劉萍，張秋業(yè)

（1 青島市李滄區(qū)中心醫(yī)院兒科，山東 青島 266041； 2 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科）

過敏性紫癜（HSP）是兒童時(shí)期最常見的一種自身免疫性血管炎性疾病，臨床癥狀表現(xiàn)為紫癜樣皮膚損害以及胃腸道、腎臟、關(guān)節(jié)等多個(gè)系統(tǒng)的損害。HSP急性期有明顯免疫功能失調(diào)，表現(xiàn)為外周血T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂，B淋巴細(xì)胞呈多克隆活化，抗體分泌增多及相關(guān)細(xì)胞因子的改變。HSP病因及發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，其免疫失衡機(jī)制尚未闡明。Th17細(xì)胞是最近發(fā)現(xiàn)的一種以分泌白細(xì)胞介素17（IL－17）為主的效應(yīng)性T細(xì)胞，在自身免疫和促炎癥反應(yīng)方面具有重要作用。CD4＋CD25＋調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（CD4＋CD25＋Treg）是一群重要的具有免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制雙重作用的CD4＋T細(xì)胞，它對(duì)效應(yīng)性T細(xì)胞有抑制作用，是機(jī)體維持自身免疫耐受的重要組成部分。業(yè)已證實(shí)，Th17細(xì)胞增加和（或）CD4＋CD25＋Treg降低與炎癥和各種自身免疫性疾病發(fā)病密切相關(guān)。本文觀察了54例HSP病兒急性期外周血IL－17和CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞水平變化，以及其與淋巴細(xì)胞亞群之間的相關(guān)性，以期探討Th17和CD4＋CD25＋Treg水平變化在兒童 HSP發(fā)病機(jī)制中的作用。

1 資料和方法

1.1 對(duì)象及分組

1.1.1 HSP組 2009年10月—2010年12月，選取青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科診治的HSP急性發(fā)作期病兒54例，男34例，女20例；年齡3～13歲，平均7.5歲。均符合1990年美國風(fēng)濕病協(xié)會(huì)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)［1］。根據(jù)是否有血尿或（和）蛋白尿分為腎炎組（HSPN組）23例和非腎炎組（NHSPN組）31例。近期未使用免疫抑制性藥物。

1.1.2 對(duì)照組 為同期青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒童保健門診健康查體兒童30例，男18例，女12例；年齡2～13歲，平均7.2歲。其中20例應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4＋CD25＋Treg亞群，男18例，女2例；年齡2～11歲，平均年齡5.1歲。既往均無過敏性疾病史，采血前4周內(nèi)無感染及用藥史。

1.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.2.1 標(biāo)本采集 清晨6：00－7：00時(shí)取空腹肘靜脈血2 mL，即刻加入無菌肝素管（肝素20 k U／L）充分抗凝，分裝入兩支試管，一支試管即刻送檢；另一試管以1 200 r／min離心10 min，收集血漿，－30℃冰箱保存。

1.2.2 血漿IL－17水平測(cè)定 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法，按試劑盒說明書操作。試劑盒購自上海迪奧生物制品公司（R＆D分裝）。

1.2.3 CD4＋CD25＋Treg和淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)采用流式細(xì)胞術(shù)，試劑購自美國Beck man－Coulter公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0及PPMS 1.5［2］統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，結(jié)果以±s表示，數(shù)據(jù)間比較采用t檢驗(yàn)，兩變量間相關(guān)性采用直線相關(guān)分析法。

2 結(jié) 果

2.1 HSP病兒血漿IL－17水平變化

HSP組血漿IL－17水平為（86.65±13.90）ng／L，對(duì)照組為（29.75±21.65）ng／L，兩組比較差異有極顯著意義（t＝14.66，P＜0.01）。HSPN 組與NHSPN組血漿IL－17水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組血漿IL－17和CD4＋CD25＋Treg水平比較（±s）

