李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，浙江臺(tái)州 318020

離子色譜法測(cè)定厄貝沙坦中疊氮化物

李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，浙江臺(tái)州 318020

目的建立離子色譜法測(cè)定厄貝沙坦中疊氮化物的含量。方法采用IonPac AS18（250mm×4mm）離子交換色譜柱，淋洗液采用由淋洗液發(fā)生器自動(dòng)產(chǎn)生的KOH溶液，流速為1.0mL/min。 結(jié)果疊氮根離子在0.003～0.240μg/mL范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好（r=0.999 5），檢測(cè)限為0.000 8μg/mL。在所建立的色譜條件下，疊氮根離子與各常見(jiàn)陰離子之間的分離度良好。 結(jié)論 該方法簡(jiǎn)單快速，專(zhuān)屬性強(qiáng)，結(jié)果準(zhǔn)確，可用作厄貝沙坦中疊氮化物含量的檢測(cè)。

厄貝沙坦；疊氮化物；離子色譜

厄貝沙坦是一種血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，主要用于高血壓的治療[1]，厄貝沙坦還具有重要的腎臟保護(hù)作用，能減緩糖尿病腎病的進(jìn)展。對(duì)于2型糖尿病腎病患者，若同時(shí)患有高血壓，厄貝沙坦可減緩腎病的進(jìn)展[2-3]。厄貝沙坦的化學(xué)名為2-丁基-3-4-2-（1H-四唑-5-基）苯基芐基-1，3-二氮雜螺-4.4壬-1-烯-4-酮。在厄貝沙坦的合成中，通常需要使用疊氮化物，如三丁基疊氮化錫或疊氮化鈉以形成四唑環(huán)[4-9]。疊氮化物屬于劇毒物質(zhì)，可引起中毒死亡。因此，必需嚴(yán)格控制厄貝沙坦中的疊氮化物的含量。《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》都對(duì)厄貝沙坦中疊氮化物的限度作了嚴(yán)格的規(guī)定，即不大于10mg/L[10-11]。本文采用無(wú)試劑離子色譜分析（RFIC）對(duì)厄貝沙坦中的疊氮化物含量進(jìn)行測(cè)定，背景的電導(dǎo)低，基線(xiàn)漂移小，保留時(shí)間穩(wěn)定性好，色譜分辨率高，重現(xiàn)性?xún)?yōu)異，檢驗(yàn)靈敏度高，提高了疊氮化物痕量分析精度。同時(shí)疊氮根與其他常見(jiàn)的陰離子能很好的分離，方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，準(zhǔn)確，方便，能夠完全滿(mǎn)足對(duì)厄貝沙坦中疊氮化物的控制需要。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

DIONEX ICS900離子色譜儀（美國(guó)戴安公司），配DS5電導(dǎo)檢測(cè)器；Chromeleon 6.8色譜工作站；IonPac AG18陰離子保護(hù)柱（50mm×4mm）；IonPac AS18陰離子分離柱（250mm×4 mm）；SPE-C18 預(yù)處理小柱；ASRS 300（4 mm）化學(xué)自再生抑制器；EG50 KOH淋洗液發(fā)生器。

1.2 試藥

疊氮化鈉（美國(guó)Aldrich）；實(shí)驗(yàn)用水為MilliQ超純水；厄貝沙坦對(duì)照品和樣品由浙江天宇藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

淋洗液采用淋洗液發(fā)生器產(chǎn)生的高純KOH溶液；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：200μL；淋洗的梯度條件見(jiàn)表1。

表1 梯度淋洗條件

2.2 對(duì)照溶液的配制

精密稱(chēng)取疊氮化納對(duì)照品約31.0 mg于100 mL容量瓶中，用超純水溶解并釋稀到刻度，混勻。精密量取200μL至200mL的容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，混勻。本溶液的濃度為 0.20 μg/mL（以 N3－計(jì)）。

2.3 樣品的處理

精密稱(chēng)取供試品約0.2 g于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，用超聲波超聲溶解10 min，再用高速離心機(jī)以1 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，取出，用0.22μm的一次性無(wú)菌樣品過(guò)濾器過(guò)濾，再用C18預(yù)處理小柱吸附樣品中的有機(jī)物，最后再用0.22μm的一次性無(wú)菌樣品過(guò)濾器過(guò)濾。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 將按“2.3”項(xiàng)配制厄貝沙坦對(duì)照品溶液和分別含有 N3－、Cl－、CN－、CO32－、NO3－、PO43－、SO42－的各陰離子對(duì)照溶液以及混合溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次注入色譜儀中，記錄色譜圖。混合溶液的色譜見(jiàn)圖1。在選定的色譜條件下，PO43－沒(méi)有響應(yīng)，N3－和其他幾種常見(jiàn)陰離子Cl－、CN－、CO32－、NO3－、SO42－的分離度大于 2.0，分離度很好，不會(huì)對(duì)疊氮根的測(cè)定產(chǎn)生干擾。

