焦 陽 鄭鵬宇 于 兵

(丹東出入境檢驗(yàn)檢疫局 遼寧丹東 118000)

1 前言

丙酸鈣和丙酸鈉是面食、醬菜等食品中常用的食品防腐劑，檢驗(yàn)時(shí)多將其轉(zhuǎn)變?yōu)楸嵋砸合嗌V進(jìn)行測(cè)定［1］。由于近幾年丹東局在出口韓國(guó)的鹽漬辣椒、醬黑豆、鹽漬沙參、鹽漬蘇葉等醬菜中曾檢出丙酸超標(biāo)，而韓國(guó)近期又提高了技術(shù)壁壘，其食品藥品管理局規(guī)定［2］除面包、奶酪果醬類食品外其他類食品不得使用丙酸，且丙酸檢出限量為10 mg/kg(我國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)丙酸鹽檢出限為30 mg/kg)。因此，根據(jù)我國(guó)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)和進(jìn)口國(guó)的限量要求，為了提高判定準(zhǔn)確度和檢測(cè)靈敏度，使檢出的結(jié)果更加可靠，減少出口企業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失，本方法在原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，采用氣相色譜質(zhì)譜法測(cè)定醬菜中的丙酸殘留量并以乙酸為內(nèi)標(biāo)計(jì)算測(cè)定結(jié)果，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

2 材料與方法

2.1 材料

2.1.1 樣品

樣品為出口韓國(guó)腌漬辣椒，由丹東三元食品有限公司按照韓國(guó)傳統(tǒng)工藝制備，鹽水濃度11%，食用醋酸濃度1.0%。

2.1.2 儀器

7890－5975C型氣相色譜－質(zhì)譜儀:美國(guó)Agilent公司，配電子轟擊源;Distillation Unit K－355水蒸汽蒸餾裝置:瑞士BUCHI公司。

2.1.3 試劑

丙酸標(biāo)準(zhǔn)品:SUPELCO公司，批號(hào)LB63094 44－2769;乙酸:市售品，含量大于99.7%;實(shí)驗(yàn)用水:均為Milli－Q高純水。

2.1.4 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液

準(zhǔn)確稱取適量的丙酸標(biāo)準(zhǔn)品用水配成質(zhì)量濃度為1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于4℃冰箱保存。根據(jù)需要用水將儲(chǔ)備液稀釋成10μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1．教學(xué)方式滿意度評(píng)分比較：LBL+CBL組滿意度明顯高于LBL組和CBL組，尤其在學(xué)習(xí)自主能力培養(yǎng)、分析問題能力方面，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值均<0.05)；在專業(yè)知識(shí)提升方面，LBL組與CBL組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

2.1.5 內(nèi)標(biāo)溶液

準(zhǔn)確量取乙酸0.5mL，置100mL容量瓶中，以水稀釋至刻度，搖勻。

2.2 方法

2.2.1 GC －MS 條件

2.2.1.1 GC 條件

HP－INNOWAX石英毛細(xì)管柱:30m×0.25mm×0.25μm;載氣:氦氣，恒流流速為 1.0mL/min;柱溫升溫程序:初始溫度60℃，以10℃/min的速率升至200℃，保持10min;進(jìn)樣口溫度:200℃;接口溫度:280℃;不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量:1μL。

2.2.1.2 MS 條件

四極桿溫度:150℃;離子源溫度:230℃;電子能量:70ev;數(shù)據(jù)采集模式:選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)選擇離子(相對(duì)豐度)為:m/z 44(100%)。

取樣品于均質(zhì)器中高速均質(zhì)2min，然后準(zhǔn)確稱取均質(zhì)后的樣品10g(精確到0.1g)于蒸餾管中，加水100 mL、磷酸10 mL，調(diào)節(jié)蒸餾時(shí)間為15min，蒸汽壓為80%;收集蒸出液于250mL量瓶中;待收集留出液尚余約5mL時(shí)，停止蒸餾;準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液2.5mL后再加水至刻度，搖勻。

2.2.3 測(cè)定

取上述樣品處理液1μL注入氣相色譜儀，按2.2.1.1和 2.2.1.2 條件測(cè)定，并以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算丙酸的殘留量。

