李惠珍 蘇松柏

貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001

婦炎散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

李惠珍 蘇松柏

貴陽中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550001

目的:建立婦炎散的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法:采用薄層色譜法鑒別黃柏、姜黃、蒼術(shù)等藥材，采用高效液相色譜法測定婦炎散中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果:該方法薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對照無干擾，鹽酸小檗堿進(jìn)樣量在0.1015～1.015μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系(r=0.9999)，平均加樣回收率為97.97%。結(jié)論:所建標(biāo)準(zhǔn)可用于婦炎散的質(zhì)量控制。

婦炎散;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

盆腔炎是威脅女性健康的十大疾病之一，新藥物的開發(fā)研制和新治療途徑的探索將為該癥的治療提供更為有效的手段。由于目前對盆腔炎的發(fā)病機(jī)理仍缺乏足夠的了解，每年有成千上萬的患者因得不到及時(shí)徹底的治療而留下一系列后遺癥。中藥及中藥成分對盆腔炎的治療具有一定的優(yōu)勢，通過標(biāo)本兼治可達(dá)到抗菌消炎，提高機(jī)體免疫力及改善組織微循環(huán)的教果，具有廣闊的發(fā)展前景?！皨D炎散”為大黃、當(dāng)歸、丹參、黃柏等二十三味中藥組成的復(fù)方制劑;通過多年來的臨床應(yīng)用、對制劑的留樣觀察和質(zhì)量控制，結(jié)果表明我院自制的“婦炎散”療效明確，性質(zhì)穩(wěn)定，發(fā)揮了我院中醫(yī)中藥的特色，傳承了祖國醫(yī)學(xué)精髓，取得較好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。本文主要研究婦炎散的薄層色譜定性鑒別和含量測定研究，為臨床提供安全、有效、可控的藥品提供可靠保障。

1 儀器和試藥

1.1 儀器

Agilent 1100高效液相色譜儀，AB－265型電子天平(德國Mettler－Toledo Group公司);超聲清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司，型號:SG1200H);恒溫電熱烘箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠，型號:GZX－DH－3035);電熱恒溫水浴鍋(上?？莆鲈囼?yàn)儀器廠，型號:DZKW－4)。

1.2 試藥

鹽酸小檗堿對照品(批號:110713－－200910)，黃柏對照藥材(120937－201007)，姜黃對照藥材(110823－201004)，蒼術(shù)對照藥材(0932－9803)，從中國藥品生物制品檢定所購進(jìn)，乙腈、甲醇均為色譜純，其他試劑為分析純，水為重蒸餾水。黃柏、姜黃等藥材均購于貴州濟(jì)仁堂藥業(yè)有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層

2.1.1 黃柏的薄層鑒別

取三批婦炎散粉末各2g，加甲醇溶液20mL，于水浴鍋上回流半小時(shí)，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為供試品溶液，另取黃柏對照藥材0.1g，加甲醇溶液10mL，于水浴鍋上回流半小時(shí)，濾過，濾液濃縮至2 mL，作為對照藥材溶液，同法制成黃柏的陰性對照溶液。吸取上述三種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一以0.5%CMC－Na為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水(10∶6∶1:1)為展開劑，展開，取出，晾干。在紫外燈(365 nm)下檢視。經(jīng)三批樣品實(shí)驗(yàn)，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而且陰性對照無干擾。薄層色譜圖見圖1。

圖1 黃柏的薄層色譜圖

2.2 姜黃的薄層鑒別

取三批婦炎散粉末各4g，加無水乙醇100 mL，超聲15min，濾過，蒸干，加2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液，另取姜黃對照藥材0.2g，加無水乙醇20mL，超聲15min，濾過，蒸干，加2 mL甲醇溶解，作為對照藥材溶液，同法制成姜黃的陰性對照溶液，吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以0.5%CMC－Na為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—甲酸(96∶4∶0.7)為展開劑，展開，取出，晾干。在紫外燈(365 nm)下檢視。經(jīng)三批樣品實(shí)驗(yàn)，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而且陰性對照無干擾。薄層色譜圖見圖2。

圖2 姜黃的薄層色譜圖

2.3 蒼術(shù)的薄層鑒別

取三批婦炎散粉末各4g，加入正己烷20 mL，超聲提取15 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為樣品供試品溶液。另取蒼術(shù)對照藥材2 g，按樣品供試液的制備方法制備對照藥材溶液。同法制成蒼術(shù)的陰性對照溶液。照藥典附錄ⅥB薄層色譜法試驗(yàn)。吸取上述三種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一以0.5%CMC－Na為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚－氯仿－乙酸乙酯(20∶6∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。噴以5%對二甲基酚的10%硫酸乙醇試液，在105℃下烘至顯色。經(jīng)三批樣品實(shí)驗(yàn)，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，而且陰性對照無干擾。薄層色譜圖見圖3。

