黃瀏姣 指導(dǎo) 陳邦國(guó) 洪亞群 鄭慧慧

（湖北中醫(yī)藥大學(xué)，湖北 武漢 430065）

腦血管病是臨床常見病，其發(fā)病率高，預(yù)后較差。由于缺血性腦血管疾病的發(fā)病率遠(yuǎn)高于腦出血，且局灶性腦缺血是腦血管病致殘、致死的主要原因，因此，尋找適當(dāng)有效的治療措施是針灸臨床與實(shí)驗(yàn)研究的重要課題之一。本研究通過(guò)制備大鼠大腦中動(dòng)脈局灶性腦缺血（MCAO）模型觀察電針對(duì)大鼠腦組織神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響，探討電針療法能否有效地減輕缺血腦組織的病理性損傷，為臨床有效治療腦血管病提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康成年SD大鼠80只（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，清潔級(jí)），雌雄不拘，體質(zhì)量（200±20）g。

1.2 儀器與試劑 LH202H型韓氏儀，南京濟(jì)生醫(yī)療科技公司；H-600型透射電鏡，日本日立公司；LKB-V型超薄切片機(jī)，瑞典BROMMA公司。醋酸雙氧鈾，北京恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司；枸櫞酸鉛，北京恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司。

1.3 分組 隨機(jī)分為正常對(duì)照組（大鼠不予處理，正常給水給食），假手術(shù)組（大鼠麻醉切開頸部皮膚后，僅分離頸總動(dòng)脈及膈下動(dòng)脈至翼腭動(dòng)脈，不插線栓）、模型組（分為缺血再灌注6、24、48 h 3個(gè)亞組）、 電針組（分為缺血再灌注6、24、48 h 3個(gè)亞組），共8組，每組10只。

1.4 模型制備 參照Longa［1］線栓法加以改進(jìn)。取直徑0.24 mm魚線6 cm，一端迅速浸入加熱融化的石蠟中并提起，形成光滑球面，在距離球面18 mm處用白色涂改液作一標(biāo)記，酒精清潔后置于生理鹽水中備用。造模前24 h，大鼠禁食不禁水，以10%水合氯醛300 mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，備皮，消毒，從頸部正中切開一個(gè)小切口，暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈，分離出頸內(nèi)動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，在頸總動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端和近心端及頸外動(dòng)脈處掛線備用。用微動(dòng)脈夾暫時(shí)夾閉頸內(nèi)動(dòng)脈，然后近心端結(jié)扎頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，然后在距離頸總動(dòng)脈分叉部4 mm處剪一小口，將線栓插入到頸內(nèi)動(dòng)脈，用繞在頸總動(dòng)脈的遠(yuǎn)心端的細(xì)線輕輕系牢栓線。用眼科鑷輕推栓線，從血管分叉部開始計(jì)算距離，當(dāng)插入深度達(dá)到18 mm時(shí)，緊緊系牢頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端的細(xì)線。栓塞30 min后緩慢抽出線栓，使腦缺血區(qū)血流再灌。縫合切口，單籠飼養(yǎng)觀察。只有神經(jīng)功能障礙在1級(jí)以上的大鼠才能保留。共有60只大鼠進(jìn)行造模，造模成功54只。

1.5 穴位定位與電針?lè)椒?電針組大鼠取百會(huì)、水溝、后三里（足三里）穴進(jìn)行治療。穴位定位和具體針刺方法參照《常用動(dòng)物腧穴圖譜》［2］標(biāo)準(zhǔn)而定。百會(huì)穴位于頭頂骨正中，針刺方法是向后平刺2 mm；水溝穴位于唇裂正中、鼻尖下1 mm處，針刺方法是向上斜刺2 mm；后三里（足三里）穴位于后肢膝關(guān)節(jié)外下方當(dāng)腓骨小頭下約5 mm處，針刺方法是直刺7 mm。采用LH202H型韓氏儀，其中一組電極負(fù)極連接百會(huì)穴，正極連接一側(cè)足三里穴，另一組電極負(fù)極連接水溝穴，正極連接另一側(cè)足三里穴，疏密波，頻率2～15 Hz，電流強(qiáng)度1 mA，每次30 min。電針各組缺血再灌注2 h后行第1次電針刺激，對(duì)再灌注12 h以上各組，每隔12 h再電針刺激1次。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) 以10%水合氯醛足量麻醉大鼠，斷頭取腦，迅速在冰盤上剝離腦膜，分離右側(cè)大腦皮層，切取缺血灶區(qū)域大腦組織塊（即右側(cè)頂顳葉部），放入已預(yù)冷的2.5%戊二醛溶液中固定，4℃冰箱待用。將固定后的腦組織塊取出，2.5%戊二醛緩沖液前固定2 h，然后用0.1 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，再用1%鋨酸固定2 h，0.1 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，梯度酒精脫水（50%，70%，80%，95%，100%）兩次，每次 15 min；純丙酮脫水 2次，每次 15 min，再用 1∶1的環(huán)氧樹脂 EPON812∶丙酮混合液浸透30 min，純包埋液浸透1 h，純包埋液固化37℃ 24 h后60℃48 h。采用瑞典BROMMA公司產(chǎn)LKB-V型超薄切片機(jī)切片，0.1%醋酸雙氧鈾+3%枸櫞酸鉛雙重染色。透射電鏡下觀察切片上并攝片。