3 結(jié)果與討論

3.1 樣品提取方法的優(yōu)化

丙酸測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)是采用水蒸氣蒸餾法對(duì)丙酸進(jìn)行提取，該方法提取效率高而且樣品同時(shí)得到凈化。本方法采用瑞士BUCHI公司產(chǎn)水蒸氣蒸餾裝置，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，選擇蒸餾時(shí)間15min，蒸汽壓為80%。

3.2 選擇離子的確定

本方法通過對(duì)丙酸和乙酸的全掃描質(zhì)譜圖以及實(shí)際測(cè)定中的情況確定了丙酸質(zhì)譜的定性、定量離子分別為 m/z74、57、45、28，見圖 1 － 圖 5;以丙酸m/z74為定量離子，以乙酸m/z60為內(nèi)標(biāo)離子。

圖1 丙酸的全掃描質(zhì)譜圖

圖2 乙酸的全掃描質(zhì)譜圖

圖3 丙酸的SIM質(zhì)譜圖

圖4 丙酸及內(nèi)標(biāo)的SIM－TIC圖(Tr=9.272min內(nèi)標(biāo);Tr=10.534 min丙酸)

圖5 樣品及內(nèi)標(biāo)的SIM－TIC圖(Tr=9.271min內(nèi)標(biāo);Tr=10.551 min丙酸)

3.3 線性關(guān)系和檢出限

準(zhǔn)確量取丙酸儲(chǔ)備液 1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、5.0 mL、10.0 mL，分別置于 100mL 容量瓶中，再準(zhǔn)確加入內(nèi)標(biāo)溶液2.5mL，以水稀釋至刻度，搖勻。準(zhǔn)確吸取上述各濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液各1μL，注入色譜儀，按2.2.1.1 和2.2.1.2 條件測(cè)定，記錄色譜峰面積，結(jié)果表1。

表1 線性關(guān)系實(shí)驗(yàn)結(jié)果

以峰面積比為縱坐標(biāo)Y，標(biāo)準(zhǔn)品濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=0.1469+0.04217X，r=0.9995。

丙酸檢出限(LOD)是在10mg/kg添加水平下，以3倍的信噪比計(jì)算，可達(dá)到1mg/kg，能滿足進(jìn)口國(guó)技術(shù)要求。

3.4 回收率和精密度

準(zhǔn)確稱取已經(jīng)粉碎不含丙酸的腌漬辣椒10g共8份，分成4組，每組2份，丙酸的添加量分別為100μg、50μg、20μg、10μg，按樣品處理同法操作，并按上述條件測(cè)定以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率測(cè)定結(jié)果

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取線性關(guān)系試驗(yàn)樣品1份(濃度30μg/mL)，于室溫條件下放置，并在 1h、2h、4h、6h、8h 后取樣測(cè)定，結(jié)果見表3。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

3.6 樣品測(cè)定

按上述實(shí)驗(yàn)條件共檢驗(yàn)鹽漬辣椒、醬黑豆、鹽漬沙參、鹽漬蘇葉84批次，其中鹽漬辣椒2批檢出丙酸，含量分別為246mg/kg、200mg/kg;鹽漬黃豆葉1批檢出丙酸含量為143mg/kg。

4 討論

本方法除了采用保留時(shí)間定性以外，還通過定性離子與定量離子的峰強(qiáng)度比值進(jìn)行定性，這樣增加了定性結(jié)果的可靠性，在降低本底的同時(shí)提高了分析的靈敏度。

以氣質(zhì)聯(lián)用方法測(cè)定醬菜樣品種中丙酸的含量，可大大提高檢測(cè)的靈敏度，滿足了對(duì)某些國(guó)家出口檢驗(yàn)的特殊需求。由于丙酸的最終測(cè)定溶液為水溶液，實(shí)驗(yàn)證明以外標(biāo)法定量重現(xiàn)性較差，而改用內(nèi)標(biāo)法，以峰面積比值計(jì)算測(cè)定結(jié)果，可有效地改善測(cè)定的重現(xiàn)性，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

［1］ GB/T 23382－2009食品中丙酸鈉、丙酸鈣的測(cè)定高效液相色譜法［S］.

［2］ Korea Food＆ Drug Administration Inspection of Imported Food.2007.