姚文冰

廣西北海食品藥品檢驗所，廣西 北海 536000

HPLC法測定雙黃連注射液中木犀草苷的含量

姚文冰

廣西北海食品藥品檢驗所，廣西 北海 536000

目的:建立高效液相色譜法同時測定雙黃連注射液中木犀草苷含量的方法。方法:采用高效液相色譜法。色譜柱為Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)，流動相為乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脫，流速:0.8 ml*min－1，檢測波長為350nm，柱溫為室溫，供試品進樣量30μL、對照品進樣量10μL。結果:木犀草苷的進樣量在0.82～4.91μg(r=0.9999)范圍內與各自峰面積積分值呈良好的線性關系;平均回收率為103.31%，RSD為1.87%(n=6)。結論:表明該方法簡單、快速、準確，可用于雙黃連注射液的質量控制。

高效液相色譜法雙黃連注射液;木犀草苷

雙黃連注射液是由金銀花、黃芩、連翹三味藥材經提取加工而成復方制劑，具有清熱解毒，清宣風熱。用于外感風熱引起的發(fā)熱、咳嗽、咽痛。適用于病毒及細菌感染的上呼吸道感染、肺炎、扁桃體炎、咽炎等。目前，雙黃連注射液收載于《衛(wèi)生部中藥成方制劑》，原質量標準中只收載了黃芩苷的含量測定方法，未見金銀花的含量測定方法，因此本文通過系統(tǒng)摸索，增加了高效液相色譜法測定雙黃連注射液中木犀草苷指標性成分的含量。本方法準確、可靠，有效用于雙黃連注射液的質量控制。

1 儀器與試藥

1200 型高效液相色譜儀(美國Agi lent公司);CP225D型電子天平(德國賽多利斯公司);AW－120型電子天平(西班牙COBOS公司)。

木犀草苷對照品(中國藥品生物制品檢定所;批號為110795－200806);雙黃連注射液(湖北香連藥業(yè)有限責任公司，編號:1、2、3);乙腈為色譜純，其它試劑為分析純，水為超純水。

2 實驗方法

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm);流動相:乙腈(A)—0.5%冰醋酸(B)(A+B=100%)作梯度洗脫，t=0→30min，A:10%→70%;t=30→40min，A:70%→30%;t=40→45min，A:30%→10%。檢測波長:350nm;流速:0.8 ml*min－1;柱溫:室溫;進樣量:供試品30?L、對照品10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液配制

精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12h以上的木犀草苷對照品適量，加入50%甲醇制成每1mL含木犀草苷40μg對照品溶液，作為對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液配制

精密量取本品20ml，置水浴上濃縮至約1ml，加中性氧化鋁2g，攪拌混勻后，至中性氧化鋁柱(粒度量100～200目)，5g，內徑1cm)上，用70%乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加50%甲醇適量，溫熱使溶解，轉移至5ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，制得供試品溶液(1)。該法制備的供試品溶液所得的峰形、出峰時間及分離都可達到較好效果。

2.2.3 陰性樣品溶液配制

取不含金銀花的陰性樣品，采用供試品溶液制備方法(2.2.2)制備陰性樣品溶液，進樣分析。

2.3 專屬性考察

分別吸取木犀草苷對照品溶液10μL、供試品溶液、陰性樣品溶液各30μL進樣，按“2.1”項下色譜條件進行檢測。結果供試品溶液中木犀草苷與雜峰完全分離，陰性樣品溶液無干擾。譜圖見圖1、2、3。

2.4 線性關系考察

分別取“2.2.1”的木犀草苷對照品溶液，加50%甲醇制成每1mL含木犀草苷0.16μg對照品溶液，作為系列濃度的對照品溶液。依次自動進樣5、10、15、20、25、30μL，記錄色譜圖。以對照品進樣量X(μg)為橫坐標，峰面積Y為縱坐標，進行線性回歸。得到結果見表1，結果表明，各組分在表1濃度范圍內的線性關系良好。

表1 木犀草苷的線性與范圍

2.5 精密度考察

精密吸取對“2.2.1”的木犀草苷對照品溶液各10uL，在相同的色譜條件下連續(xù)進樣6次，分別測定峰面積的積分值。木犀草苷的RSD分別為0.32%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，于室溫下0、2、4、6、8、12、24h分別按上述色譜條件測定，得到木犀草苷的RSD分別為0.86%(n=6)，表明供試品溶液在24h內基本穩(wěn)定。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品(編號:3)共6份，，按供試品溶液制備方法平行制備溶液并測定，木犀草苷的平均含量2.80μg*ml－1，RSD分別為1.87%(n=6)，表明分析方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的樣品(編號:3)10ml，分別精密加入一定量的木犀草苷對照品，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結果見表2，木犀草苷的平均回收率為103.31%，RSD分別為1.87%(n=6)。

表2 加樣回收率試驗測定結果

2.9 樣品含量測定

取3批雙黃連注射液，按“2.2.2”項下的方法制備供試品溶液，按最佳色譜條件測定，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果

3 結論

通過對雙黃連注射液中的木犀草苷含量的連續(xù)測定的色譜條件的摸索和陰性溶液干擾試驗、樣品穩(wěn)定性、精密度及回收實驗的研究，表明該方法可行，可用于雙黃連注射液中木犀草苷含量的分析。

［1］ 國家藥典委員會編．中華人民共和國藥典(一部)［S］．2010年版．北京:化學工業(yè)出版社，2010:611．

Determination of luteolin in Shuanghuanglian injection by HPLC

YAO Wen－bing
Guangxi Beihai Institute for Food and Drug Control，Beihai 536000，China

OBJECTIVE:To establish a HPLC method for the content determination of luteolin in Shuanghuanglian injection.METHODS:HPLC method was adopted.Agilent ZORBAX SB－phenyl(4.6mm×250mm，5μm)column was used.Acetonitrile－0.5%acetic acid was used as mobile phase at the flow rate of 0.8 ml*min－1，and the detection wavelength was set at 350 nm.colum temperature for room temperature，for try products into sample volume 30μL，and controlled products into sample volume 10μL.RESULTS:The linear ranges of luteolin was 0.82～4.91μg(R=0.9999)respectively.The average recoverie was 103.31%，RSD=1.87%，(n=6)，respectively.CONCLUSION:The method is simple，rapid and accurate，which can be used for quality control of Shuanghuanglian injection.

High performance liquid chromatography;Shuanghuanglian injection;luteolin

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0046－02

2012.05.27)