朱錢鋒

（海寧衛(wèi)生學(xué)校，浙江 海寧 314400）

有效提高生理學(xué)玻片法血型鑒定實驗成功率和準(zhǔn)確度探析與實踐

朱錢鋒

（海寧衛(wèi)生學(xué)校，浙江 海寧 314400）

生理學(xué)玻片法；血型鑒定實驗；成功率；準(zhǔn)確度

ABO血型鑒定實驗是生理學(xué)教學(xué)中一項實用而又能讓學(xué)生感興趣的實驗，在實際臨床工作中的應(yīng)用度很高，開展此項實驗有助于理論聯(lián)系實際，加深對血型理論知識的理解。學(xué)生在實驗過程中，經(jīng)常會出現(xiàn)一些影響實驗進程、準(zhǔn)確度或成敗的因素，為了確保實驗的順利進行，提高實驗成功率與準(zhǔn)確度，筆者對多年的實驗教學(xué)進行探析，總結(jié)出做好這一實驗的一些要領(lǐng)，以供本實驗教學(xué)參考。

1 實驗概況

血型鑒定實驗?zāi)康氖亲寣W(xué)生學(xué)會用玻片法鑒定ABO血型，加深理解血型分型的依據(jù)。實驗原理是根據(jù)凝集反應(yīng)的原理，即當(dāng)紅細(xì)胞膜上的凝集原與其相對應(yīng)的凝集素（抗體）相遇時，發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，紅細(xì)胞被抗體凝集成一簇簇不規(guī)則細(xì)胞團，形成肉眼或鏡下可見的細(xì)胞團（結(jié)果判斷見表1）。實驗用品包括標(biāo)準(zhǔn)抗A和抗B血清、玻片、小直徑記號筆、酒精消毒棉球、干棉球、牙簽、采血針、顯微鏡等。實驗方法主要步驟分為標(biāo)記玻片、滴加血清、消毒采血、觀察反應(yīng)和判斷結(jié)果5步。

表1 血型鑒定結(jié)果判斷依據(jù)

2 實驗過程中可能出現(xiàn)的影響因素及原因

2.1 玻片準(zhǔn)備不當(dāng)

由于玻片薄而透明，部分學(xué)生會反放玻片，使得兩個凹面朝下，造成標(biāo)準(zhǔn)血清滴在玻片平面上，造成血清流動散開。玻片放置不平也會使血清散溢。玻片潮濕，同樣會容易使血清散溢。玻片放置的背景顏色偏深會使觀察時對比度不明顯，增加判斷難度。有些學(xué)生會忘記或嫌麻煩不標(biāo)記玻片上的A和B符號，等到判斷時分不清抗A和抗B血清，導(dǎo)致結(jié)果無法判斷。

2.2 采血留樣失敗

成功采血留取樣本是實驗中的一個重要環(huán)節(jié)。在采血過程中，筆者發(fā)現(xiàn)存在下述情況影響采血，表現(xiàn)為：（1）因怕疼不敢扎針，或扎針動作慢、輕、猶豫，出現(xiàn)很長時間采不成血。（2）扎針后因末梢血不豐富，擠不出一滴血。（3）血液擠出來后，血散開在指腹上，看得到而取不到血。（4）暈血致實驗無法進行。

2.3 血液血清配比失調(diào)

血液樣本過多或過少均會使結(jié)果難以判斷，導(dǎo)致實驗失敗。過多會導(dǎo)致直接發(fā)生凝血而難以判斷結(jié)果，過少會讓人看不清有無凝集反應(yīng)。

2.4 血清和樣本不慎混淆

任何使得兩種血清相互混淆或血清與手指上血液相接觸的情況均會導(dǎo)致結(jié)果的錯誤或?qū)嶒炇?。表現(xiàn)在：（1）用牙簽攪拌樣本與血清的混合物時，同一端去攪拌兩處。（2）用牙簽一端取血后，接觸到血清，再用該牙簽這端返回取血，導(dǎo)致血清與手指上血液混淆。（3）指頭下垂，不慎使血滴過低碰到血清。

W4#=0.6(0.6415,0.1279,0.7428,0.1056,0.0961)+0.4(0.2509,0.2159,0,0,0)T=(0.4853,0.1631,0.4457,0.0634,0.0577)T

2.5 攪拌不充分與反應(yīng)時間不足

攪拌不充分或等待反應(yīng)時間過短，使反應(yīng)結(jié)果不典型或難以判斷。

2.6 結(jié)果無法判斷或誤判

部分學(xué)生不能區(qū)分凝血現(xiàn)象和凝集現(xiàn)象，或不能判斷有無凝集反應(yīng)的現(xiàn)象，或出現(xiàn)誤判的現(xiàn)象，主要原因是對理論知識掌握不扎實，對反應(yīng)的觀察能力低。

2.7 其他存在的一些影響因素與現(xiàn)象

如存在血清失效、學(xué)生對實驗準(zhǔn)備不充分、出現(xiàn)凝血功能障礙等因素致實驗失敗或結(jié)果錯誤。

3 討論

上述現(xiàn)象是在實驗過程中常會出現(xiàn)的現(xiàn)象，注意這些環(huán)節(jié)，通過對學(xué)生加以指導(dǎo)，做出相應(yīng)的應(yīng)對措施完全可以避免這些情況的發(fā)生，從而保證實驗順利進行并達到預(yù)期效果。

