張?jiān)撇?趙衛(wèi)強(qiáng) 王鳳安

1.邢臺(tái)礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院消化外科，河北邢臺(tái) 054000；2.邢臺(tái)威縣章臺(tái)中心衛(wèi)生院，河北威縣 054702；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院胃腸外科，河北石家莊 050000

大腸癌中NDRG-1及P53的表達(dá)及其與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

張?jiān)撇?趙衛(wèi)強(qiáng)2王鳳安3

1.邢臺(tái)礦業(yè)集團(tuán)總醫(yī)院消化外科，河北邢臺(tái) 054000；2.邢臺(tái)威縣章臺(tái)中心衛(wèi)生院，河北威縣 054702；3.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院胃腸外科，河北石家莊 050000

目的探討抑癌基因NDRG-1及P53在大腸癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法用免疫組化法檢測(cè)NDRG-1及P53蛋白在大腸癌組織及正常大腸組織中的表達(dá)情況。結(jié)果NDRG-1在大腸癌組織中的表達(dá)明顯降低，與腫瘤浸潤(rùn)、淋巴轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)（P＜0.05）。P53（突變型）基因在大腸癌組織中的表達(dá)明顯增高，與腫瘤浸潤(rùn)密切相關(guān)（P＜0.05），而與腫瘤轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P＞0.05）。結(jié)論抑癌基因NDRG-1與P53（野生型）在大腸癌浸潤(rùn)過(guò)程中具有較為明顯的協(xié)同或調(diào)控作用，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過(guò)程中兩者無(wú)明顯的協(xié)同作用，NDRG-1與P53在大腸癌組織中的表達(dá)具有相關(guān)性。檢測(cè)兩基因?qū)εR床的大腸癌手術(shù)治療及預(yù)后具有一定的參考意義。

大腸癌；NDRG-1；P53

大腸癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)近20年來(lái)發(fā)病率逐年遞增，但腫瘤的病因尚未明確。目前的研究表明抑癌基因在大腸癌的發(fā)展轉(zhuǎn)移中起著非常的重要作用，NDRG-1和P53均為抑癌基因，且NDRG-1抑制大腸癌發(fā)展轉(zhuǎn)移的過(guò)程與P53基因相關(guān)。本研究采用免疫組化（S-P）法，檢測(cè)正常大腸組織及大腸癌中NDRG-1及P53的表達(dá)，觀察兩者在大腸癌組織中的表達(dá)情況及相關(guān)性，探討這兩種抑癌基因與腫瘤浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的關(guān)系，以期對(duì)臨床大腸癌治療及預(yù)后的判斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2007～2008年河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)的大腸癌標(biāo)本38例（腫瘤組），其中，男21例，女17例，平均年齡58歲，入選病例皆未進(jìn)行任何化療或放療。15例正常大腸組織取自經(jīng)病理證實(shí)的外傷或良性疾病患者（正常組），其中，男9例，女6例，平均年齡56歲。兩組一般情況比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 試劑

NDRG-1兔抗人多克隆抗體和P53鼠抗人單克隆抗體分別購(gòu)自英國(guó)Abcam公司和美國(guó)Santa Cruz公司；免疫組化染色SP試劑盒購(gòu)自北京中杉公司。

1.3 方法

標(biāo)本切片厚4μm，采用免疫組化法，按試劑盒使用說(shuō)明書(shū)操作，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判斷

P53蛋白定位于細(xì)胞核，連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，出現(xiàn)黃或褐色細(xì)胞數(shù)≥25%為陽(yáng)性。NDRG-1蛋白定位于細(xì)胞漿內(nèi)，連續(xù)觀察10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野記數(shù)100個(gè)細(xì)胞，陽(yáng)性為出現(xiàn)黃至棕褐色顆粒，結(jié)果判斷采用半定量積分法。①據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比：≤5%計(jì)為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，＞50%為3分；②據(jù)著色強(qiáng)弱：無(wú)顯色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)乘積為最終結(jié)果：0分為陰性，1～2分為弱陽(yáng)性（±），3～6分為陽(yáng)性（+），＞6分為強(qiáng)陽(yáng)性（++），其中，≥3分統(tǒng)計(jì)為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Spearman秩相關(guān)分析兩種蛋白表達(dá)的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NDRG-1及P53蛋白在腫瘤組及正常組中的表達(dá)情況

腫瘤組中NDRG-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為21.05%（8/38），正常組中其表達(dá)陽(yáng)性率為66.67%（10/15）；兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。腫瘤組中P53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為81.58%（31/38），正常組中其表達(dá)陽(yáng)性率為6.67%（1/15）；兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 NDRG-1及P53在腫瘤組及正常組中的表達(dá)情況（例）

2.2 NDRG-1及P53與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

NDRG-1在大腸癌組織中的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.05），P53的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)程度有關(guān)（P＜0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 NDRG-1及P53在大腸癌組織中的表達(dá)及其與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系

2.3 NDRG-1與P53（突變型）基因在大腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，NDRG-1與P53（突變型）基因在大腸癌組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)（r）為-0.402（P= 0.01）。見(jiàn)表3。

