羅光偉 徐 瑋 吳 霜 胡小平 萬 軍 孫潔民張 念 徐 清 楊 碩 毛莉娜 肖 宏△

（1.湖北省武漢市中西醫(yī)結合醫(yī)院，湖北 武漢 430022；2.湖北中醫(yī)藥大學，湖北 武漢 430065；3.云南中醫(yī)學院，云南 昆明 650500）

哮喘是由嗜酸性粒細胞、肥大細胞和淋巴細胞等多種炎性細胞參與的氣道慢性炎癥，其對各種激發(fā)因子具有高反應性并誘發(fā)氣道重塑。哮喘發(fā)病機理相當復雜，現(xiàn)知的主要致病機理為氣道持續(xù)炎性病變，氣道高反應性，氣道重塑及神經(jīng)因素的調(diào)節(jié)。神經(jīng)因素的調(diào)節(jié)中以SP陽性纖維增生作用較顯著。本實驗用卵蛋白致敏誘發(fā)豚鼠哮喘模型，選用臨床治療哮喘療效較好的通肺平哮湯，應用免疫組化方法觀察SP陽性纖維在肺內(nèi)的表達，以期為通肺平哮湯療效提供新依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物 健康雄性Hartley系豚鼠40只，體質(zhì)量約300 g，由華中科技大學同濟醫(yī)學院提供。

1.2 藥物與試劑 通肺平哮湯：葶藶子20 g，大棗10 g，僵蠶15 g，蟬蛻20 g，姜黃10 g，大黃10 g。中藥飲片均由我院中藥房提供，浸泡2 h，煎煮1 h（以水煮沸起始計時），濾出藥汁；再加水將中藥飲片煎煮1 h，濾出藥汁；將兩次藥汁混合，濃縮至20 mL，質(zhì)量濃度為3.3 g/L的水劑，存放于4℃冰箱備用。地塞米松（湖北天藥藥業(yè)股份有限公司，批準文號：國藥準字H42020019）。卵蛋白粉，購自湖州珍露生物制品有限公司

1.3 分組與造模 將豚鼠隨機分為空白對照組、模型組、地塞米松組、通肺平哮湯組，每組10只。除空白對照組外，其余各組按照國際通用的方法，以經(jīng)典的卵蛋白致敏和攻擊加以復制，第1日用10%卵蛋白溶液1.0 mL腹腔注射致敏，第15日開始以1%卵蛋白溶液霧化吸入20 min，連續(xù)14 d，每日1次，直至出現(xiàn)煩躁、嗆咳、呼吸頻率加快、幅度加大、腹肌緊張等癥狀提示造模成功。

1.4 給藥方法 第30日開始空白對照組及模型組給予2 mL蒸餾水灌胃，地塞米松組按0.01 g/kg，通肺平哮湯組按20 g/kg灌胃相應藥物，每日1次，連續(xù)7 d。

1.5 標本采集與檢測 給藥7 d后處死動物，剪取右下肺，用4%多聚甲醛固定，石蠟切片，按常規(guī)HE染色，免疫組化染色。彩色圖像分析儀測量單位面積內(nèi)SP陽性纖維條數(shù)，電鏡下肺組織病理檢測結果。

1.6 統(tǒng)計學處理 應用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學分析。資料以（）表示，作方差齊性檢驗（levene 檢驗），方差分析（F 檢驗），多個均數(shù)間的兩兩比較用q檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 光鏡下肺組織病理檢查結果 與空白對照組相比，模型組可見氣道壁及肺間質(zhì)中嗜酸性粒細胞大量浸潤，氣道平滑肌層增厚，管腔狹窄，毛細血管內(nèi)皮腫脹。見圖1。