表1 各組血漿IL－17和CD4＋CD25＋Treg水平比較（±s）

組 別 n IL－17（ρ／ng·L－1）CD4＋CD25＋Treg（χ／%）對(duì) 照 組 30 29.75±21.65 3.93±0.42 NHSPN組 31 89.48±11.22 2.22±1.09 HSPN組23 82.45±16.28 2.29±0.95

2.2 HSP病兒外周血CD4＋CD25＋Treg水平變化

HSP組病兒外周血CD4＋CD25＋Treg水平為（2.25±1.02）%，較對(duì)照組（3.93±0.42）%明顯降低（t＝7.28，P＜0.01）。HSPN組與NHSPN組外周血CD4＋CD25＋Treg水平相比較，差異無顯著意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 HSP病兒淋巴細(xì)胞亞群水平變化

與對(duì)照組比較，HSP組外周血CD4＋細(xì)胞比例明顯降低，CD19＋細(xì)胞比例升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t＝4.363、7.370，P＜0.05）；CD3＋、CD8＋、CD3－CD56＋和CD3＋HLADR＋比例均無明顯改變（t＝－1.30～1.98，P均＞0.05）。HSP組CD4＋CD25＋Treg的水平與CD4＋細(xì)胞呈正相關(guān)（r＝0.554，P＜0.01），而與CD19＋細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.305，P＜0.05）。而CD4＋CD25＋Treg水平與CD8＋細(xì)胞、CD3＋細(xì)胞、CD3－CD56＋細(xì)胞和CD3＋HLADR＋細(xì)胞則無相關(guān)性（r＝－0.109～0.287，P＞0.05）。見表2。

表2 HSP病兒外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)（χ／%，±s）

表2 HSP病兒外周血T細(xì)胞亞群檢測(cè)（χ／%，±s）

組別 n CD3＋ CD4＋ CD8＋對(duì)照組 20 61.80±7.24 30.94±7.53 25.85±5.17 HSP組 54 53.72±8.54 23.98±7.73 25.13±6.08組別 n CD3－CD56＋ CD19＋ CD3＋HLADR＋對(duì)照組 20 14.05±10.89 20.37±5.80 1.09±0.75 HSP組54 9.74± 5.92 33.81±9.42 3.10±1.95

2.4 HSP病兒血漿IL－17水平與CD4＋CD25＋Treg水平相關(guān)性

HSP病兒血漿IL－17水平與CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞水平呈明顯負(fù)相關(guān)（r＝－0.295，P＜0.05）。

3 討 論

HSP是以小血管炎為主要病變的系統(tǒng)性血管炎，是兒童期最常見的免疫性血管炎，可出現(xiàn)紫癜樣皮膚損害以及胃腸道、腎臟、關(guān)節(jié)等多個(gè)系統(tǒng)的損害。迄今為止，該病的病因及發(fā)病機(jī)制仍未完全闡明。前期大量研究結(jié)果表明，HSP病兒存在Th1／Th2亞群功能失調(diào)，尤其是Th2亞群功能亢進(jìn)，表明HSP急性期存在免疫功能紊亂［3］。

Th17細(xì)胞是一種不同于Th1、Th2的CD4＋T細(xì)胞亞群，其分泌的最重要的效應(yīng)因子是IL－17。IL－17與受體結(jié)合后，通過活化絲裂原活化的蛋白激酶和NF－k B發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，并上調(diào)IL－1β、TNF－α、IFN－γ等炎癥細(xì)胞因子的基因表達(dá)，促進(jìn)機(jī)體炎癥進(jìn)展。Th17細(xì)胞還可分泌IL－6及TNF－α等以動(dòng)員、募集和分化中性粒細(xì)胞，介導(dǎo)促炎癥反應(yīng)，在感染性疾病和自身免疫性疾病的病理過程中發(fā)揮重要作用。近期大量文獻(xiàn)報(bào)道，冠心病、過敏性疾病和自身免疫性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人IL－17表達(dá)增加［4－6］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HSP病兒血漿IL－17水平明顯增高，與對(duì)照組比較差異有顯著性，與文獻(xiàn)［5］結(jié)果相符，說明異常增高的IL－17參與了HSP的發(fā)病，在HSP的病理過程中起到重要作用。本文結(jié)果還顯示，HSPN組與NHSPN組血漿IL－17水平差異無顯著性，提示急性期有無腎臟損害的HSP病兒外周血IL－17水平變化并無差異。