表3 NDRG-1與P53（突變型）在大腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移是個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，到目前還不確切清楚其原因。抑癌基因具有抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用，NDRG-1基因?yàn)樾掳l(fā)現(xiàn)的抑癌基因，是由Van等[1]通過(guò)觀察結(jié)腸癌細(xì)胞株HT29-D4體外誘導(dǎo)分化過(guò)程中基因表達(dá)的變化發(fā)現(xiàn)并首先命名的。NDRG-1基因在結(jié)腸上皮細(xì)胞分化過(guò)程中高表達(dá)，而在結(jié)腸腫瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)低表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，NDRG-1對(duì)腫瘤有比較明顯的抑制作用，可能是通過(guò)參與P53和PTEN基因的調(diào)控，抑制VEGF基因表達(dá)，抑制腫瘤形成新生血管，達(dá)到抑制腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的目的[2]。Stein等[3]也發(fā)現(xiàn)，NDRG-1是P53的一個(gè)靶基因，通過(guò)P53基因的調(diào)控作用來(lái)抑制腫瘤的發(fā)展。Kurdistani等[4]通過(guò)檢測(cè)多種瘤株和瘤組織中NDRG-1基因的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)瘤株和瘤組織中NDRG-1基因均為低表達(dá)，而在NDRG-1基因高表達(dá)時(shí)則明顯可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。在體外試驗(yàn)中已經(jīng)證明，NDRG-1可以抑制腫瘤生長(zhǎng)。馬薇等[5]研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中NDRG-1低表達(dá)，表明與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)。

野生型P53基因是重要的抑癌基因，在細(xì)胞增殖、凋亡過(guò)程中起重要的作用，但P53基因不穩(wěn)定，易突變，突變后的P53基因失去對(duì)細(xì)胞增殖、凋亡的調(diào)控作用，易導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。人類幾乎所有腫瘤中都有不同程度的P53基因突變，包括乳腺癌、肝癌、直腸癌、胃癌等許多腫瘤中突變型P53表達(dá)均明顯增高[6]。

本研究發(fā)現(xiàn)，NDRG-1在大腸癌組織中的表達(dá)明顯降低。NDRG-1的表達(dá)情況與大腸癌浸潤(rùn)程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，表明其在大腸癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中起著抑制作用。劉瑛瑛等[7]研究也發(fā)現(xiàn)，NDRG-1對(duì)HT-29人結(jié)腸癌細(xì)胞株侵襲和遷移有抑制作用。本研究顯示，P53（突變型）基因在大腸癌組織中的表達(dá)明顯增高，與腫瘤浸潤(rùn)程度密切相關(guān)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，表明P53基因突變可能參與調(diào)控大腸癌的發(fā)展過(guò)程，且兩種基因在大腸癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。說(shuō)明野生型P53與NDRG-1同為抑癌基因，在大腸癌的發(fā)展、浸潤(rùn)過(guò)程中起著協(xié)同作用，且可能P53基因?qū)DRG-1在大腸癌浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移的作用起著控制作用。Wang等[2]的研究也說(shuō)明了NDRG-1通過(guò)P53調(diào)控參與抑制腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。因此，檢測(cè)該兩種基因在大腸癌組織中的表達(dá)情況及其與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的關(guān)系對(duì)腫瘤診斷治療有較大的幫助。

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The relationship between P53,NDRG-1 expression in colorectal carcinoma tissue and tumor invasion and metastasis

ZHANG Yunchang1 ZHAOWeiqiang2 WANG Fengan3
1.Department of Digestive Surgery,XingtaiMining General Hospital,Heibei Province,Xingtai 054000,China;2.Zhangtai Center Hospital ofWei County in Xingtai City,Heibei Province,Weixian 054702,China;3.Department of Gastrointestinal Surgery,the Second Hospital of HebeiMedical University,Heibei Province,Shijiazhuang 050000,China

ObjectiveTo investigate the expression of NDRG-1,P53 tumor suppressor genes in colorectal carcinoma tissue and its relationship with tumor invasion and metastasis.MethodsImmunohistochemistrymethod was used to detect the expression of NDRG-1 and P53 in colorectal carcinoma tissue and normal colorectal tissue.ResultsThe expression of NDRG-1 in colorectal cancer tissue decreased significantly,and its closely related to the invasion and lymph nodemetastasis of tumor(P＜0.05).The expression of P53(mutant)in colorectal cancer tissue significantly increased,its closely related to tumor-infiltrating(P＜0.05),but unrelated with tumormetastasis(P＞0.05).ConclusionTumor suppressor gene P53 and NDRG-1(wild-type)have obvious synergy or regulation effect in the process of colorectal carcinoma invasion,but they have no obvious synergy in lymph node metastasis.The expression of NDRG-1 and P53 is relevant in colorectal cancer tissue.Therearecertain referencesignificancein colorectalcancersurgicaltreatmentand prognosisbydetectionof the twogenes.

Colorectal carcinoma;NDRG-1;P53

R735.3+4

A

1673-7210（2012）11（b）-0054-02

張?jiān)撇?966-），外科副主任醫(yī)師，主要從事胃腸外科的研究。

2012-06-26 本文編輯：程銘）