鄒冬良

（湖南師大附屬湘東醫(yī)院，湖南 醴陵 412200）

MRSA在臨床上對頭孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類、氨基糖苷類都會產(chǎn)生耐藥作用, 所以萬古霉素的選擇面臨著巨大的壓力。在這種嚴峻的情況下, 僅僅依賴萬古霉素將會受到很大的限制，因此就應(yīng)該拓寬思路對其他有效的藥物予以合理的選擇。在這種形勢下采用聯(lián)合用藥的方法也就自然而然的成為治療MRSA感染的一個有效選擇[1]。聯(lián)合應(yīng)用抗菌藥物能夠?qū)λ胁≡哪退幮缘男纬捎枰苑乐?。所以想要找到一個個臨床毒副作用小且臨床療效好的聯(lián)合治療方案是存在可能性的[2]。為了找到聯(lián)合用藥的有效治療方案，對左氧沙星與磷霉素聯(lián)用對金黃色葡萄球菌體外殺菌活性進行探究分析，對左氧沙星單用以及與磷霉素聯(lián)用的殺菌效果進行了解，我們進行了本次研究?，F(xiàn)將調(diào)查結(jié)果匯報如下。

1 資料與方法

1.1 抗菌藥物

左氧沙星（寧波市天衡制藥有限公司 國藥準(zhǔn)字H20060508）、磷霉素（山西仟源制藥有限公司 國家準(zhǔn)字H20053768）、6-磷酸葡萄糖（Sigma）（上海佳和生物科技有限公司 國家準(zhǔn)字H20064216），經(jīng)中國藥品生物制品檢定所檢查合格。

1.2 菌株及培養(yǎng)基

受試菌包括3株MSSAATCC29213、臨床分離菌SA99、SARN450并且選取1株臨床分離的MRSAB6177，都經(jīng)過VETEK重新鑒定,其培養(yǎng)基主要是MH瓊脂和MH肉湯。

1.3 實驗儀器

TYJ-2A菌落計數(shù)器（上海宏匯電器廠），比濁儀（法國生物梅里埃），YKH-II 型液體快速混合器（江西醫(yī)療器械廠），90mm培養(yǎng)平皿（浙江拱東醫(yī)療器械有限公司）。

1.4 最低抑菌濃度（MIC）的測定

采取瓊脂平板二倍稀釋的方法, 在進行磷霉素的MIC的測定時依據(jù)CLSI的要求加入25mg/mL的6-磷酸-葡萄糖。

1.5 單藥殺菌結(jié)果

1.5.1 抗菌藥物的配制

按照MIC的實驗結(jié)果,把2種受試的藥物的儲備液分別稀釋成1/2MIC、2MIC、8MIC、16MIC、32MIC、128MIC等6個濃度系列。

1.5.2 菌落計數(shù)

分別用不同濃度的左氧沙星或者是磷霉素1.5mL加到無菌的小試管中，而后將事先制備好的菌液1.5毫升也加到試管里，這個時候培養(yǎng)物種的抗菌藥物濃度分別是1/ 4MIC、1MIC、4MIC、8MIC、16MIC、64MIC, 菌液終濃度為105CFU/mL，并做空白試驗。在不同時間分別吸取100微升的培養(yǎng)物，將不同稀釋濃度的培養(yǎng)物均勻地涂于MH瓊脂的平板上，在35℃的條件下孵育18h后對菌落進行計數(shù)。并予以統(tǒng)計。

1.6 聯(lián)合用藥的殺菌結(jié)果

1.6.1 抗菌藥物的配制

按照MIC的實驗結(jié)果以及預(yù)實驗的結(jié)果，把左氧沙星和磷霉素都稀釋到1/2MIC、1MIC。

1.6.2 菌落計數(shù)

各取左氧沙星和磷霉素1MIC的濃度1.5mL，并且與1.5mL的菌液進行混合。此時抗菌藥物濃度就變成了原先的一半，而后在取左氧沙星和磷霉素1MIC濃度0.75微升同1.5毫升的菌液進行混合，這樣，抗菌藥物的濃度就變?yōu)樵瓉淼?/4，此時左氧沙星和磷霉素的濃度就都是1/4MIC，與此同時還要進行無藥空白試驗。之后操作與藥物單用一樣。并且進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計。