研究認(rèn)為，HSP存在的T細(xì)胞功能紊亂不僅僅局限于Th2優(yōu)勢(shì)明顯，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量減少導(dǎo)致免疫抑制效應(yīng)不足也可能是導(dǎo)致HSP免疫失衡的重要原因。Treg細(xì)胞是一群重要的同時(shí)具有免疫調(diào)節(jié)和免疫抑制雙重作用的CD4＋T細(xì)胞，其參與了維持外周耐受及抑制自身免疫。Treg細(xì)胞既可通過細(xì)胞間直接接觸、分泌抑制性細(xì)胞因子如IL－10、TGF－β等發(fā)揮抑制效應(yīng)，還可下調(diào)抗原呈遞細(xì)胞（APC）上CD80和CD86的表達(dá)來影響其抗原呈遞能力，并誘導(dǎo)APC分解色氨酸，降低效應(yīng)性T細(xì)胞活性，從而發(fā)揮抑制作用。由此可見，Treg細(xì)胞對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答起著調(diào)節(jié)與抑制雙重作用，使機(jī)體免疫系統(tǒng)既清除異物抗原，又不致?lián)p傷機(jī)體。本研究結(jié)果顯示，HSP病兒CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞水平較對(duì)照組顯著降低，與文獻(xiàn)［7］結(jié)果一致。HSP病兒CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞與CD4＋細(xì)胞呈正相關(guān)，而與CD19＋細(xì)胞呈負(fù)相關(guān)，提示CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞異常與HSP發(fā)病機(jī)制中免疫功能紊亂有密切的關(guān)系，表明HSP急性期存在Treg細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)及對(duì)機(jī)體的免疫抑制功能不足，從而引發(fā)免疫紊亂。

近年來，Th17／Treg的平衡在維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)中的作用越來越受到重視。Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞分別對(duì)自體免疫和炎癥反應(yīng)起正向和負(fù)向調(diào)控作用，同時(shí)兩種細(xì)胞的分化也是互為逆反的過程。RORγt及Foxp3分別是Th17及Treg的特異性轉(zhuǎn)錄因子。當(dāng)機(jī)體處于穩(wěn)定狀態(tài)下或無炎癥損傷時(shí)，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的TGF－β濃度較高，可上調(diào)Foxp3的表達(dá)，誘導(dǎo)Treg的產(chǎn)生，從而維持機(jī)體的免疫耐受；而當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染時(shí)，炎癥遞質(zhì)IL－6則大量產(chǎn)生，協(xié)同低濃度的TGF－β誘導(dǎo)RORγt的產(chǎn)生，從而促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化，介導(dǎo)前炎癥反應(yīng)［8］。由此可見，Th17／Treg平衡維持機(jī)體免疫平衡，一旦受感染、遺傳體質(zhì)影響，兩者的平衡打破，便可引起機(jī)體全身或局部的免疫異常反應(yīng)。既往研究已經(jīng)證實(shí)，Th17增加和（或）Treg降低在大量的炎癥和自身免疫性疾病如動(dòng)脈粥樣硬化、腎臟移植排斥等反應(yīng)中發(fā)揮重要的作用［9－10］。本文的研究結(jié)果顯示，兒童HSP急性期血漿IL－17水平顯著增高，同時(shí)伴有CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞明顯降低，且兩者呈明顯負(fù)相關(guān)，表明在HSP急性期Th17細(xì)胞功能增強(qiáng)而CD4＋CD25＋Treg細(xì)胞免疫抑制效應(yīng)不足，呈現(xiàn)Th17／Treg失衡狀態(tài)。Th17／Treg失衡是導(dǎo)致HSP免疫紊亂的重要原因，在HSP發(fā)病機(jī)制中具有重要作用。如何調(diào)整這種平衡或許會(huì)為HSP的免疫治療提供新思路，為臨床治療開辟新的途徑。

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