馮福娟，佘德松

（麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 麗水 323000）

加拿利海棗（Phoenix canariensis）原產(chǎn)于非洲西岸的加拿利島，其樹形張開呈半圓形，遠(yuǎn)觀如同撐開了的羅傘，富有熱帶風(fēng)情，是國(guó)際著名的景觀樹種。該樹種于20世紀(jì)80年代開始引入我國(guó)，現(xiàn)在長(zhǎng)江流域及以南地區(qū)廣泛應(yīng)用于園林綠化，以烘托熱帶韻味。但由于生長(zhǎng)環(huán)境的變化和管理方面的原因，許多栽種的加拿利海棗出現(xiàn)了生長(zhǎng)不良的現(xiàn)象，葉斑病就是其中普遍而且嚴(yán)重的一種現(xiàn)象。加拿利海棗葉斑病主要危害葉片，其癥狀為葉局部變淡黃至棕褐色，葉尖病斑多，形狀大小不一[1]。有些地區(qū)由于葉斑病的危害，導(dǎo)致葉片枯死，甚至植株死亡，嚴(yán)重影響綠化效果。苗期為害更重，嚴(yán)重影響了種苗的商品價(jià)格，對(duì)花農(nóng)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。為了提高加拿利海棗葉斑病的防治效果，我們開展了對(duì)加拿利海棗葉斑病病原的分離培養(yǎng)和農(nóng)藥抑菌試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 病原菌的分離培養(yǎng)

1.1.1 材料選取 采集麗水職業(yè)技術(shù)學(xué)院校園綠化帶的加拿利海棗葉斑病的新鮮病葉，帶回室內(nèi)作分離材料。

1.1.2 培養(yǎng)基配制 病菌分離培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PSA）。制作方法：將馬鈴薯洗凈去皮切塊稱取200 g，將其切成正方形小塊，放入鋁鍋中加水1 000 mL煮沸20 ～ 30 min，直至馬鈴薯酥而不爛，用紗布過濾，定容至1 000 mL，加入瓊脂18 g、蔗糖20 g，加熱并用玻璃棒不停攪拌至瓊脂完全溶化后分裝到錐形瓶中，封口包裝，高壓蒸汽滅菌后備用。

1.1.3 病原菌的分離與純化 病原菌分離采用植物組織分離法。將加拿利海棗葉斑病病葉用清水洗凈，用刀片從加拿利海棗葉斑病典型病斑的病健交界處切取5 mm×5 mm的小組織塊若干。在消毒后的超凈工作臺(tái)上無菌操作制作培養(yǎng)基平板。將病組織塊先用70%酒精浸2 ～ 3 s，再用0.1%升汞消毒1 min，然后用滅菌水沖洗3次洗凈藥液。用鑷子將消毒過的組織塊移接到平板培養(yǎng)基上，每皿放5塊呈梅花狀排列。在培養(yǎng)皿上貼上標(biāo)簽，然后倒置于26℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。菌落長(zhǎng)成后，用接種針或環(huán)挑取分離培養(yǎng)出的菌落邊緣的菌絲，轉(zhuǎn)接到試管斜面培養(yǎng)基中，置于26℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)得到純菌種。

1.1.4 病原菌的鑒定 觀察菌落菌絲特征，并將純化得到病菌制成臨時(shí)玻片標(biāo)本，置于顯微鏡下觀察鏡檢其形態(tài)，依據(jù)菌落、菌絲和孢子特征，對(duì)照有關(guān)文獻(xiàn)確定病原菌種類。

1.2 病原菌的農(nóng)藥抑菌試驗(yàn)

1.2.1 供試農(nóng)藥及濃度 本試驗(yàn)選用了6種農(nóng)藥。80%代森錳鋅可濕性粉劑，鄭州志信農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑，績(jī)溪農(nóng)華生物科技有限公司生產(chǎn)；40%百菌清懸浮劑，東莞市瑞德豐生物科技有限公司生產(chǎn)；450 g/L咪鮮胺水乳劑，陜西恒田化工有限公司生產(chǎn)；80%乙蒜素乳油，南陽(yáng)臥龍農(nóng)藥廠生產(chǎn)；70%甲基硫菌靈可濕性粉劑，北京達(dá)世豐生物科技有限公司生產(chǎn)。

供試農(nóng)藥濃度以說明書上的有效使用濃度為依據(jù)，每種農(nóng)藥選3種濃度，代森錳鋅、百菌清、甲基硫菌靈、乙蒜素分別配制了800、900和1 000倍液；苯醚甲環(huán)唑和咪鮮胺分別配制了1 000、1 500、1 800倍液。

