羅 衛(wèi)，馬春林，呂俊卿，蔡瑞康

白癜風是一種常見的色素脫失性皮膚病，其病理變化過程是黑素細胞功能減退或調(diào)亡，目前臨床上尚無客觀而又動態(tài)的檢測手段。共聚焦激光掃描顯微鏡（confocal laser scanning microscopy，CLSM）是一項新的無創(chuàng)性皮膚影像技術(shù)，具有在體、實時、動態(tài)三維計算機斷層成像特點[1]。我們將這一技術(shù)應(yīng)用于白癜風的檢測與觀察，結(jié)果報告如下。

1 材料與方法

1.1 檢測對象

46例患者均為我院門診患者，其中男性21例，女性27例，年齡為15～35歲，平均22.30歲；病程1～3年，平均2.58個月，白癜風患者均為初發(fā)皮損，全身系統(tǒng)及局部皮損部位未使用任何藥物治療，共檢測皮損69處，其中面部11處，頸部4處，胸背部21處，腹部19處，四肢14處。

1.2 儀器和設(shè)備

共聚焦激光掃描顯微鏡（Vivascope 1500型，美國Lucid 公司），為830nm光源波長的激光束，輸出功率為1.0～4.5mJ/ cm2可調(diào)，掃描深度為120um以內(nèi)的表皮層及真皮淺層組織。CLSM圖像基于細胞器和組織自身結(jié)構(gòu)的折射率不同而實現(xiàn)高分辨率。皮膚組織中黑素折射率為1.7，在圖像中呈現(xiàn)出較明亮而清晰的輪廓；角蛋白折射率為1.3，圖像中呈像較灰暗，二者之間的差異構(gòu)成自然對照。

1.3 檢測方法

分別選擇白癜風皮損及周邊正常皮膚進行檢測。檢測前于待檢部位涂上耦合劑，使CLSM的探頭緊貼皮膚，固定后開始掃描，調(diào)零后逐層向下切取橫斷面，到達基底細胞層后開始在同一橫斷面上取點掃描，觀察黑素顆粒形成的層面及各層亮度變化，圖像保存于計算機中。

1.4 皮損處黑素損傷程度評價標準[1]

較自身正常處成像相比較，輕度損傷：黑素環(huán)的數(shù)量及亮度減少約30%以下，黑素環(huán)形態(tài)輕度縮?。恢卸葴p少：黑素環(huán)數(shù)量及亮度減少約31%～50%，黑素形態(tài)中度縮小或變形；重度減少：黑素環(huán)數(shù)量及亮度減少約51%～80%，黑素環(huán)形態(tài)明顯變形；完全消失：黑素環(huán)數(shù)量完全消失。

2 結(jié)果

2.1 白癜風周邊正常皮膚黑素成像特點

絕大多數(shù)皮膚棘細胞層下部和基底層角質(zhì)細胞由于含有黑素顯示為明亮的圓形或橢圓形，大小、亮度和密度分布均勻，形成“黑素帽”或“花環(huán)狀”樣改變，構(gòu)成典型的“真皮乳頭色素環(huán)”樣結(jié)構(gòu)（圖1）。其中5處皮損周邊正常皮膚的“真皮乳頭色素環(huán)”的數(shù)量及亮度呈輕度減少樣改變。

2.2 皮損處黑素成像特點

基底層及真皮乳頭周圍的黑素呈不同程度的減少或完全消失。真皮乳頭色素環(huán)亦為圓形或橢圓形，但體積相對略小，亮度略低；呈散在分布或灶性聚集，部分患者基底層及真皮乳頭周圍的黑素完全消失。

2.3 皮損處黑素損傷程度

按評價標準，與正常皮膚相比，46例白癜風患者69處皮損處黑素均存在損傷，其中13處（18.84%）為輕度損傷（圖2），28處（40.85%）為中度損傷（圖3），19處（27.54%）為重度損傷（圖4），9處（13.04%）黑素完全消失（圖5）。

圖1 白癜風周邊正常皮膚黑素分布

圖2 白癜風皮損處黑素輕度損傷

圖3 白癜風皮損處黑素中度損傷

圖4 白癜風皮損處黑素重度損傷

圖5 白癜風皮損處黑素完全消失

3 討論

對于白癜風皮損處的黑素細胞的檢測和觀察長期以來一直缺乏理想的方法，既往依靠組織病理學觀察，但其存在過程復(fù)雜、耗時較長，僅能提供活檢部位的信息，不能連續(xù)觀察等諸多不足之處，因此，臨床迫切需要一種無創(chuàng)、實時的檢測手段與病理學相輔相成。共聚焦激光掃描顯微鏡是20世紀80年代發(fā)展起來的一種先進的細胞生物分析儀器，早期主要用于皮膚良惡性腫瘤鑒別診斷[2,3]，其成像機理是基于不同組織結(jié)構(gòu)中細胞的折射率不同，其中以黑素的折射率為最高，故含有黑素多的細胞可實時呈現(xiàn)出明亮輪廓，通常會在真皮乳頭上部或周圍聚集分別形成特征性的“帽狀”或“花環(huán)狀”結(jié)構(gòu)[4]。 因此，由于該檢測方法對于角質(zhì)細胞內(nèi)的色素的觀察具有一定的優(yōu)越性，故可以為白癜風的診斷提供組織學參考依據(jù)。本研究結(jié)果顯示，白癜風皮損處的棘細胞層下部和基底層中，黑素環(huán)密度及亮度呈不同程度減少或消失，而多數(shù)皮損周邊處的黑素環(huán)呈現(xiàn)明亮的圓形或橢圓形的環(huán)，構(gòu)成典型的“真皮乳頭色素環(huán)”樣結(jié)構(gòu)。此外，由于共聚焦激光掃描顯微鏡具有皮膚原位、在體、無創(chuàng)、動態(tài)、三維成像的特點，因此在無創(chuàng)條件下可以連續(xù)、動態(tài)的了解機體或組織顯微結(jié)構(gòu)，對可疑皮損部位可進行多次、重復(fù)觀察，提供客觀、量化的評估指標[5,6]，因此，通過對白癜風色素變化過程的動態(tài)監(jiān)測，可以對治療過程進行隨訪觀察和療效評估。

總之，我們認為皮膚共聚焦激光掃描顯微鏡是一項具有臨床應(yīng)用前景的技術(shù)，對白癜風皮損結(jié)構(gòu)的觀察在皮膚影像學方面具有一定的優(yōu)勢，可為白癜風的診斷和療效提供判定依據(jù)。

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[2]Caspers PJ, Lucassen GW, Puppels GJ, et al. Combined in vivo confocal raman spectroscopy and confocal microscopy of human skin [J]. Biophys J, 2003,85(1): 572-580.

[3]Gerger A, Koller S, Weger W, et al. Sensitivity and specificity of confocal laser-scanning microscopy for in vivo diagnosis of malignant skin tumors [J]. Cancer, 2006,107(1):193-200.

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