2.4.2 檢測(cè)限和定量限 將疊氮化鈉用超純水配制成0.20μg/mL（以N3－計(jì)）的對(duì)照溶液，將此溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。查看色譜圖的信噪比，然后根據(jù)信噪比，將對(duì)照溶液逐步稀釋到疊氮根的信噪比為3∶1的濃度作為最低檢測(cè)濃度，并計(jì)算出疊氮根的檢測(cè)限。疊氮根的最低檢出濃度為0.000 8μg/mL，檢測(cè)限為0.04mg/L。根據(jù)對(duì)照溶液色譜圖的信噪比，將溶液逐步稀釋到疊氮根的信噪比為10∶1時(shí)的濃度作為最低定量檢測(cè)濃度，并計(jì)算出疊氮根的定量限。疊氮根的最低定量檢測(cè)濃度為0.002 9μg/mL，定量限為0.14mg/L。結(jié)果顯示，本方法的檢測(cè)限和定量限小于《歐洲藥典》和《美國(guó)藥典》規(guī)定的10mg/L。

2.4.3 線(xiàn)性關(guān)系考察 將疊氮化鈉用超純水配制一系列濃度的疊氮化鈉對(duì)照溶液，各對(duì)照溶液的濃度（以N3－計(jì)）分別為：0.003、0.020、0.080、0.140、0.201、0.241 μg/mL。將各疊氮化鈉對(duì)照溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條進(jìn)行測(cè)定。以峰面積Y對(duì)質(zhì)量濃度X（μg/mL）進(jìn)行線(xiàn)性回歸。N3－在其質(zhì)量濃度0.003～0.240μg/mL范圍內(nèi)，線(xiàn)性方程為：Y=1.175 7X-0.003 2，r=0.999 5，線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.4.4 回收率試驗(yàn) 按“2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液配制方法配制疊氮化鈉對(duì)照溶液，按“2.3”項(xiàng)下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對(duì)厄貝沙坦樣品進(jìn)行測(cè)定分析。采用外標(biāo)法計(jì)算測(cè)定結(jié)果。采用標(biāo)樣加入法檢驗(yàn)方法的回收率，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 疊氮化物回收率計(jì)算結(jié)果

2.4.5 精密度試驗(yàn) 平行配制6份疊氮化鈉對(duì)照溶液，疊氮離子的濃度為0.20μg/ml。將這6份溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次注入色譜儀中，測(cè)定精密度。疊氮根的峰面積RSD為1.20%，精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批厄貝沙坦樣品6份，分別按“2.3”項(xiàng)下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液，按“2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液配制方法配制疊氮化鈉對(duì)照溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對(duì)厄貝沙坦樣品進(jìn)行測(cè)定分析。采用外標(biāo)法計(jì)算測(cè)定結(jié)果。6份厄貝沙坦樣品中的疊氮化物都為未檢出。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.7 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 將一批厄貝沙坦的樣品按“2.3”項(xiàng)下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。將該樣品溶液在自然條件下放置，分別于 0、1、2、4、8 h 取樣測(cè)定。 結(jié)果顯示，疊氮根都為未檢出。表明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。

2.4.8 耐用性試驗(yàn) 按“2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液配制方法配制疊氮化鈉對(duì)照溶液。將厄貝沙坦的樣品按“2.3”項(xiàng)下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。分別改變淋洗液的流速為0.8mL/min和1.2mL/min，其他色譜條件不變，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，并記錄色譜圖。與正常條件下（1.0 mL/min）測(cè)定的結(jié)果相比，疊氮離子峰面積變化較大（RSD為23.8%），并且改變流速對(duì)疊氮離子的保留時(shí)間影響較大。分別改變氫氧化鉀淋洗液的濃度±0.5mmol/L，其他色譜條件不變，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，并記錄色譜圖。與正常條件下測(cè)定的結(jié)果相比，氫氧化鉀淋洗液的濃度改變+0.5 mmol/L，疊氮離子峰面積變化較大（RSD為10.61%）；氫氧化鉀淋洗液的濃度改變-0.5 mmol/L，疊氮離子峰面積變化很小（RSD為2.17%）。改變氫氧化鉀淋洗液的濃度±0.5 mmol/L，對(duì)疊氮離子的保留時(shí)間有一定的影響，但是影響不大。將色譜柱換成同規(guī)格不同批號(hào)的一根色譜柱，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液按“2.1”項(xiàng)下色譜條件注入色譜儀中，并記錄色譜圖。兩根色譜柱測(cè)定的結(jié)果相比，疊氮離子峰面積變化很?。≧SD為2.37%），并且保留時(shí)間也一致。