1.2.2 試驗(yàn)方法 采用水平擴(kuò)散法中的濾紙片法[2]，并作了一定改進(jìn)。操作方法如下：

1.2.2.1 菌液制備 將培養(yǎng)好的有大量孢子的病原菌移入帶玻璃珠已滅菌的無菌水中，振蕩搖勻，高倍鏡下鏡檢每視野20 ～ 30個(gè)孢子為度。

1.2.2.2 PSA培養(yǎng)基平板制備 在滅菌培養(yǎng)皿中倒入15 mL左右的PSA培養(yǎng)基，等冷卻凝固后備用。

1.2.2.3 抑菌試驗(yàn) 將制備的菌懸液取 1滴，移入培養(yǎng)平板表面，用玻璃涂捧涂布均勻；將圓濾紙片浸入農(nóng)藥藥液中1 min，再將圓濾紙片移入帶菌平板中，每培養(yǎng)皿移入3片，均勻排列。每種農(nóng)藥每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)，以清水對(duì)照，貼上標(biāo)簽，將制好的培養(yǎng)皿倒置恒溫箱26℃培養(yǎng)，隨時(shí)觀察抑菌圈大小及變化。

1.2.2.4 抑菌圈的測(cè)量 以通過圓濾紙片中心的兩次相互垂直的抑菌圈的平均值作為該藥紙片的抑菌直徑。將同一個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)的3個(gè)藥紙片的抑菌直徑作為該培養(yǎng)皿的平均抑菌圈直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 加拿利海棗葉斑病病原

分離培養(yǎng)后3 d出現(xiàn)菌落，菌落平展，表面長(zhǎng)絨毛狀，菌絲白色，邊緣整齊，培養(yǎng)基淡黃色。第5天菌落中心出現(xiàn)黑色液滴，為病菌分生孢子堆，聚成黑色焦油狀。培養(yǎng)過程，未發(fā)現(xiàn)有性階段。

鏡檢特征：菌絲有隔，分枝多，無色。分生孢子大，紡錘形或梭形，直，極少?gòu)澢?；中間有4個(gè)分隔，多數(shù)5個(gè)細(xì)胞，中部3個(gè)褐色，兩端細(xì)胞無色；頂端有3根附屬絲，少數(shù)2根或4根[3]（圖1）

根據(jù)以上特征鑒定其為半知菌亞門、黑盤孢目、擬盤多毛孢屬的掌狀擬盤多毛孢（Pestalotiosis palmarum）。

2.2 抑菌試驗(yàn)結(jié)果

抑菌試驗(yàn)在培養(yǎng)36 h后，出現(xiàn)明顯的抑菌圈，抑菌圈大小見表1。

圖1 病原菌分生孢子的形態(tài)特征Figure1 Characteristic of conidia

從表1可以看出，選擇的6種農(nóng)藥對(duì)加拿利海棗葉斑病菌都有較好的抑制作用。對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制能力由強(qiáng)到弱依次為10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑、450 g/L咪鮮銨水乳劑、80%代森錳鋅可濕性粉劑、40%百菌清懸浮劑、70%甲基硫菌靈可濕性粉劑、80%乙蒜素乳油，其EC50依次為0.167 2、0.283 2、2.946 4、4.138 9、5.978 6、9.2409 mg/L。

表1 6種殺菌劑抑制菌絲生長(zhǎng)毒力測(cè)定結(jié)果Table1 The toxicity test of 6 fungicides against the mycelia

3 小結(jié)與討論

用加拿利海棗葉斑病新鮮病葉經(jīng)分離培養(yǎng)、純化、鑒定，其病原為半知菌亞門、黑盤孢目、擬盤多毛孢屬的掌狀擬盤多毛孢（Pestalotiosis palmarum）。6種殺菌劑從EC50上看，抑菌效果為10%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑＞ 450 g/L咪鮮銨水乳劑 ＞ 80%代森錳鋅可濕性粉劑 ＞ 40%百菌清懸浮劑 ＞ 70%甲基硫菌靈可濕性粉劑 ＞ 80%乙蒜素乳油，最小值為0.167 2 mg/L，最高值為9.240 9 mg/L。因此，6種殺菌劑生產(chǎn)上都可用于防治加拿利海棗葉斑病。

[1]金亮，丁印龍.廈門地區(qū)主要棕櫚植物病害種類普查鑒定及其防治[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2000（4）：12－19.

[2]丁愛云.植物保護(hù)學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：高等教育出版社，2004：83.

[3]陸家云.植物病原真菌學(xué)[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.：476.