2 結(jié) 果

正常對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞核比較大、呈圓形或橢圓形，核膜清晰、完整，胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器豐富，結(jié)構(gòu)清晰。模型組可見胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞器明顯減少，胞漿水樣變性，線粒體腫脹、基質(zhì)電子密度增高，高爾基體肥大，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，細(xì)胞核成裸核，水腫明顯，核周有空泡，核膜不規(guī)則，染色質(zhì)呈團(tuán)塊狀凝集。電針組病理變化較輕，核質(zhì)電子密度較低，常染色質(zhì)多，呈細(xì)顆粒狀，分布較均勻，核仁呈網(wǎng)狀，線粒體呈橢圓形或桿狀，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)散在分布。見圖1。

3 討 論

針灸療法治療中風(fēng)病臨床療效滿意，近年研究證實(shí)針灸不僅擅治中風(fēng)后遺癥，且在急性期也有卓效。在缺血后立即給予電針治療能使局部腦血流顯著增加，使缺血組織局部維持有效的血供，對(duì)抗缺血引起的損傷，為神經(jīng)組織恢復(fù)功能提供機(jī)會(huì)。針刺還能夠改善腦的氧代謝和腦血流量，調(diào)節(jié)血管運(yùn)動(dòng)平衡，興奮腦動(dòng)脈壁細(xì)胞上的β受體，使血管擴(kuò)張，腦血流量增加，腦組織的含氧量和能量代謝得到改善，進(jìn)而使因腦缺血而致的腦組織損傷減輕。

有研究［3］證實(shí)，電針對(duì)局部腦缺血區(qū)腦血流有著積極的影響，可顯著增加腦血流量。據(jù)報(bào)道，腦梗死后每100 g腦組織腦血流速顯著下降（22.45±5.7）mL/min，腦血管阻力顯著升高，電針組每100 g腦組織腦血流速僅下降（6.39±3.35）mL/min。電針還可使腦梗死的側(cè)支循環(huán)開放、腦血管阻力降低、血氧和葡萄糖的供應(yīng)增加。同時(shí)電針增加局部腦血供，可促進(jìn)代謝物質(zhì)的運(yùn)輸，最終使腦梗死面積顯著減小，神經(jīng)功能得到有效的保護(hù)。

郭富強(qiáng)等［4］研究發(fā)現(xiàn)：腦出血患者6 h以內(nèi)腦組織有輕微損傷，6 h以后腦組織損傷逐漸加重，24～48 h血腫周圍組織損傷達(dá)高峰，電鏡顯示神經(jīng)元細(xì)胞核變空，染色質(zhì)聚集，線粒體腫脹，嵴變短或消失，核糖體減少，次級(jí)溶酶體增加，細(xì)胞變空，細(xì)胞膜不完整，膠質(zhì)細(xì)胞核固縮，72 h以后損傷逐漸開始好轉(zhuǎn)。

圖1 各組海馬神經(jīng)元結(jié)構(gòu)

本實(shí)驗(yàn)采用造模后6 h即開始給予電針治療，其電鏡觀察結(jié)果提示經(jīng)電針早期治療后，腦出血大鼠血腫周圍腦組織與模型組相比，得到很好的恢復(fù)，提示早期給予電針治療能促進(jìn)腦出血大鼠血腫周圍腦組織的恢復(fù)，從而能最大效應(yīng)地發(fā)揮其腦保護(hù)及康復(fù)治療的作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，及時(shí)有效的電針治療可有效阻止缺血腦組織神經(jīng)元損傷，保護(hù)腦組織，為臨床及早使用電針治療腦梗死提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］Longa EZ，Weinstein PR，Carson S，et al.Reversible middle cerebral artery，occlusion with outcraniotomy in rats［J］.Stroke，1989，20：84-90.

［2］華興邦，李辭蓉，周浩良，等.大鼠穴位圖譜的研制［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，1991，3（1）：1-3.

［3］周飛，李福鳳，程介士，等.電針對(duì)急性腦缺血大鼠局部腦血流和腦梗死體積的影響［J］.上海針灸雜志，2003，22（5）：3.

［4］郭富強(qiáng)，徐玉川，楊友松，等.腦出血患者血腫周圍組織病理及超微結(jié)構(gòu)變化的動(dòng)態(tài)觀察［J］.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志，2007，24（1）：53-55.