮的增高與腎上腺球狀帶的增厚也可能與雷公藤的作用有關(guān)，從而導(dǎo)致卵巢早衰的發(fā)生。

由雷公藤誘導(dǎo)的卵巢早衰大鼠腎上腺結(jié)構(gòu)發(fā)生了明顯的變化，經(jīng)過HE染色觀察發(fā)現(xiàn)腎上腺球狀帶明顯增厚，細(xì)胞代償性增生，醛固酮的分泌升高。說明可能醛固酮的升高與早衰的發(fā)生發(fā)展存在一定的關(guān)系，可能促進(jìn)早衰的進(jìn)展，有待于進(jìn)一步探討早衰發(fā)生發(fā)展的原因及醛固酮在早衰發(fā)生當(dāng)中的作用。

［1］徐苓，宋亦軍.卵巢早衰的臨床表現(xiàn)和診斷標(biāo)準(zhǔn).實(shí)用婦產(chǎn)科雜志，2003，19(4):195-196.

［2］李涌弦，于佳鑫.實(shí)用婦科內(nèi)分泌學(xué).上海:上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997:63-69.

［3］楊秀坤，楊秀燕，馬良坤.卵巢早衰的病因分類及發(fā)生機(jī)理.中國婦幼保健，2004，19(1):92-95.

［4］李琰珉，任春娥，等.藥物性卵巢早衰動物模型的制備.濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，2(4):292-295.

［5］胡大偉，劉沛霖.雷公藤與強(qiáng)的松藥理作用的互補(bǔ)性.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1997，17(2):94.