李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，浙江臺州 318020

離子色譜法測定厄貝沙坦中疊氮化物

李美君 姚仙珍 汪秀林 王善斌

浙江天宇藥業(yè)股份有限公司質(zhì)量部，浙江臺州 318020

目的建立離子色譜法測定厄貝沙坦中疊氮化物的含量。方法采用IonPac AS18（250mm×4mm）離子交換色譜柱，淋洗液采用由淋洗液發(fā)生器自動產(chǎn)生的KOH溶液，流速為1.0mL/min。 結(jié)果疊氮根離子在0.003～0.240μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好（r=0.999 5），檢測限為0.000 8μg/mL。在所建立的色譜條件下，疊氮根離子與各常見陰離子之間的分離度良好。 結(jié)論 該方法簡單快速，專屬性強，結(jié)果準確，可用作厄貝沙坦中疊氮化物含量的檢測。

厄貝沙坦；疊氮化物；離子色譜

厄貝沙坦是一種血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，主要用于高血壓的治療[1]，厄貝沙坦還具有重要的腎臟保護作用，能減緩糖尿病腎病的進展。對于2型糖尿病腎病患者，若同時患有高血壓，厄貝沙坦可減緩腎病的進展[2-3]。厄貝沙坦的化學(xué)名為2-丁基-3-4-2-（1H-四唑-5-基）苯基芐基-1，3-二氮雜螺-4.4壬-1-烯-4-酮。在厄貝沙坦的合成中，通常需要使用疊氮化物，如三丁基疊氮化錫或疊氮化鈉以形成四唑環(huán)[4-9]。疊氮化物屬于劇毒物質(zhì)，可引起中毒死亡。因此，必需嚴格控制厄貝沙坦中的疊氮化物的含量?！睹绹幍洹泛汀稓W洲藥典》都對厄貝沙坦中疊氮化物的限度作了嚴格的規(guī)定，即不大于10mg/L[10-11]。本文采用無試劑離子色譜分析（RFIC）對厄貝沙坦中的疊氮化物含量進行測定，背景的電導(dǎo)低，基線漂移小，保留時間穩(wěn)定性好，色譜分辨率高，重現(xiàn)性優(yōu)異，檢驗靈敏度高，提高了疊氮化物痕量分析精度。同時疊氮根與其他常見的陰離子能很好的分離，方法專屬性強，準確，方便，能夠完全滿足對厄貝沙坦中疊氮化物的控制需要。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

DIONEX ICS900離子色譜儀（美國戴安公司），配DS5電導(dǎo)檢測器；Chromeleon 6.8色譜工作站；IonPac AG18陰離子保護柱（50mm×4mm）；IonPac AS18陰離子分離柱（250mm×4 mm）；SPE-C18 預(yù)處理小柱；ASRS 300（4 mm）化學(xué)自再生抑制器；EG50 KOH淋洗液發(fā)生器。

1.2 試藥

疊氮化鈉（美國Aldrich）；實驗用水為MilliQ超純水；厄貝沙坦對照品和樣品由浙江天宇藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

淋洗液采用淋洗液發(fā)生器產(chǎn)生的高純KOH溶液；流速：1.0mL/min；進樣量：200μL；淋洗的梯度條件見表1。

表1 梯度淋洗條件

2.2 對照溶液的配制

精密稱取疊氮化納對照品約31.0 mg于100 mL容量瓶中，用超純水溶解并釋稀到刻度，混勻。精密量取200μL至200mL的容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，混勻。本溶液的濃度為 0.20 μg/mL（以 N3－計）。

2.3 樣品的處理

精密稱取供試品約0.2 g于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，用超聲波超聲溶解10 min，再用高速離心機以1 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心15 min，取出，用0.22μm的一次性無菌樣品過濾器過濾，再用C18預(yù)處理小柱吸附樣品中的有機物，最后再用0.22μm的一次性無菌樣品過濾器過濾。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性試驗 將按“2.3”項配制厄貝沙坦對照品溶液和分別含有 N3－、Cl－、CN－、CO32－、NO3－、PO43－、SO42－的各陰離子對照溶液以及混合溶液按“2.1”項下色譜條件依次注入色譜儀中，記錄色譜圖。混合溶液的色譜見圖1。在選定的色譜條件下，PO43－沒有響應(yīng)，N3－和其他幾種常見陰離子Cl－、CN－、CO32－、NO3－、SO42－的分離度大于 2.0，分離度很好，不會對疊氮根的測定產(chǎn)生干擾。

