張 鵬 許占伍 倪小軍 劉記水 呂 潔 毛 懋 殷秋香

(江蘇東越生物技術(shù)發(fā)展股份有限公司,江蘇 鹽城 224133)

液體菌種是食用菌領(lǐng)域正在研究和使用的一項(xiàng)新技術(shù),特別是在大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的今天,液體菌種已成為菌種發(fā)展的新趨勢[1]。而液體菌種質(zhì)量是應(yīng)用液體種工廠化生產(chǎn)食用菌企業(yè)的 “經(jīng)濟(jì)命脈”。采用合適的液體菌種培養(yǎng)基,是實(shí)現(xiàn)金針菇工廠化穩(wěn)定生產(chǎn)的關(guān)鍵之一[2]。

目前,國內(nèi)食用菌工廠化栽培中仍以固體菌種為主[3]。為了做好金針菇液體菌種在工廠化栽培中的推廣工作,我們通過對金針菇液體菌種DY-1培養(yǎng)基的篩選,確定適合其生長的液體培養(yǎng)基配方,保證其穩(wěn)產(chǎn)、高產(chǎn),提高栽培的經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株 DY-1為日本引進(jìn)的液體菌種,由江蘇東越生物技術(shù)發(fā)展股份有限公司技術(shù)中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)方法

(1)氮源篩選。以蔗糖2.0%、KH2PO40.2%、MgSO4?7H2O 0.1%為基礎(chǔ)配方,分別添加1.5%的麩皮、玉米粉、酵母膏、蛋白胨作為氮源。在18～19℃,180 r/min條件下培養(yǎng)168 h后,測量液體菌種DY-1的菌絲濕重和培養(yǎng)液pH值。

(2)碳源篩選。以玉米粉 1.5%、KH2PO40.2%、MgSO4?7H2O 0.1%為基礎(chǔ)配方,分別添加2.0%的蔗糖、麥芽糖、葡萄糖、淀粉作為碳源。在18～19℃,180 r/min條件下培養(yǎng)168 h后,測量DY-1的菌絲濕重和培養(yǎng)液pH值。

(3)發(fā)酵罐培養(yǎng)基中的碳氮比試驗(yàn)。以蔗糖2.0%、KH2PO40.2%、MgSO4?7H2O 0.1%為基礎(chǔ)配方,添加的玉米粉濃度分別為 0.3%、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%和2.5%,采用重鉻酸鉀容量法 (外加熱法)測定總碳含量,采用微量凱氏定氮法測定總氮含量[4]。C/N比分別為 100∶1、60∶1、40∶1、20∶1、10∶1和 5∶1, 依次編號為1～ 6號 ,在18～19℃、0.1MPa條件下,發(fā)酵罐培養(yǎng)168 h后,測量菌絲濕重及培養(yǎng)液pH值。

2 結(jié)果與分析

2.1 氮源 由表1可知,以玉米粉、酵母膏和蛋白胨作為氮源,每10 mL培養(yǎng)液中的金針菇菌絲量分別為1.955 g、1.920 g和1.901 g,明顯高于以麩皮作為氮源的菌絲量1.542 g。玉米粉作氮源的菌絲球直徑較小,形狀均勻。4種配方培養(yǎng)液的pH值都為中性偏酸。

表1不同氮源配方的金針菇菌絲生長情況

2.2 碳源 從表2中可以看出,以蔗糖和麥芽糖作為碳源,每10 mL培養(yǎng)液中的金針菇菌絲量均較大,分別為1.786 g和1.783 g,其次是以葡萄糖作碳源,為1.723 g,均明顯高于以淀粉作碳源的菌絲量1.034 g。以蔗糖作碳源的菌絲球形狀大小不均;麥芽糖和葡萄糖作碳源的菌絲球直徑較小,形狀均勻。淀粉培養(yǎng)液的pH值低于其他3種配方,為6.20。

2.3 碳氮比 由表3可知,C/N在10∶1～40∶1之間,菌絲生長較好,特別是C/N為20∶1,即蔗糖2.0%、玉米粉1.5%、KH2PO40.2%、MgSO4?7H2O 0.1%的配比所得的菌絲濕重最高。因此可確定該配方為生產(chǎn)用最佳配方。

表2 不同碳源配方的金針菇菌絲生長情況

表3 發(fā)酵罐中不同碳氮比培養(yǎng)基的試驗(yàn)結(jié)果

3 結(jié)論與討論

通過與其他幾種氮源培養(yǎng)的菌絲形狀和菌絲體含量比較,并考慮原材料市場的差異性,認(rèn)為在工廠化生產(chǎn)中,選擇以玉米粉作氮源,蔗糖作碳源的培養(yǎng)基較適宜金針菇液體菌種DY-1的生長。

液體培養(yǎng)基中碳、氮含量對菌絲的影響極為明顯。氮源過多,會使菌絲生長過于旺盛;而pH值偏高,氮源不足,則菌絲體繁殖量少,影響產(chǎn)量。碳源過多,易形成較低的pH值;碳源不足,又易引起菌絲體衰老和自溶。因此,液體菌種的培養(yǎng)基配比中,在充分注重碳、氮含量的同時,更應(yīng)把握好相應(yīng)的碳氮比。液體培養(yǎng)基篩選結(jié)果顯示,適合DY-1的最佳液體培養(yǎng)基組成：蔗糖2.0%,玉米粉 1.5%、KH2PO40.2%、MgSO4?7H2O 0.1%,最佳pH值為6.4～6.6之間。

[1]張引芳.食用菌液體菌種生產(chǎn)與應(yīng)用[J].食用菌,2004(6)：11-12.

[2]王增術(shù).白色金針菇母種培養(yǎng)基配方篩選試驗(yàn) [J].食用菌,2011(9)：45-51.

[3]高淑敏.金針菇液體菌種培養(yǎng)液配方篩選試驗(yàn)[J].北方園藝,2011(12)：87-91.

[4]趙 燕,戰(zhàn)琨友.常見菌草的碳氮比測定[J].食用菌,2006(2)：29-30.