在玻片的準(zhǔn)備上，首先要讓學(xué)生用餐巾紙反復(fù)擦拭，保證干燥清潔。放置之前要先用手感觸凹面并朝上放置，放置要保證水平，最好選用凹面相對深一點的玻片，這些都能保證血清不易溢出或散開。同時要放在淺色的背景上，以便于觀察反應(yīng)情況。要求學(xué)生必須在玻片的兩端用小直徑記號筆標(biāo)記A和B，滴入的血清與之相對應(yīng)，這樣可避免出現(xiàn)無法辨認(rèn)哪一端是抗A或抗B的情況。

做好采血工作是實驗成敗的前提條件。對于膽小害怕者，應(yīng)做好思想工作，解除緊張或恐懼心理。分兩個人一組互助采血，取無名指腹部位，嚴(yán)格消毒，要領(lǐng)是捏緊無名指末節(jié)的兩側(cè)，讓皮膚繃緊，干脆利落地以適當(dāng)力度扎針，杜絕輕、慢的動作和猶豫的心態(tài)，因為這樣會更疼痛并使學(xué)生因更恐懼而不敢扎針采血。對于手指冰冷或蒼白者在扎針前先活動手臂和手指，暖手、搓手或甩手，使手指末梢的血供豐富一點，以避免扎針后擠不出血。血液流出后立即讓指腹面朝下，避免指腹朝上或其他朝向，否則血會立即散溢開來，因血液的粘滯性，一旦散溢就很難取到成滴的血液。

一般由教師事先給學(xué)生滴備好血清，量以兩大滴左右為宜。當(dāng)血液成滴后，分別往兩個凹面內(nèi)血清中滴入一小滴即可，注意滴血清與滴血液時間不能間隔過長，血液樣本不能過多或過少。間隔過長導(dǎo)致凝集反應(yīng)不典型；血液過多則血清抗體量相對不足，混合物發(fā)生血液凝固，導(dǎo)致實驗失?。谎簶颖具^少，則看不到任何凝集現(xiàn)象導(dǎo)致無法判斷。量的匹配恰當(dāng)是實驗成功的一個關(guān)鍵，所以一定要在這個環(huán)節(jié)上做到恰如其分。盡量不要用牙簽去刮血，容易導(dǎo)致血清碰觸到指腹部血液，造成血清與指腹部血液相互混淆，致使實驗結(jié)果不準(zhǔn)確。如果要用，必須確保牙簽一端只用一次，可避免出現(xiàn)混淆現(xiàn)象。因此在實驗準(zhǔn)備階段要備好足夠量的牙簽，每人最好有5～6根以上。

在成功取血后，立即用牙簽進行充分?jǐn)嚢瑁康氖亲屟号c血清充分混合，利于發(fā)生凝集反應(yīng)。確保牙簽一端只攪拌一處，務(wù)必遵循“一次性”原則，否則實驗就因血清相互混淆而不準(zhǔn)確了。注意等待時間控制在10～15分鐘左右，保證有足夠的反應(yīng)時間，過短往往會引起誤判。也不能超過1小時或更長時間再去觀察反應(yīng)現(xiàn)象和判斷實驗結(jié)果，時間過長會因風(fēng)、干燥、變性等影響因素而不能正確反映凝集現(xiàn)象。

在結(jié)果的判斷上，典型凝集反應(yīng)表現(xiàn)為肉眼可見的泥沙樣沉淀，周圍的血清則變得透明清亮；凝血反應(yīng)表現(xiàn)為滴入血液量多，血液凝成塊，干積在凹面處；不發(fā)生凝集反應(yīng)則表現(xiàn)為一團混濁的、呈紅色的、不凝固的混合液（反應(yīng)現(xiàn)象的判斷見圖1）。若在足夠時間后，此時仍不易判斷則可再次用牙簽稍作攪拌，部分會出現(xiàn)清楚表現(xiàn)。一般肉眼能夠判斷，若實在難以判斷，可借助顯微鏡進行觀察。

圖1 ABO血型結(jié)果判斷（反應(yīng)表現(xiàn)）

對于其他存在的一些影響因素，可通過實驗前加強準(zhǔn)備與指導(dǎo)加以避免。實驗前可通過班主任了解學(xué)生的健康情況，對于有暈血或血液系統(tǒng)疾病者應(yīng)事先做到心中有數(shù)，做好相關(guān)預(yù)防工作，避免出現(xiàn)因采血暈倒、傳染疾病等情況的發(fā)生，特殊情況可準(zhǔn)予不做。指導(dǎo)學(xué)生正確地消毒和止血，保證實驗安全無事故。血清要盡可能在實驗前近期去采購，并正確保存在冰箱內(nèi)冷藏，防止因血清失效引發(fā)錯誤或失敗。因采血再加上檢測自己的血型原因，學(xué)生都表現(xiàn)得比較興奮和好奇，盡管再三要求安靜，但事實上還會很嘈雜，實驗要選在離其他班級較遠(yuǎn)的地方，避免因聲音嘈雜影響其他班級上課。實驗結(jié)束后無論成敗與否，要求每名學(xué)生認(rèn)真書寫實驗報告，并進行實驗總結(jié)。課后組織學(xué)生對班內(nèi)血型分布情況進行統(tǒng)計，要求與當(dāng)?shù)厝巳哼M行對比。

G424.31

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1671-1246（2012）10-0099-02