2.4.2 檢測限和定量限 將疊氮化鈉用超純水配制成0.20μg/mL（以N3－計）的對照溶液，將此溶液按“2.1”項下色譜條件注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。查看色譜圖的信噪比，然后根據(jù)信噪比，將對照溶液逐步稀釋到疊氮根的信噪比為3∶1的濃度作為最低檢測濃度，并計算出疊氮根的檢測限。疊氮根的最低檢出濃度為0.000 8μg/mL，檢測限為0.04mg/L。根據(jù)對照溶液色譜圖的信噪比，將溶液逐步稀釋到疊氮根的信噪比為10∶1時的濃度作為最低定量檢測濃度，并計算出疊氮根的定量限。疊氮根的最低定量檢測濃度為0.002 9μg/mL，定量限為0.14mg/L。結(jié)果顯示，本方法的檢測限和定量限小于《歐洲藥典》和《美國藥典》規(guī)定的10mg/L。

2.4.3 線性關(guān)系考察 將疊氮化鈉用超純水配制一系列濃度的疊氮化鈉對照溶液，各對照溶液的濃度（以N3－計）分別為：0.003、0.020、0.080、0.140、0.201、0.241 μg/mL。將各疊氮化鈉對照溶液按“2.1”項下色譜條進行測定。以峰面積Y對質(zhì)量濃度X（μg/mL）進行線性回歸。N3－在其質(zhì)量濃度0.003～0.240μg/mL范圍內(nèi)，線性方程為：Y=1.175 7X-0.003 2，r=0.999 5，線性關(guān)系良好。

2.4.4 回收率試驗 按“2.2”項下對照溶液配制方法配制疊氮化鈉對照溶液，按“2.3”項下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。按“2.1”項下色譜條件，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對厄貝沙坦樣品進行測定分析。采用外標法計算測定結(jié)果。采用標樣加入法檢驗方法的回收率，測定結(jié)果見表2。

表2 疊氮化物回收率計算結(jié)果

2.4.5 精密度試驗 平行配制6份疊氮化鈉對照溶液，疊氮離子的濃度為0.20μg/ml。將這6份溶液按“2.1”項下色譜條件依次注入色譜儀中，測定精密度。疊氮根的峰面積RSD為1.20%，精密度良好。

2.4.6 重復(fù)性試驗 取同一批厄貝沙坦樣品6份，分別按“2.3”項下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液，按“2.2”項下對照溶液配制方法配制疊氮化鈉對照溶液。按“2.1”項下色譜條件，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對厄貝沙坦樣品進行測定分析。采用外標法計算測定結(jié)果。6份厄貝沙坦樣品中的疊氮化物都為未檢出。表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.7 溶液穩(wěn)定性試驗 將一批厄貝沙坦的樣品按“2.3”項下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。將該樣品溶液在自然條件下放置，分別于 0、1、2、4、8 h 取樣測定。 結(jié)果顯示，疊氮根都為未檢出。表明樣品溶液的穩(wěn)定性良好。

2.4.8 耐用性試驗 按“2.2”項下對照溶液配制方法配制疊氮化鈉對照溶液。將厄貝沙坦的樣品按“2.3”項下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。分別改變淋洗液的流速為0.8mL/min和1.2mL/min，其他色譜條件不變，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，并記錄色譜圖。與正常條件下（1.0 mL/min）測定的結(jié)果相比，疊氮離子峰面積變化較大（RSD為23.8%），并且改變流速對疊氮離子的保留時間影響較大。分別改變氫氧化鉀淋洗液的濃度±0.5mmol/L，其他色譜條件不變，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，并記錄色譜圖。與正常條件下測定的結(jié)果相比，氫氧化鉀淋洗液的濃度改變+0.5 mmol/L，疊氮離子峰面積變化較大（RSD為10.61%）；氫氧化鉀淋洗液的濃度改變-0.5 mmol/L，疊氮離子峰面積變化很?。≧SD為2.17%）。改變氫氧化鉀淋洗液的濃度±0.5 mmol/L，對疊氮離子的保留時間有一定的影響，但是影響不大。將色譜柱換成同規(guī)格不同批號的一根色譜柱，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液按“2.1”項下色譜條件注入色譜儀中，并記錄色譜圖。兩根色譜柱測定的結(jié)果相比，疊氮離子峰面積變化很?。≧SD為2.37%），并且保留時間也一致。

2.4.9 厄貝沙坦的樣品測定 按“2.2”項下對照溶液配制方法配制疊氮化鈉對照溶液。將三批厄貝沙坦的樣品按“2.3”項下樣品前處理方法配制厄貝沙坦樣品溶液。按“2.1”項下色譜條件，將疊氮化鈉對照溶液和厄貝沙坦樣品溶液注入色譜儀中，對厄貝沙坦樣品進行測定，并用外標法計算結(jié)果。疊氮化鈉對照品溶液5次重復(fù)進樣，疊氮根峰面積的RSD為0.75%，小于2.0%；疊氮根的信噪比為414:1，超過10；系統(tǒng)適用性符合要求。三批厄貝沙坦樣品的疊氮化物檢測結(jié)果為未檢出。厄貝沙坦中的疊氮化物的殘留得到了很好的控制，符合《美國藥典》和《歐洲藥典》不得大于10mg/L的要求。