2.4.9 厄貝沙坦的樣品測(cè)定 按“2.2”項(xiàng)下對(duì)照溶液配制方法配制疊氮化鈉對(duì)照溶液。將三批厄貝沙坦的樣品按“2.3”項(xiàng)下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，將疊氮化鈉對(duì)照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對(duì)厄貝沙坦樣品進(jìn)行測(cè)定，并用外標(biāo)法計(jì)算結(jié)果。疊氮化鈉對(duì)照品溶液5次重復(fù)進(jìn)樣，疊氮根峰面積的RSD為0.75%，小于2.0%；疊氮根的信噪比為414:1，超過(guò)10；系統(tǒng)適用性符合要求。三批厄貝沙坦樣品的疊氮化物檢測(cè)結(jié)果為未檢出。厄貝沙坦中的疊氮化物的殘留得到了很好的控制，符合《美國(guó)藥典》和《歐洲藥典》不得大于10mg/L的要求。

3 討論

按《美國(guó)藥典》的方法進(jìn)行試驗(yàn)，由于氫氧化鈉的濃度高，導(dǎo)致抑制電流大，背景高。這樣不但易損壞抑制器，由于基線(xiàn)噪音大，也降低了檢測(cè)靈敏度，同時(shí)由于高濃度的氫氧化鈉淋洗液易吸收二氧化碳，導(dǎo)致淋洗液的濃度會(huì)發(fā)生變化，保留時(shí)間的重復(fù)性差。而采用藥典所用的高容量強(qiáng)酸型AS10陰離子色譜柱，不但柱壓高，色譜峰形差，同時(shí)色譜柱的壽命低，分析成本高，不利于對(duì)厄貝沙坦中疊氮根離子的檢驗(yàn)。

本文采用Dionex IonPac AS18分析柱，使用EG50淋洗液發(fā)生器，能夠在線(xiàn)配制任意精確濃度的氫氧化鉀淋洗液，與《美國(guó)藥典》采用的氫氧化鈉淋洗液比較，濃度低，梯度洗脫，這樣可得到更低的背景電導(dǎo)和更低的噪音基線(xiàn)，提高了檢測(cè)的靈敏度，通過(guò)梯度洗脫，使疊氮根與日常陰離子能有效分離，專(zhuān)屬性強(qiáng)。

本文建立了抗高血壓藥厄貝沙坦中疊氮化物的測(cè)定方法，并對(duì)該分析方法進(jìn)行了驗(yàn)證，驗(yàn)證項(xiàng)目包括專(zhuān)屬性、檢測(cè)限度、定量限度、線(xiàn)性試驗(yàn)、回收率、精密度、重復(fù)性、溶液穩(wěn)定性和耐用性。驗(yàn)證結(jié)果表明，在此實(shí)驗(yàn)條件下，在0.003～0.240μg/mL濃度范圍內(nèi)，疊氮根的線(xiàn)性良好，專(zhuān)屬性強(qiáng)，噪音低，靈敏度高，并且操作簡(jiǎn)單，該方法能準(zhǔn)確測(cè)定厄貝沙坦中痕量的疊氮化物。

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Determ ination of azide in Irbesartan by ion chromatography

LIMeijun YAO Xianzhen WANG Xiulin WANG Shanbin
Department of Quality,Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co.,Ltd.,Zhejiang Province,Taizhou 318020,China

Objective To establish an ion chromatographymethod for determination of azide in Irbesartan.MethodsIonPac AS18(250mm×4mm)ion exchange column was used to separate anions,an eluentgeneratorwas used to obtain KOH solu tions,the flow ratewas1.0mL/min.ResultsThe calibration graphsofazidewas linearwithin the range of 0.003-0.240μg/mL(r=0.999 5).The detection limit of azide was 0.000 8μg/mL.Azide and other common anions could be well isolated.ConclusionThemethod is simple,rapid,accurate and suitable for determination of azide in Irbesartan.

Irbesartan;Azide;Ion chromatography

TQ028.33

A

1673-7210（2012）11（b）-0118-03

李美君（1964.2-），女，湖南岳陽(yáng)人，執(zhí)業(yè)藥師，主要從事藥品分析工作。

汪秀林（1972.4-），男，安徽池州人，工程師，主要從事藥品分析工作。

2012-07-17 本文編輯：衛(wèi) 軻）