圖3 黃柏的薄層色譜圖

2.4 梔子苷的含量測定

2.4.1 鹽酸小檗堿測定色譜條件色譜柱:Diamonsil C18(4.6 mm×200 mm，5μm);柱溫:30℃;流速1 mL/min;流動(dòng)相:乙腈－0.1%磷酸溶液(50:50)(每100 mL加十二烷基磺酸鈉0.1g);檢測波長為265 nm;進(jìn)樣量:5μL。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿計(jì)算應(yīng)不低于4000。對照品、樣品、陰性色譜圖見圖4。

圖4 婦炎散HPLC圖

2.4.2 對照品溶液的制備及線性關(guān)系考察

精密稱取干燥至恒重的鹽酸小檗堿對照品適量，用甲醇配制成濃度分別為203μg/m l的對照品溶液。將對照品溶液液制成一系列不同濃度的對照品溶液，按上述兩色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積A對進(jìn)樣量C(mg)進(jìn)行回歸分析，得梔子苷回歸方程:A=2989.1C，r=0.9999。結(jié)果表明，梔子苷在0.1015－1.015μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4.3 供試品及陰性對照溶液的制備

精密稱取婦炎散劑2 g，置于100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相80 mL，超聲40分鐘，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，作為供試品供鹽酸小檗堿含量測定;精密稱取缺黃柏的婦炎散劑2 g，按供試品的制備方法制備，作為陰性對照溶液。

2.4.4 精密度的測定

精密吸取濃度0.1015 mg·mL－1的鹽酸小檗堿對照品溶液10μL，按上述兩色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測得其峰面積，鹽酸小檗堿峰面積RSD值為0.09%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.4.5 重復(fù)性的考察

取6份婦炎散，每份精密稱取4g，按2.3供試品的制備方法，平行制備六份，按上述鹽酸小檗堿的色譜條件測定其峰面積，鹽酸小檗堿的含量為0.26%g·g－1，RSD為0.82%，結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.4.6 穩(wěn)定性的考察

精密吸取供試品溶液5μL在0、2、4、8、12h進(jìn)樣，測得其峰面積，鹽酸小檗堿峰面積RSD值為0.41%，結(jié)果表明供試品在12h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.7 加樣回收率測定

取已知含量婦炎散6份，精密稱取1 g，置于100 mL容量瓶中，分別添加3.045 mg的鹽酸小檗堿對照品，加流動(dòng)相80 mL，超聲40分鐘，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜濾過，測定鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見表1。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4.8 樣品的測定

精密稱取三批婦炎散，按供試品的制備方法制備，按上述的色譜條件，測定的含量，結(jié)果見表2。

表2 梔龍散中梔子苷含量

3 討論

本文制劑婦炎散主要用于治療盆腔炎的治療，由于處方中藥味較多，其中分別對黃檗、丹參、大黃、姜黃、白芷和澤蘭等藥材進(jìn)行了薄層鑒別研究，但因干擾較大，未能列入本文的正文中，含量測定選用了黃檗中有效成分鹽酸小檗堿為指標(biāo)成分，分離效果好，且能很好的反映本方的均一性和穩(wěn)定性。

Study of Quality Standards of Fu Yan San

LI Hui－zhen SU Song－bai
The First Affiliated Hospital of GuiYang college of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，China

Objective:To establish the quality standard of Fu Yan San．Methods:The thin layer chromatography(TLC)was used to identify Cork，Turmeric，Atractylodes herbs，determine the content of of berberine hydrochloride in Fu Yan San By high performance liquid chromatography method(HPLC)．Results:the methods TLC spots is clear and the negative control without interference，Berberine hydrochloride injection volume in the range of0．1015～1.015μg was good linear relationship(r=0.9999)，average recovery was 97.97%．Conclusion:Established standards can be used for quality control of Fu Yan San．

Fu Yan San;Quality standard;Berberine Hydrochloride;Turmeric;Atractylodes

R284.1

A

1007－8517(2012)15－0050－03

貴陽中醫(yī)學(xué)院院內(nèi)課題貴中醫(yī)科院內(nèi)［2010］29號:醫(yī)院制劑“婦炎散”質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究。

李惠珍，女，學(xué)士，副主任藥師，主要從事中藥質(zhì)量控制與新藥研究。E－mail:442126064@qq．com。

2012.05.23)