3 討論

按《美國藥典》的方法進行試驗，由于氫氧化鈉的濃度高，導(dǎo)致抑制電流大，背景高。這樣不但易損壞抑制器，由于基線噪音大，也降低了檢測靈敏度，同時由于高濃度的氫氧化鈉淋洗液易吸收二氧化碳，導(dǎo)致淋洗液的濃度會發(fā)生變化，保留時間的重復(fù)性差。而采用藥典所用的高容量強酸型AS10陰離子色譜柱，不但柱壓高，色譜峰形差，同時色譜柱的壽命低，分析成本高，不利于對厄貝沙坦中疊氮根離子的檢驗。

本文采用Dionex IonPac AS18分析柱，使用EG50淋洗液發(fā)生器，能夠在線配制任意精確濃度的氫氧化鉀淋洗液，與《美國藥典》采用的氫氧化鈉淋洗液比較，濃度低，梯度洗脫，這樣可得到更低的背景電導(dǎo)和更低的噪音基線，提高了檢測的靈敏度，通過梯度洗脫，使疊氮根與日常陰離子能有效分離，專屬性強。

本文建立了抗高血壓藥厄貝沙坦中疊氮化物的測定方法，并對該分析方法進行了驗證，驗證項目包括專屬性、檢測限度、定量限度、線性試驗、回收率、精密度、重復(fù)性、溶液穩(wěn)定性和耐用性。驗證結(jié)果表明，在此實驗條件下，在0.003～0.240μg/mL濃度范圍內(nèi)，疊氮根的線性良好，專屬性強，噪音低，靈敏度高，并且操作簡單，該方法能準確測定厄貝沙坦中痕量的疊氮化物。

[1]張紅穎，蔡亞軍，李春燕，等.厄貝沙坦治療老年射血分數(shù)正常心力衰竭 24 例效果觀察[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2012，24（3）：37-39.

[2]Lewis E，Hunsicker LG，Clarke WR.Renoprotective effect of the angiotensin-receptor antagonist irbesartan in patients with nephropathy due to type 2 diabetes[J].N Engl JMed，2001，345（12）：851-860.

[3]曲紅玉，郭麗.厄貝沙坦治療老年原發(fā)性高血壓的療效及對腎功能的影響[J].中國藥學(xué)雜志，2006，41（13）：1034-1035.

[4] 岑均達，馬霞.厄貝沙坦的合成[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（3）：239-240.

[5]Reddy RB，Sudhakar S，Sridhar C，et al.Process for preparing of irbesartan[P].WO Patent 2005113518，2005-12-01.

[6]Murali K，Prasad D.Process for the preparation of irbesartan [P].US Patent 0275828，2011-11-10.

[7]Udhaya K.Process for preparing irbesartan[P].USPatent0063299，2010-03-11.

[8]Bernhart C，Breliere JC.N-Substituted heterocyclic derivatives，their preparation and the pharmaceutical compositions in which they are present[P].USPatent 5270317，1993-12-14.

[9]Venkata K.Process for the preparation of irbesartan[P].USPatent 0056 797，2010-03-04.

[10]The United States Pharmacopeial Convention.US Pharmacopoeia[S].35th revision.US：United Book Press，2011：3556-3557.

[11]The European Pharmacopoeia Commission.European Pharmacopoeia[S].7.0th edition.Strasbourg：EDQM，2009：2278-2279.

Determ ination of azide in Irbesartan by ion chromatography

LIMeijun YAO Xianzhen WANG Xiulin WANG Shanbin
Department of Quality,Zhejiang Tianyu Pharmaceutical Co.,Ltd.,Zhejiang Province,Taizhou 318020,China

Objective To establish an ion chromatographymethod for determination of azide in Irbesartan.MethodsIonPac AS18(250mm×4mm)ion exchange column was used to separate anions,an eluentgeneratorwas used to obtain KOH solu tions,the flow ratewas1.0mL/min.ResultsThe calibration graphsofazidewas linearwithin the range of 0.003-0.240μg/mL(r=0.999 5).The detection limit of azide was 0.000 8μg/mL.Azide and other common anions could be well isolated.ConclusionThemethod is simple,rapid,accurate and suitable for determination of azide in Irbesartan.

Irbesartan;Azide;Ion chromatography

TQ028.33

A

1673-7210（2012）11（b）-0118-03

李美君（1964.2-），女，湖南岳陽人，執(zhí)業(yè)藥師，主要從事藥品分析工作。

汪秀林（1972.4-），男，安徽池州人，工程師，主要從事藥品分析工作。

2012-07-17 本文編輯：衛(wèi) 軻）