2 結(jié) 果

2.1 左氧沙星與磷霉素對菌析的MIC

左氧沙星對選取的3株MSSAATCC29213、SA99、RN450的MIC分別是0.25、0.125、0.125 μg/mL，磷霉素的MIC分別為1、1、1μg/mL。而左氧沙星與磷霉素聯(lián)用對MRSAB6177的MIC則是16、8μg/mL。見表1。

表1 左氧沙星和磷霉素對選取菌的MIC（μg/mL）

2.2 聯(lián)合應(yīng)用判定

在進行聯(lián)合用藥后的一天之內(nèi)3株MSSA的菌落數(shù)要比單用一種相對敏感的藥物的菌落數(shù)要減少許多，也就是說兩藥在聯(lián)合應(yīng)用后表現(xiàn)出了明顯的協(xié)同作用。見表2。

表2 聯(lián)合用藥效應(yīng)評定

3 討 論

自從第1例甲氧西林耐藥的金黃色葡萄球菌在1961年在英國出現(xiàn)以來，MRSA在全世界迅速的蔓延開來。根據(jù)2006年中國CHINET細菌耐藥性監(jiān)測的一些數(shù)據(jù)表明金黃色葡萄球菌中平均MRSA的檢出率大概在56.7%左右，耐藥的形勢不是十分的樂觀。

磷霉素是一種化學(xué)合成的良好的廣譜抗菌藥，由于磷霉素具有優(yōu)越的藥代動力學(xué)、藥效學(xué)的特性，因此也就具有了良好的臨床的實用價值。磷霉素與其它抑菌藥物進行合用后可以對因敏感菌所引起的重癥感染有較好的治愈作用[3]。經(jīng)過臨床上的一些相關(guān)研究表明雖然磷霉素對難治性的感染有較好的抗菌作用，但是其主要的藥理作用機制還不是十分的明確。

實驗研究表明，3株MSSA對左氧沙星以及磷霉素都很敏感，左氧沙星則顯示出對濃度的依賴性，而且還具有較強的殺菌作用，但磷霉素卻不會對濃度產(chǎn)生依賴[4]。通過數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，左氧沙星和磷霉素聯(lián)合應(yīng)用后在亞以菌濃度上表現(xiàn)出顯著的協(xié)同作用[5]。

左氧沙星和磷霉素都是臨床上經(jīng)常應(yīng)用到的藥物，他們的副作用較小，患者對其的依從性較強，盡管在臨床上并不推薦用氟諾喹酮類藥物對MRSA感染進行治療，但是本次研究表明，兩藥聯(lián)用具有較好的協(xié)同殺菌作用，在臨床上選用兩藥聯(lián)合的方法對那些對萬古霉素反應(yīng)不良的危癥患者進行治療，也許會對感染的有效控制予以幫助，但是依舊需要進一步的相關(guān)實驗進行進一步的證實。

[1]汪復(fù). 2006 年中國CH INET 細菌耐藥性監(jiān)測[J].中國感染與化療雜志,2008,1(8): 1-9.

[2]連家建,唐青云.磷霉素可減輕其他藥物引起的不良反應(yīng)[J].國外醫(yī)藥抗生素分冊,2002,23(1):38.

[3]Xiong YQ,Po tel G,Caillon J,et al.Comparat iveefficacies of cipr oflo xacin and peflo xacin alo ne or incombination w ith fosfomy cin in ex per imental endocarp ditis induced by mult idr ug- susceptible and- resistantPs eudomonas aer ug inosa [J].Antimicrob Agents Chemother,1995,35(2):496-499.

[4]王睿.臨床抗感染藥物治療學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2006:134-136.

[5]Leonard SN,Kaatz GW,Rucker LR,et al.Synerg ybetw een g emiflo xacin and trimetho prim/sulfamethoxazole against communityasso ciated methicillinresistant Stap hy lococcus aureus [J].J Antimicrob Chemother,2008,62(6):1305-1310.