圖1 光鏡下肺組織病理圖

2.2 電鏡下肺組織病理檢查結果 與空白對照組相比，模型組氣道壁可見較多的SP陽性纖維（圖2），SP陽性纖維分布密集，常呈束狀走行。其中以細支氣管及終末細支氣管、呼吸部陽性纖維增加有顯著意義。通肺平哮湯組和地塞米松組SP陽性纖維則較模型組顯著減少。見表1。

圖2 模型組電鏡下肺組織病理圖

表1 兩組豚鼠肺內(nèi)不同部位SP陽性纖維條數(shù)（分，）

表1 兩組豚鼠肺內(nèi)不同部位SP陽性纖維條數(shù)（分，）

與空白對照組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05。

組 別 呼吸部 肺內(nèi)血管空白對照組 0.38±0.21 1.90±0.25 n 10支氣管 細支氣管1.84±0.30 2.43±0.32模型組 1.80±0.43* 2.59±0.31 10 2.98±0.31* 4.23±0.23*通肺平哮湯組 10 2.34±0.33*△ 3.48±0.22*△ 1.16±0.52*△ 2.22±0.28△地塞米松組 10 2.25±0.24*△ 3.37±0.28*△ 0.96±0.18*△ 2.15±0.27△

3 討 論

哮喘屬于中醫(yī)學“哮證”范疇，其病機為宿痰內(nèi)伏于肺，復加外感、飲食、體虛病后等因素，以致痰阻氣道、肺氣上逆所致。久病遷延，正氣漸虛，正虛邪實，肺脾腎三臟受損，臟器功能失調(diào)，瘀血阻絡而致病情反復難愈［1］。通肺平哮湯由葶藶子、大棗、僵蠶、蟬衣、姜黃、大黃組成。方中葶藶子辛、苦，大寒，歸肺、膀胱經(jīng)，功能瀉肺平喘，行水消腫；姜黃與大黃共奏活血之功；大黃瀉下通便，降肺氣亦止喘；蟬蛻和僵蠶疏表祛風解痙，大棗健脾益氣，助脾運化痰飲，后天之本得以充養(yǎng)，先天之本亦得以滋養(yǎng)。全方共奏行氣活血，通肺平喘之功，以達標本同治，扶正祛邪的目的。

SP是速激肽家族的主要成員，是肺內(nèi)非腎上腺素能非膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的主要興奮性遞質(zhì)之一。含SP的神經(jīng)纖維廣泛分布于肺內(nèi)支氣管的各級分支，偶爾伸達肺泡壁，分布于氣道上皮內(nèi)、上皮基底面、氣道平滑肌層、黏膜下層腺體周圍及血管周圍；具有調(diào)節(jié)小氣道管壁收縮的功能［2］，而小氣道是哮喘、慢性阻塞性肺病的主要病變部位。SP的釋放能使氣道平滑肌收縮，血管擴張及管壁的通透性增加，并能激活炎性細胞，這些均與哮喘的臨床病理特征相一致［3］。本實驗中在模型組豚鼠肺內(nèi)觀察到小氣道SP陽性纖維的數(shù)量明顯高于空白對照組，肺泡周圍也可見大量的SP陽性纖維，提示SP陽性纖維的增多與哮喘發(fā)病可能密切相關。通肺平哮湯組SP陽性纖維則較模型組顯著減少，表明通肺平哮湯不但具有抑制氣道炎癥反應的作用，且加速SP降解，抑制神經(jīng)源性炎癥而發(fā)揮治療哮喘的作用。

［1］張徐.固本平喘湯治療支氣管哮喘44例［J］.河南中醫(yī)，2004，24（11）：51.

［2］O'Connor TM，O'Connell JO，Brien DI，et al.The role of substance P in inflammatory disease［J］.Journal of Cellular Physiology，2004，201：167-180.

［3］呂正梅，賈友蘇，賈雪梅，等.哮喘大鼠肺內(nèi)SP陽性纖維的變化和Fos蛋白表達的形態(tài)學研究［J］.神經(jīng)解剖學雜志，2005，21（5）：526-530.